花羔红点鲑卵黄蛋白原的纯化、性质鉴定及含量季节性变化规律的研究

发布时间：2020-08-14 14:46

【摘要】：本试验运用免疫学的方法检测了花羔红点鲑在不同季节时血液中的卵黄蛋白原含量。通过对花羔红点鲑不同季节时血液中卵黄蛋白原含量变化的研究,能够更加深入地了解花羔红点鲑卵黄蛋白原的理化性质,并了解花羔红点鲑体内卵黄蛋白原数量与其性成熟程度之间的关系,这为今后开展鲑科鱼类的卵黄蛋白原发生及合成途径等方面的研究工作提供了理论基础。本试验使用3龄花羔红点鲑作为试验对象,腹腔注射雌二醇诱导其产生卵黄蛋白原,采用Sephacryl S-300丙烯葡聚糖凝胶层析的方法分离和纯化花羔红点鲑卵黄蛋白原,并对其理化性质进行了研究。试验结果表明:使用Sephacryl S-300丙烯葡聚糖凝胶层析法纯化血浆中的卵黄蛋白原的效果十分明显。试验对纯化后的卵黄蛋白原进行了Native-PAGE和SDS-PAGE电泳,结果表明,花羔红点鲑卵黄蛋白原的分子量约为590 kDa,其亚基分子量约为200 kDa。本试验运用血浆中分离纯化之后的卵黄蛋白原作为抗原免疫家兔,制备了兔抗卵黄蛋白原抗血清,并对此抗血清的特异性进行检测。由于卵黄蛋白原抗血清具有高度特异性,因此建立间接酶联免疫吸附方法测定卵黄蛋白原在花羔红点鲑血液内的含量。兔抗卵黄蛋白原抗血清的最佳工作浓度为1:32000,包被卵黄蛋白原的最佳工作浓度为130.7 ng/mL,标准曲线的检测范围在32.6ng/mL至2094.5ng/mL之间,批内变异系数和批间变异系数分别为4.612%和4.337%。本试验运用ELISA方法检测了花羔红点鲑在各个季节血液中卵黄蛋白原含量的变化,结果表明:花羔红点鲑体内的卵黄蛋白原含量呈现周期性变化,每年产卵前的6月份体内卵黄蛋白原含量达到极高水平,然后逐渐降低,产孵后的12月份体内卵黄蛋白原含量降至极低的水平,随后的几个月血液中卵黄蛋白原含量又开始逐渐升高。参照以往的研究和本试验结果,表明卵黄蛋白原是存在于花羔红点鲑血液中的一种雌性特异蛋白,卵黄蛋白原是卵黄蛋白的前体,而卵黄蛋白对胚胎和初期仔鱼发育极为重要,因此卵黄蛋白原对鱼类的繁殖和营养有着重要意义。卵黄蛋白原在血液中的含量是不断变化的,本试验研究了花羔红点鲑体内卵黄蛋白原的理化性质和其含量的变化,本次试验结果为今后能够更加充分了解花羔红点鲑的繁殖生理特点提供了一定的试验基础和理论依据,并且对花羔红点鲑的养殖、保护、开发和利用都有着十分重要的意义。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
【图文】：

图谱,雌鱼,电泳条,雄鱼

（见图3.1）结果表明,诱导组雌鱼和对照组雌鱼血浆的电泳条带明显比对照组雄鱼多出了大分子质量条带，符合了Vg是雌性特异蛋白这一性质，而且诱导组雌鱼和对照组雌鱼的电泳条带有明显的不同，初步判断这是受E2诱导的结果。M 1 2 3669kDa440kDa232kDa140kDa66kda图 3.1 花羔红点鲑经诱导后的 Native-PAGE 图谱M：蛋白 Marker；1：对照组雄鱼血浆的电泳条带；2：诱导组雌鱼血浆的电泳条带；3：对照组雌鱼血浆的电泳条带Fig.3.1 Native-PAGE of Salvelinus malm Vg induced by E2M:Protein marker.1: control male. 2: E2induced female

洗脱曲线,洗脱曲线,层析,血浆

利用丙烯葡聚糖凝胶 Sephacryl S-300 层析柱来分离蛋白质，在 280 nm光的吸收值。由图 3.2 可见，Sephacryl S-300 的分离效果比较好，共产峰，纯化效果达到了预期。把第一个洗脱峰收集起来之后，用 20%聚乙浓缩。

卵黄蛋白原,图谱

.3 花羔红点鲑卵黄蛋白原经纯化后 Native-PAGEative-PAGE of purified Salvelinus malm Vg by Sepha

【参考文献】