微生物发酵饲料在刺参养殖中的应用
发布时间：2020-10-11 08:51
本文研究发酵海带对刺参的饲养效果,通过分析发酵海带蛋白含量的变化、发酵海带作为刺参饲料和饲料中添加壳寡糖对刺参生存与生长、消化酶活性及消化道菌群结构、刺参非特异性免疫机能等方面的影响来评价发酵海带作为刺参饲料的营养价值与开发前景,除此之外,文中还就发酵海带的条件优化、海洋酵母的筛选鉴定等内容进行阐述,具体研究结果如下:1、人为添加枯草芽孢杆菌进行海带发酵,其适宜发酵温度为30℃、适宜发酵时间为96 h,接种剂量为12%(w/v,108 cfu/m L),发酵后海带的粗蛋白含量为14.65%,相对提高15.17%。配合饲料中添加30%的发酵海带喂养刺参,在36 d饲养时间内能显著提高刺参特定生长率、血淋巴液溶菌活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶活性(ACP)、蛋白酶活性和淀粉酶活性(P0.05),但是对刺参体腔细胞数、纤维素酶活性无显著影响(P0.05)。此外,投喂发酵饲料还可见刺参消化道异养菌总数、弧菌相对数量降低、芽孢杆菌相对数量升高等现象:异养菌总数由3.23×106 cfu.ɡ-1减少至2.86×106cfu.ɡ-1,弧菌相对数量由36.68%降低为26.82%,芽孢杆菌由8.92%升至15.01%。2、以黑曲霉发酵海带,适宜发酵温度为34℃,发酵时间120 h,接种剂量10%(w/v,108 cfu/m L),发酵后海带的粗蛋白含量为16.53%,相对提高27.64%。配合饲料中添加30%的发酵海带喂养刺参,在36 d的试验性养殖时间内能显著提高刺参特定生长率、血淋巴液溶菌活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、蛋白酶活性和淀粉酶活性(P0.05),但是对刺参体腔细胞数、纤维素酶活性无显著影响(P0.05)。此外,投喂发酵饲料使刺参肠道异养菌总数、弧菌占总菌数比例低于原有水平。异养菌总数由3.23×106 cfu.ɡ-1减少至2.76×106 cfu.ɡ-1;弧菌相对数量由36.68%降低为29.12%。3、从自然海水中和刺参肠道中分离、筛选出6株酵母菌,运用生理生化和分子生物学方法对其进行鉴定,结果是:HS-1为汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii),HS-2为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),H-4为胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa),H-5为双倒卵形红冬孢酵母(Rhodosporidium diobovatum),H-10为中国汉纳酵母(Hannaella sinensis),H-12为海滨红酵母(Rhodotorula marina);采用凯氏定氮法测定其粗蛋白含量等指标,结果显示:HS-1的生物量(g/L)及蛋白质含量(w/w)分别为5.95、33.131,HS-2分别为6.22、35.972,H-4分别为4.45、44.424,H-5分别为5.82、50.674,H-10分别为4.65、44.381,H-12为4.35、44.871,其中H-5的粗蛋白含量显著高于其他菌株(P0.05)。选取双倒卵形红冬孢酵母发酵海带,经测定,其粗蛋白含量为14.51%,相对提高11.50%。配合饲料中添加30%的发酵海带喂养刺参,在36 d的试验期限内刺参特定生长率、体腔液溶菌活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、蛋白酶活性和淀粉酶活性皆有显著提高(P0.05),但是刺参体腔液中血淋巴细胞数量、纤维素酶活性并无显著变化(P0.05),刺参肠道异养菌总数及弧菌所占比例则有所下降。异养菌总数由3.23×106 cfu.ɡ-1减少至2.81×106 cfu.ɡ-1;弧菌相对数量由36.68%降低为31.04%。4、在刺参基础饲料中分别添加0.5%、0.75%、1.0%、1.5%商品壳寡糖(青岛博智汇力生物科技有限公司,分子量3000,纯度97%)和1.0%自制壳寡糖进行刺参喂养试验,结果显示:饲料中添加壳寡糖能显著提高刺参特定生长率、体腔液溶菌活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、蛋白酶活性和淀粉酶活性(P0.05),但是,对刺参体腔液中的血淋巴细胞数量、纤维素酶活性等生理生化指标无显著影响(P0.05),对刺参肠道异养菌、弧菌甚至是枯草芽孢杆菌则有抑制作用,弧菌、枯草芽孢杆菌分别在0.5%和1.0%浓度的培养液中不能继续增殖。从上述检测指标中还发现:购自于青岛博智汇力生物科技有限公司的壳寡糖在刺参饲料中的添加量达到0.75%时使用效果最显著;饲料中添加自制壳寡糖与商品壳寡糖喂养效果差异不大。综合上述可见,枯草芽孢杆菌、黑曲霉、海洋酵母发酵海带以及饲料中添加壳寡糖喂养刺参均能促进刺参生长,提高免疫酶活性和消化酶活性,并且能够降低肠道异养菌总数和弧菌比例。此外,壳寡糖对枯草芽孢杆菌和弧菌均有抑制作用。
