变形假单胞菌的一种转录调节子基因对斜带石斑鱼免疫应答的影响

发布时间：2020-07-22 11:50

【摘要】：变形假单胞菌是重要的水产病原菌,近年来给海水养殖业带来了重大的经济损失。变形假单胞菌的致病性与海水温度密切相关,发病温度范围在15-20℃。为探究变形假单胞菌致病性温度依赖的分子机制,本实验室前期测定了不同温度下变形假单胞菌的转录组。结果发现变形假单胞菌的一种转录调节子基因L321_20267的表达水平在18℃显著地高于28℃,qRT-PCR也验证了这一结果,因此猜测L321_20267基因与变形假单胞菌毒力有关。为研究L321_20267基因与变形假单胞菌毒力的关系,本文设计并合成了5对针对L321_20267基因的shRNA序列,用本实验室改造的pCM130/tac质粒来构建重组质粒,结果发现所构建的变形假单胞菌5个突变株的L321_20267基因都被显著沉默,其中突变株L321_20267-shRNA882减少量最高达到90.63%。以变形假单胞菌L321_20267-RNAi(L321_20267-shRNA882)沉默株感染斜带石斑鱼比野生株感染斜带石斑鱼的死亡率下降了50%,斜带石斑鱼开始出现死亡的时间延迟了以及脾脏白点病症状也减轻了。取变形假单胞菌L321_20267-RNAi沉默株和野生株感染斜带石斑鱼24h的脾脏进行RNA-seq比较分析。L321_20267基因的沉默导致了脾脏的转录组表达水平也发生了重大的变化。GO和KEGG分析的结果表明变形假单胞菌L321_20267基因引起了宿主脾脏中丝氨酸水解酶、抗原处理和呈递通路、B细胞受体信号通路和趋化因子信号通路的基因发生了显著的变化。同时,宿主免疫基因分别与不同数目的miRNA和lncRNA相关联,一些miRNA可能调控多个基因。本文的研究结果表明:1、L321_20267是变形假单胞菌的一个毒力基因。2、宿主免疫通路的上调使石斑鱼更加的容易杀死L321_20267-RNAi沉默株变形假单胞菌。3、免疫基因的表达受到miRNA和lncRNA复杂的调控。
【学位授予单位】：集美大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S943
【图文】：

图 2-1 质粒 pCM130/tac 图谱1）挑单菌落：含有四环素的平板固体 LB 培养基中落。（2）摇菌培养：单菌落接种到 30mLLB 液体在 0.5 左右。（3）质粒提取：1、取 OD600值为 0.5

图 2-2 变形假单胞菌基因 L321_20267 在不同温度下的表达情况表误差范围，* P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001（下同）。质粒测序测序公司所测得的测序结果显示在图 2-3 中。图中均能找到一

RNA提取后的琼脂糖凝胶电泳图

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