哈维氏弧菌噬菌体的分离及其生物学特性

发布时间：2020-09-27 17:47

　　哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是多种海水养殖动物的主要致病菌,可以导致养殖动物的皮肤、肌肉溃烂和内脏坏死进而使水产养殖动物大量死亡,造成巨大的经济损失。抗生素可有效防治水产动物细菌性疾病,然而长期持续地或大剂量使用抗生素类药物防治水产养殖动物细菌性病害,会导致水产品药物残留、细菌耐药性、环境污染等问题,如何安全高效地防治细菌疾病已成为水产动物病害防控领域的一个重点。噬菌体(bacteriophage,phage)作为一种具有高效特异裂解性、专一宿主性、自我增殖能力强、给药方式多、无药物残留、不形成耐药性等优点的产品,将成为替代抗生素用于水产动物疾病防治的绿色产品之一。本论文旨在针对特定的海水养殖病原菌一哈维氏弧菌,分离不同的烈性噬菌体,通过研究噬菌体的生长特性和生物学特征,探讨利用噬菌体来防控水产动物弧菌病的潜力。本试验从不同海区采集海水样品,包括厦门环岛近岸、东山岛及宁德养殖海区,利用双层平板法分离哈维氏弧菌噬菌体,并采用透射电子显微镜观察其形态特征。本实验共得到12株噬菌体纯株(2株肌尾噬菌体、2株短尾噬菌体、8株长尾噬菌体),其中短尾噬菌体在哈维氏弧菌噬菌体中鲜有发现。12株噬菌体的宿主范围及一步生长曲线检测结果显示,哈维氏弧菌噬菌体普遍具有高裂解性以及相对较窄的宿主范围。之后,本文选取了 5株具有较高裂解能力的噬菌体,深入研究噬菌体在不同环境条件下(温度、pH)的稳定性,以探讨噬菌体在实际环境中的应用潜力。结果表明,5株噬菌体的温度适应性较低,在60℃条件下,噬菌体完全失去侵染裂解宿主细菌的能力;而对pH的适应性较广,在正常海水pH条件下噬菌体活性无改变,能够耐受5-10以内的酸碱性变化。不同环境条件稳定性测试结果表明分离得到的噬菌体具备优良的应用潜能。综上所述,本试验中通过分离得到12株哈维氏弧菌噬菌体,并筛选出裂解能力强、理化性质稳定的噬菌体,为噬菌体实际使用提供了基础材料。同时,综合现有数据表明,其中短尾噬菌体具有一定的研究意义,可用于深入探究噬菌体与宿主之间的相互关系。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S941.42
【部分图文】：

渔政管理,水产品产量,渔业,农业部

年的全国水产品总产量６９０１．２５万吨，同比上一年增长３．０１％，其中，水产养殖逡逑产量５１４２．３９万吨（海水产品产量３４９０．１５万吨，占总产量的５０．５７％，），占总产逡逑量的７４．５１％，捕捞产量１７５８．８６万吨，占总产量的２５．４９％，（图１－１）。目前，我逡逑国不仅是全球水产养殖产量第一大国，也是仅有的养殖产量超过捕捞产量的国家，逡逑水产养殖己成为主要的水产品来源。逡逑百万吨逡逑７０逦欲逡逑：＊邋Ｉ邋１邋Ｌ邋ｔ逡逑２０１２逦２０１３逦２０１４逦２０１５逦２０１６逡逑々水产总产量？养殖总产量＊养殖鱼类总产量逡逑图１－１邋２０１２－２０１６年全国水产品产量及构成（数据来源于农业部渔业渔政管理局逡逑历年的《中国渔业统计年鉴》）逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ａｑｕａｔｉｃ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｉｎ邋ｏｕｒ邋ｃｏｕｎｔｒｙ邋ｆｒｏｍ逡逑２０１２邋ｔｏ邋２０１６邋（Ｔｈｅ邋ｄａｔａ邋ｆｒｏｍ邋Ｍｉｎｉｓｔｒｙ邋ｏｆ邋ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ邋ｆｉｓｈｅｒｙ邋ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ逡逑ｂｕｒｅａｕ，邋ｃａｌｅｎｄａｒ邋ｙｅａｒ邋ｏｆ邋Ｃｈｉｎａ邋ｆｉｓｈｅｒｙ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ邋ｙｅａｒｂｏｏｋ）逡逑水产品是人类优质蛋白质的重要来源，具有高蛋白质、低脂肪、低热量等优逡逑点，可提供丰富的蛋白质、氨基酸、微量元素（如铁、钙、锌、碘和铜等）和脂逡逑１逡逑

示意图,噬菌体,形态结构,病毒

在此状态下，病毒处于休眠状态，不进行生物合成作用。但病毒一旦进入宿逡逑主细胞内，病毒通过控制宿主的代谢机制，开始自我复制。合成子代病毒颗粒，逡逑并释放出来，开始新一轮的循环。逡逑病毒在环境中主要的存在方式是浮游在水体中，其分布广泛，且多样性丰富，逡逑目前对病毒的研究也主要集中在浮游病毒上（Ｂｒｕｍｅ／0／．，２０１５）。病毒是生态系逡逑统中个体最小，也是丰度最高，多样性最为丰富的成员。表层海水中浮游病毒的逡逑丰度通常能达到ｌＯ７！＾１，在生产力高的近岸环境中，丰度可达到ｌＯ８！！！！／１，是逡逑细菌数量的邋５－２５邋倍（Ｓｕｔｔｌｅ，邋２００５；邋Ｗｅｉｔｚ邋ａｎｄ邋Ｗｉｌｈｅｌｍ，邋２０１４）。逡逑海洋病毒主要包括嗤菌体（Ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ）和真核藻类病毒（Ｐｈｙｃｏｖｉｒｕｓ），逡逑此外，还有一些植物病毒、动物病毒和真菌病毒等；其形态有蝌蚪状、丝状、杆逡逑状、子弹状、球状、纺锤状、六边形和多边形等。噬菌体是一类感染细菌、放线逡逑菌、螺旋体和真菌等微生物的病毒，由于水体环境中细菌的数量最多，因此水体逡逑环境中绝大多数病毒为嗤菌体（Ｓｕｔｔｌｅ，邋２００５；邋Ｒｏｈｗｅｒ邋ａｎｄ邋Ｔｈｕｒｂｅｒ，邋２００９）。逡逑

噬菌体,侵染,形态,厦门

，，培养，观察是否有噬菌斑出现。逡逑２．３结果与讨论逡逑２．３．１噬菌体分离纯化及鉴定逡逑厦门环岛近岸、宁德养殖区、厦门东山岛水域、福建平潭近岸、西太平洋这逡逑５个海水区域中筛选得到形态大小不尽相同的哈维氏弧菌噬菌斑，其形态可见图逡逑２－１。＿菌体侵染后形成的嗤菌斑的大小不一，直径最小为０．５邋ｍｍ左右，较大的逡逑直径可达３邋ｍｍ左右。形成的噬菌斑的形态基本一致，中间透明，边缘清晰，无逡逑晕环，噬菌体菌体特征见表２－３。经过３次以上的纯化过程，在平板上可以得到逡逑大小形态基一致的噬菌斑。经连续３次以上对单独的噬菌体进行分离纯化，共计逡逑得到１２株能够侵染裂解哈维氏弧菌的烈性噬菌体。具体分离信息见表２－４。逡逑ＶＨＦＷＪ逦ＶＨＡ１逦ＶＨＣ２邋？逦ＶＨＤ１逡逑

【参考文献】