高淀粉日粮对吉富罗非鱼生长、胰岛素受体及酪氨酸激酶活性的影响

发布时间：2020-07-25 20:27

【摘要】：鱼类营养研究领域的一个重要课题是如何提高鱼类对饲料糖的利用,充分发挥糖的供能功能,降低蛋白质作为能量的消耗。吉富罗非鱼具有生长速度快、出肉率高、起捕率高等特点,已经成为我国目前淡水养殖业中的重要品种。为了研究不同水平淀粉对吉富罗非鱼生长、血液生化和免疫指标以及组织胰岛素受体水平、酪氨酸激酶活性等影响,探讨高淀粉日粮对吉富罗非鱼影响的营养生理机制,探索鱼类碳水化合物代谢的相关分子调控机制,本试验选用平均体重约为31.73±0.68 g的吉富罗非鱼360尾,随机分配到12个水循环养殖箱。试验分为3个处理,每个处理设4个重复,每个重复30尾鱼。设置了添加不同水平碳水化合物的等能饲粮,其中一组饲粮添加0%的α-淀粉为低淀粉组(LS),另两组分别添加18%和36%的α-淀粉为中淀粉组(MS)和高淀粉组(HS)。在可控的循环水系统中饲养70天,采用常规分析、生化分析和分子生物学方法进行测定,结果显示:1.高淀粉组的增重率和特定生长率显著低于低淀粉组(P0.05),而中淀粉组与低淀粉组差异不显著,增重率和特定生长率随日粮淀粉水平的提高而呈下降趋势;高淀粉组和中淀粉组都显著(P0.05)提高了吉富罗非鱼脏体比和肥满度,脏体比和肥满度均表现出随着日粮淀粉水平的增加而提高的趋势。2.日粮不同水平淀粉对吉富罗非鱼全鱼的水分、粗蛋白、灰分没有显著影响,但是高淀粉组的粗脂肪显著高于其他两组(P0.05)。3.高淀粉组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿酸浓度显著高于低淀粉组(P0.05),高淀粉组的超氧化物歧化酶、溶菌酶浓度显著低于低淀粉组(P0.05),而中淀粉组与低淀粉组的血清生化及免疫指标差异不显著(P0.05)。4.高淀粉组和中淀粉组肝糖原、肌糖原含量均显著高于低淀粉组(P0.05),无论日粮淀粉水平高低,肝糖原的含量总是高于肌糖原的含量;高淀粉组和中淀粉组血糖浓度均显著高于低淀粉组(P0.05);不同淀粉水平没有显著影响胰岛素浓度。5.肌肉中,中、高淀粉组的酪氨酸激酶(TKA)浓度显著高于低淀粉组(P0.05),而肝脏中不同淀粉组的酪氨酸激酶(TKA)没有显著差异。中淀粉日粮提高了肌肉和肝脏中胰岛素受体(IR-1)基因mRNA的表达,高淀粉日粮则降低了肝脏和肌肉中胰岛素受体(IR-1)基因mRNA的表达,但是差异不显著。研究结果表明,日粮添加一定水平的淀粉,没有影响吉富罗非鱼的生长,反而提高了肌肉和肝脏中胰岛素受体(IR-1)基因mRNA的表达,增加了肌肉组织中酪氨酸激酶浓度,从而提高了吉富罗非鱼对日粮碳水化合物的利用。但是高淀粉日粮抑制了吉富罗非鱼的生长和免疫功能,降低了肝脏和肌肉组织中胰岛素受体(IR-1)的基因表达,增加了肌肉组织中酪氨酸激酶浓度。高淀粉日粮对吉富罗非鱼糖代谢关键酶及相关基因的表达产生了影响。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S917.4
【图文】：

细胞膜的胰岛素受体（insulin receptor，IR）的 α 亚基结合，解除 α 亚基对 亚基的抑制作用，使 亚基的酪氨酸蛋白激酶（protein tyrosine kinase，PTK）活化；胰岛素受体底物(insulin recept-or substrate，IRS)被 PTK 磷酸化而激活，进一步引导 IR 本身磷酸化和几种底物蛋白磷酸化；IRS 是一种船坞蛋白（docking protein），结合含肉瘤同源区段 2（Src ho-mology 2 domain,，SH2）结构域的信号分子，从而激活多种下游信号通路引发磷酸酶和蛋白激酶的反应，发挥重要功能。胰岛素受体（insulin receptor，IR）是一种跨膜糖蛋白，在胰岛素结合到靶细胞的过程中发挥重要作用。鱼类的 IR 受相关生理调节，其分子结构相似于哺乳动物（Navarret al.，2001）。胰岛素受体是一种跨膜的糖蛋白，其变构酶性质显著，由 2 个在细胞质膜外的 α 亚基和 2 个跨膜的 亚基组成，两种亚基通过 S-S 键连接。在多数鱼类中胰岛素受体只有 2 种亚型（Caruso and Sheridan，2011），而虹鳟的胰岛素受体却有 4 种 IR亚型（IR1、IR2、IR3 和 IR4）（Caruso et al.，2010）。

高淀粉日粮对吉富罗非鱼生长、胰岛素受体及酪氨酸激酶活性的影响按照 SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)试剂盒说明进行调整为 25ul 反应系，qRT-PCR 最佳反应条件为：95℃，30s，预变性；95℃变性 5s，60℃，30s 退火进行 40 个循环。2.2.9.3 荧光定量 PCR 引物特异性验证以新提取的吉富罗非鱼肝脏样品和新提取的吉富罗非鱼肌肉样品反转录后进行合，以此为模板进行验证。JN967750（IR-1）引物验证结果：

图 2：IR-1 扩增曲线Fig 2 Ampliation curve of IR-12.2.9.4 各个基因标准曲线的建立以各组肝脏和肌肉提取的 Total RNA（1000ng）反转录获得的 cDNA 作为标准品，用 EASY Dilution 按 5 倍梯度稀释作为模板，制作 AB037865（β-action）和 JN967750（IR-1）基因的标准曲线。

【参考文献】

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本文编号：2770324