长牡蛎（Crassostrea gigas）微卫星多重PCR体系构建及生长相关经济性状遗传参数研究

发布时间：2020-08-25 01:01

【摘要】：长牡蛎(Crassostrea gigas)是我国乃至全世界养殖产量最大的一种经济贝类,也是世界最重要的水产养殖品种之一。目前我国长牡蛎育苗所用亲本都是未经遗传改良的野生群体,导致了长牡蛎生长性状退化、品质下降,也制约了长牡蛎养殖业的健康、持续发展。因此,培育出生长快、抗逆性高的长牡蛎新品系是选择育种计划的主要任务,也是解决这些问题最有效的途径之一。本研究构建了两组长牡蛎微卫星五重PCR体系并用于家系鉴定。首次测量了长牡蛎的闭壳肌拉力,选择部分因子交配设计构建长牡蛎家系,采用家系混合养殖的方式来获得实验材料。运用ASReml R软件的混合线性模型和约束极大似然法(REML)估算生长相关性状的遗传力,遗传相关,表型相关和基因型-环境互作(Genotype×Environment,G×E)效应,为长牡蛎进一步选育、种质改良和新品种培育提供基础数据和理论参考。1、长牡蛎微卫星多重PCR体系构建及其在家系鉴定中的应用筛选多态性高、特异性好、片段大小适中的10个长牡蛎微卫星位点进行优化组合,根据扩增片段大小及同一荧光不重叠原则构建了两组五重pcr体系。运用cervus3.0软件对0527组27个长牡蛎全同胞家系的643个子代和0612组27个全同胞家系382个子代分别进行亲权鉴定。结果发现,用两组微卫星五重pcr鉴别时,在0527组和0612组的鉴定成功率均为100%;只用第一组微卫星五重pcr,可以将0527组96%的子代和0612组96%的子代鉴定到亲本;只用第二组微卫星五重pcr,可以将0527组97%的子代和0612组95%的子代鉴定到亲本。本研究中筛选出的两组微卫星五重pcr体系在两组家系中的鉴定效率均较高,可以快速有效地将子代个体鉴定至所属父母本,在长牡蛎家系鉴定中具有很好的应用价值。2、长牡蛎生长相关经济性状遗传参数估计长牡蛎的壳长(shelllength,sl),壳高(shellheight,sh),壳宽(shellwidth,sw),湿重(wetweight,ww),肉重(meatweight,mw),闭壳肌重(adductormuscleweight,amw)和闭壳肌拉力(shell-closingstrength,ss)七个性状的遗传力分别为0.24±0.09,0.11±0.07,0.35±0.15,0.37±0.16,0.31±0.14,0.36±0.14和0.25±0.13。各性状的遗传力均位于0.11-0.37,除sw外,其它性状的遗传力均为中-高遗传力。各性状间的遗传相关和表型相关均呈现正相关:遗传相关值位于0.53-0.99,均属于中-高相关;但各性状间的表型相关的差异较大,其变化范围为0.10-0.81。由于sl的遗传力较高,可以通过较易测量的SL的选育从而达到湿重和肉重指标的选育。同时,通过对SS的选育也可间接完成对闭壳肌重的选育。3、长牡蛎生长相关经济性状G×E互作效应分析对于SH,SL,MW和AMW,其两环境间的遗传相关均属于高度相关,表明这些性状在崆峒岛(KTD)和乳山(RS)的G×E互作效应较弱。而WW和SS指标存在显著性差异,并且两指标的遗传相关都小于0.8,这说明在RS和KTD两个养殖环境下这两个性状都具有较强的G×E互作效应,但是SW的估测结果存在较大的标准误。因此,对于WW和AMW,可针对不同的养殖海域制定各自海域的育种计划,以提高该性状在相应海域中的育种进程。
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
【图文】：

微卫星,引物组合,退火温度,引物

2.1 五重 PCR 的优化设计的引物组合经过筛选优化后获得了两组微卫星五重 PCR 体系。两组五重 PCR 反应体系 25μL 包括:模板 DNA 1.0 μL (30 ng), 10 × PCRBuffer 2.5 μL, 25 mmol/LMgCl22.0 μL, 10 mmol/LdNTPs 0.5 μL, 10 mmol/L 引物每对各 0.2 μL, 5 U/μLTaq DNA 聚合酶 0.2 μL,纯水 17.8 μL。两组五重 PCR 反应程序均为: 95°C 预变性 3 min； 95°C 变性 30 s,退火温度 60 °C 30s, 72 °C 延伸 30 s，循环 10 次；95 °C变性 30 s,退火温度 55 °C30 s， 72 °C 延伸 30 s, 循环 20 次；最后 72 °C 延伸 6 min； 4 °C 保存。各体系的引物组合、引物浓度详见表 1-3、表 1-4。部分微卫星五重 PCR的毛细管电泳结果如图 1-1。

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