【学位单位】：集美大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S968.9
【文章目录】：
中文摘要
abstract
第1章 引言
1.1 刺参概述
1.1.1 刺参自然资源状况
1.1.2 刺参养殖产业现状
1.1.3 刺参饲料的发展历程
1.1.4 刺参营养需求的研究进展
1.1.5 刺参饲料的种类
1.2 海带简介
1.2.1 海带营养价值
1.2.2 海带在水产饲料中的应用
1.3 微生物发酵饲料
1.3.1 微生物发酵饲料的概念
1.3.2 发酵工艺
1.3.3 发酵菌种
1.3.4 微生物发酵饲料的优点
1.3.5 微生物发酵饲料在水产动物中的应用
1.4 海洋酵母
1.4.1 海洋酵母的概念及其营养成分
1.4.2 海洋酵母在水产养殖中的应用
1.5 壳寡糖
1.5.1 壳寡糖的生物功能
1.5.2 壳寡糖在水产养殖中的应用
1.6 本项目的意义
第2章 枯草芽孢杆菌发酵海带在刺参养殖中的应用
2.1 材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验用发酵微生物
2.1.3 实验用主要药品及试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 发酵微生物菌种准备
2.2.2 海带发酵条件的优化
2.2.3 刺参养殖试验
2.2.4 发酵样品制备
2.2.5 养殖试验样品采集与处理
2.2.6 发酵样品粗蛋白测定
2.2.7 体腔液蛋白含量测定
2.2.8 刺参生长率测定
2.2.9 免疫相关指标测定
2.2.10 消化酶活性测定方法
2.2.11 刺参肠道主要菌群数量分析
2.3 数据处理与分析
2.4 结果
2.4.1 发酵条件对发酵海带的影响
2.4.2 枯草芽孢杆菌发酵海带正交试验
2.4.3 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参生长率的影响
2.4.4 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参免疫活性的影响
2.4.5 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参消化酶活性的影响
2.4.6 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参肠道菌群的影响
2.5 讨论
2.5.1 枯草芽孢杆菌发酵海带对其粗蛋白含量的影响
2.5.2 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参生长率的影响
2.5.3 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参非特异性免疫的影响
2.5.4 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参消化酶活性的影响
2.5.5 枯草芽孢杆菌对刺参肠道菌群的影响
2.6 小结
第3章 黑曲霉发酵海带在刺参养殖中的应用
3.1 材料
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验用发酵微生物
3.1.3 主要实验药品及试剂
3.1.4 主要仪器设备
3.2 方法
3.2.1 发酵微生物菌种准备
3.2.2 海带发酵条件的优化
3.2.3 刺参养殖试验
3.2.4 发酵样品制备
3.2.5 养殖试验样品采集与处理
3.2.6 发酵样品粗蛋白测定
3.2.7 体腔液蛋白含量测定
3.2.8 刺参生长率测定
3.2.9 免疫相关指标测定
3.2.10 消化酶活性测定方法
3.2.11 刺参肠道主要菌群数量分析
3.3 数据处理与分析
3.4 结果与分析
3.4.1 发酵条件对黑曲霉发酵海带的影响
