无乳链球菌对罗非鱼头肾损伤的病理学研究

发布时间：2020-08-07 15:12

【摘要】：目前,罗非鱼是世界第三重要养殖鱼类,其养殖产量预计于2025年达世界水产养殖总产量的六成。无乳链球菌(Group B Streptococcus,GBS)是危害罗非鱼养殖的重要细菌性病原之一,GBS可造成罗非鱼患严重疾病,故GBS病是我国亟需净化水生动物第三类疾病。目前,罗非鱼GBS病的应用研究已得到足够重视和支持,也取得了一定成果,头肾是鱼类重要的免疫造血器官,也是GBS主要侵袭的部位。然而,对GBS对头肾造成的病理损伤鲜有报道。因此本论文对感染GBS罗非鱼的头肾开展动态病理损伤研究,以期丰富罗非鱼链球菌病的基础研究,为后续的应用研究奠定基础,本研究选用(250±10)g健康吉富罗非鱼20尾,对头肾进行大体、组织学和超微结构观察;160尾,随机分为5组,使用剂量为1.0×10~7 cfu GBS对罗非鱼进行攻毒,于注射GBS后第0、4、8、24和72 h采集头肾。用光镜、电镜技术、流式细胞术和SABC免疫组化染色等方法研究头肾正常结构和GBS动态分布规律,建立病理评分体系,对感染进行分期,探讨GBS量对各头肾病理分期的影响,为揭示头肾病理损伤机制和GBS的致病机制提供新思路。结果如下:1:罗非鱼头肾位于心腹腔隔膜背前方,分左右两瓣,成年罗非鱼头肾组织内无肾单位,组织学上,可分为2区,中央区和外周区,中央区由淋巴样组织和血窦构成,含黑色素巨噬细胞中心,淋巴组织排列成索状,围绕血管呈放射状分布,淋巴索之间由血窦隔开,外周区则以弥散性淋巴组织为特征,血窦较少也较小,是典型的造血淋巴组织。2:感染无乳链球菌后,鱼体大体动态病理变化主要体现在内脏器官的充血、出血、肿大,角膜浑浊和脑软化,头肾主要体现在颜色和头肾体指数,表现为0-4h,颜色变暗,4-24h,明显肿大,颜色变暗,呈不同程度的紫红色,24-72h,头肾肿大和颜色变暗的程度虽比4-24h减轻,但仍然肿大和颜色变暗;头肾体指数在攻毒后0-4h,极显著增大,8-24h,显著增大,24-72h,极显著增大。主要的组织动态病理学变化为:攻毒后4-8h,黑色素巨噬细胞中心数量明显减少,体积缩小,成分少,着色浅,结构松散,动脉内皮细胞脱落,开始出现炎性细胞边移、贴壁;8-24h,数量减少甚至消失,仅存少量棕色颗粒,内皮细胞肿胀、脱落,中膜平滑肌变性、坏死,内膜、中膜、外膜各层均有水肿及炎性细胞浸润,淋巴索排列紊乱,血窦淤血严重,血管通透性升高,血管旁出现均质红染的炎性渗出物和炎性细胞,24h时,头肾内成团聚集大量GBS,GBS表面有荚膜,在淋巴细胞、巨噬细胞和红细胞内存活;24-72h,黑色素巨噬细胞中心大量增加,体积小,成分消失,不能着棕褐色或黑色颗粒,结构松散呈空泡,间质变成境界不清条团状无结构红染物质,淋巴细胞和巨噬细胞减少,充血严重,黑色素巨噬细胞中心坏死溶解,见大量坏死区。细胞主要的动态病理变化为:攻毒后0-24h,活细胞数量无显著差异;24-72h,活细胞数量极显著减少,组织中细胞发生大量凋亡坏死。细菌在攻毒后4-8h,GBS量显著增多,24-72h,GBS量极显著增多。结合典型动态病理变化和GBS含量,可诊断出感染1.0×10~7 cfu GBS的罗非鱼头肾患急性细菌性化脓性炎症,病程分3期,反应期(0-4h):大体正常,头肾体指数增大,黑色素巨噬细胞中心和血管正常,无GBS,无坏死区;缓滞期(4-8h):大体正常,头肾体指数显著增大,黑色素巨噬细胞中心和淋巴细胞减少,头肾血管损伤,组织内开始出现少量GBS,无坏死区;危亡期(8-24h):鱼体出现典型症状,头肾体指数显著增大,黑色素巨噬细胞中心和淋巴细胞减少,头肾血窦内大量红细胞充盈、淤血,有大量炎性渗出和GBS,无坏死区;危亡期(24-72h):鱼体出现典型症状,头肾体指数显著增大,黑色素巨噬细胞中心增多,充血,有大量GBS,有坏死区。综上:GBS感染吉富罗非鱼后,头肾结构受到明显损伤,过度炎症反应可能是导致鱼体急性死亡的重要原因。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S943
【图文】：

2.1 头肾的解剖结构观察头肾的解剖位置：取10尾健康罗非鱼，剖解前用0.1g/LMS-222麻醉，死后置于冰上。将5尾罗非鱼左侧平放（图2-1a），从肛门前端起剪，斜向上至侧线，再沿侧线下方剪至胸鳍上方，接着斜向下剪至围心腔前端（图2-1b），暴露罗非鱼腹腔，观察头肾位置。同时，将5尾罗非鱼右侧平放，按相同方式解剖，观察头肾位置。图2-1 罗非鱼解剖过程Figure 2-1Anatomical procedure头肾的形态观察：将头肾暴露后，观察头肾的形态和颜色，再沿着体腔壁小心分离出组织，剔除周围脂肪，并用PBS洗涤表面血液

3 结果3.1 大体位置罗非鱼沿左侧剖开后，可见肠道和肝脏充满整个腹腔（图2-2a），取除整个腹腔内容物后，可见头肾位于肾脏最前端，头部后方，围心腹腔隔膜背前方，颜色偏暗红，与体肾连接，呈典型Y字形，沿体柱向后延伸（图2-2b），罗非鱼头肾左右各一，对称分布，分为2叶，被膜光滑，30g-360g健康罗非鱼头肾的绝对重量为（0.0327-0.822g）

血窦的大小和形状不规则。外周区则以淋巴细胞排列密集的弥散性淋巴组织为特征，血窦较少也较小。表面有一层胶原纤维结缔组织性薄膜，胶原纤维成束平行排列，边缘部分细胞密度大且细胞间隙小（图2-3 B）。图2-3 罗非鱼头肾分区 H&E染色图A.头肾横切面。分为2区：1.中央区，2.外周区；B. 3.被膜。

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本文编号：2784159