盐度对黄姑鱼生存生长、非特异性免疫及肠道菌群的影响

发布时间：2020-08-05 07:38

【摘要】：黄姑鱼(Nibea albiflora)属于鲈形目Perciformes、石首鱼科Sciaenidae、黄姑鱼属Nibea,是我国重要的海水经济鱼类,具有生长快、抗逆性强、繁殖力强等特点,是开展近海网箱养殖和工厂化养殖的适宜品种。黄姑鱼是一种适应盐度范围较广的品种,属于广盐类海水鱼。水体盐度是鱼类生长、代谢和繁育的重要的环境因子,盐度变化对鱼类健康状态密切相关。迄今,关于盐度对鱼类生长、组织抗氧化酶活和非特异性免疫影响的研究较热门,而盐度对肠道微生物多样性的影响的相关研究文献少有报道。本论文在研究盐度对黄姑鱼耐受性、生长、组织抗氧化酶活和非特异性免疫及代谢指标的影响基础上,采用石蜡切片,研究了盐度对组织结构的影响,运用16S rDNA扩增子测序技术,研究了盐度对肠道微生物多样性的影响,并探究了相应的微生物的功能。旨在不同盐度水体中黄姑鱼的健康养殖提供资料。研究结果由三部分构成。1.黄姑鱼盐度耐受性研究。本部分实验共分为盐度S0(代表盐度为0)、S2、S4、S6、S8、S40、S45、S50、S55、S60组,共10组,每组3平行。采用了两种规格的黄姑鱼,即规格Ⅰ:平均体质量为180.29±2.26 g(平均值±SD),平均全长为25.7±0.51cm;规格Ⅱ:平均体质量为17.3±0.8 g,平均全长为9.52±0.7cm。将黄姑鱼从自然海水直接移入各盐度组中,经过7天短期盐度胁迫,结果发现:盐度2-45下存活率均为100%。在S0、S55、S60中均全数死亡,其中S0、S55、S60三组全致死时间,规格Ⅰ分别为10.33±1.9 h,29.55±3.2 h,12.67±1.6 h;规格Ⅱ分别为1.22±0.5 h,67.5±4.3 h,3.8±0.9 h。1周内,规格Ⅰ、Ⅱ黄姑鱼在S50组中存活率分别为15±7.8%、30±4.5%。在S0组中12 h内,两种规格黄姑鱼死亡率均100%,其中,全致死时间高盐S60组明显小于S55组,当盐度超过50‰发现盐度越高,其耐受能力越低。将半致死时间(y)与相应的盐度(x)拟合成二次函数回归曲线为,规格Ⅰ:y=-0.199x~2+18.405x-380.75,R~2=0.999,规格Ⅱ:y=-0.093x~2+9.67x-243.5,R~2=0.998。盐度超过一定范围,半致死时间随盐度升高而减少,即盐度耐受能力和盐度呈显著负相关关系,随着盐度增高,其耐受能力先缓慢下降,后是急剧下降。在此,笔者得出两种规格黄姑鱼的耐受盐度不低于2,耐受盐度均不高于50。规格大小方面,大规格黄姑鱼盐度耐受力强于小规格黄姑鱼。2.盐度对黄姑鱼生长、组织抗氧化酶活和非特异性免疫及代谢指标的影响。本实验设置5个盐度组,即S6、S12、S18、S30和S42组,每组三个平行。历经7周长期盐度胁迫实验,结果表明:(1)随着盐度的升高,特定生长率降低。(2)通过石蜡切片,发现高盐组、低盐组和对照组肝脏组织差异不明显;鳃组织中随着盐度的增高,泌盐细胞明显增多。(3)本次研究中发现,饵料系数低盐S6、S12和S18组均与对照组无显著差异(P0.05),而高盐组S42显著低于对照组(P0.05),肝体比与饵料系数的变化一致。(4)黄姑鱼鳃和肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD),S6和S42组均高于S30组(对照组)。黄姑鱼鳃中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活均随着盐度升高,也相应逐渐升高,但无显著性差异,而血清中两种酶活S6和S42组显著低于S30组。谷草转氨酶(AST)酶活在鳃组织中,S6组显著高于其它组,且S42组中酶活最低,而谷丙转氨酶(ALT)随着盐度升高先上升,后下降再升高。血清中代谢指标,如乳酸脱氢酶(LDH)在各组间无显著性差异,肌酐(Cr)、甘油三酯(TG)变化趋势随着盐度升高先升后下降,葡萄糖(GLU)先下降再上升后下降,各代谢指标均在盐度42组时最低(P0.05)。3.盐度对肠道菌群的影响。本实验共分为盐度S6、S30、S42组,共3组,每组分别设置3个平行,历经7周长期盐度胁迫实验,实验结束,取黄姑鱼后肠进行微生物多样性分析。结果表明:(1)在S6组中,共有524个OUT聚类(一个OUT相当于一种细菌);S30组,共有494个OUT聚类;S42组,共有567个OUT聚类。(2)其中门水平上三个盐度组中优势细菌种群主要分布于变形菌门和软壁菌门,均在在各组所有样品中占细菌OUT总数的90.79%-98%。在所有细菌门中,绿弯菌门和疣微菌门S6组显著高于S30组;而拟杆菌门S30组显著高于S6组(P0.05)。疣微菌门、绿弯菌门和螺旋体菌门细菌,S42组显著高于S30组(P0.05)。(3)从属水平分析结果表明:在S6组和S30组,优势细菌为短波单胞菌属(分别为25.99%和19.06%)、螺原体属(分别为15.18%和13.8%)、伯克氏菌属(分别为14.14%和18.19%)、支原体属(分别为13.1%和6.95%)。S42组优势细菌为螺原体属(24.53%)、短波单胞菌属(19.81%)、支原体属(10.66%)。S6和S30组之间有25种属的细菌含量具有显著性差异,其中有18种S6组显著高于S30组(P0.05)。S42和S30两组之间有57种属的细菌含量具有显著性差异,其中有37种S42组显著高于S30组(P0.05)。(4)采用RDP和NT-16S数据库进行物种注释发现:高盐S42组,致病性弧菌显著高于对照组(P0.05),高盐组中益生菌减少,如红环菌属具有为宿主提供生长因子,减少了,表明高盐环境并不利于黄姑鱼的生长或维持肠道健康。
【学位授予单位】：浙江海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S917.4
【图文】：

半致死时间,盐度,黄姑鱼,耐受性

图 2-1 各盐度组中半致死时间分布Fig. 2-1 Distribution of median lethal time in each salinity group大小对黄姑鱼盐度耐受性的影响。

泌盐,鳃组织,不同盐度,细胞

而鳃中未发现溶解或者膨大现象，其中，鳃组织中泌盐细胞随着盐度的升高，明显增多，如图3-1 。图 3-1 不同盐度组中肝脏和鳃组织结构的变化(鳃中箭头所指的为泌盐细胞)Fig.3-1 Changes in liver and Gill tissue structure in different salinity group

抗氧化酶,不同盐度

图 3-2 不同盐度组中组织抗氧化酶活Fig.3-2 Tissue antioxidant enzyme activities in different salinity groups

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