3.4.2 黑曲霉发酵发酵海带正交试验
3.4.3 黑曲霉发酵发酵海带对刺参生长的影响
3.4.4 黑曲霉发酵海带对刺参免疫活性的影响
3.4.5 黑曲霉发酵发酵海带对刺参消化酶活性的影响
3.4.6 黑曲霉发酵发酵海带对刺参肠道菌群的影响
3.5 讨论
3.5.1 黑曲霉发酵海带的营养成分变化
3.5.2 投饲黑曲霉发酵海带对刺参生长的影响
3.5.3 投饲黑曲霉发酵海带对刺参非特异性免疫的影响
3.5.4 投饲黑曲霉发酵海带对刺参消化酶活性的影响
3.5.5 投饲黑曲霉发酵海带对刺参消化道菌群的影响
3.6 小结
第4章 海洋酵母的分离培养及其发酵海带在刺参养殖中的应用
4.1 材料
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验用海带发酵微生物
4.1.3 实验用主要药品及试剂
4.1.4 主要仪器设备
4.1.5 海洋酵母培养基
4.2 方法
4.2.1 海洋酵母的分离与筛选
4.2.2 海洋酵母细胞干重的测定
4.2.3 海洋酵母的形态和培养特征
4.2.4 海洋酵母的生理生化特征
4.2.5 海洋酵母 18srDNA序列分析
4.2.6 海洋酵母用作发酵微生物菌种准备
4.2.7 海带发酵
4.2.8 刺参养殖试验
4.2.9 养殖试验样品采集与处理
4.2.10 发酵海带粗蛋白测定
4.2.11 刺参体腔液蛋白含量测定
4.2.12 刺参生长率测定
4.2.13 刺参免疫相关指标测定
4.2.14 刺参消化酶活性测定方法
4.2.15 刺参肠道主要菌群数量分析
4.3 数据处理与分析
4.4 结果与分析
4.4.1 菌株粗蛋白含量及细胞干重测定结果
4.4.2 菌株菌落形态与细胞形态特征观察结果
4.4.3 菌株生理生化鉴定结果
4.4.4 分子生物学鉴定结果
4.4.5 6株菌最终鉴定结果
4.4.6 发酵后海带中粗蛋白含量
4.4.7 海洋酵母发酵海带对刺参生长的影响
4.4.8 海洋酵母发酵海带对刺参免疫机能的影响
4.4.9 海洋酵母发酵海带对刺参消化酶活性的影响
4.4.10 海洋酵母对刺参肠道菌群的影响
4.5 讨论
4.5.1 海洋酵母在水产养殖中的应用
4.5.2 投饲海洋酵母发酵海带对刺参生长的影响
4.5.3 投饲海洋酵母发酵海带对刺参免疫功能的影响
4.5.4 投饲海洋酵母发酵海带对刺参消化酶活性的影响
4.5.5 投饲海洋酵母对刺参肠道菌群的影响
4.6 小结
第5章 饲料中添加壳寡糖对刺参饲养效果的影响
5.1 材料
5.1.1 实验材料
5.1.2 主要实验药品及试剂
5.1.3 主要仪器设备
5.2 方法
5.2.1 实验设计
5.2.2 样品采集与处理
5.2.3 刺参生长率测定
5.2.4 体腔液蛋白含量测定
5.2.5 免疫相关指标测定
5.2.6 消化酶活性测定方法
5.2.7 刺参肠道主要菌群数量分析
5.2.8 不同壳寡糖浓度对溶藻弧菌、枯草芽孢杆菌抗菌性能的测定
5.3 数据处理与分析
5.4 结果与分析
5.4.1 饲料中添加壳寡糖对刺参生长的影响
5.4.2 饲料中添加壳寡糖对刺参免疫指标的影响
5.4.3 饲料中添加壳寡糖对刺参消化酶活性的影响
5.4.4 饲料中添加壳寡糖对刺参肠道菌群的影响
5.4.5 不同浓度壳寡糖对溶藻弧菌的抑制作用
5.4.6 不同浓度壳寡糖对枯草芽孢杆菌的抑制作用
5.5 讨论
5.5.1 壳寡糖对刺参生长特性的影响
5.5.2 壳寡糖对刺参免疫功能的影响
5.5.3 壳寡糖对刺参消化酶活性的影响
5.5.4 壳寡糖对刺参肠道菌群的影响
5.5.5 壳寡糖对副溶血弧菌、枯草芽孢杆菌的抑制作用
5.6 小结
总结
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
【参考文献】
本文编号：2836367
【学位单位】：集美大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S968.9
【文章目录】：
中文摘要
abstract
第1章 引言
1.1 刺参概述
1.1.1 刺参自然资源状况
1.1.2 刺参养殖产业现状
1.1.3 刺参饲料的发展历程
1.1.4 刺参营养需求的研究进展
1.1.5 刺参饲料的种类
1.2 海带简介
1.2.1 海带营养价值
1.2.2 海带在水产饲料中的应用
1.3 微生物发酵饲料
1.3.1 微生物发酵饲料的概念
1.3.2 发酵工艺
1.3.3 发酵菌种
1.3.4 微生物发酵饲料的优点
1.3.5 微生物发酵饲料在水产动物中的应用
1.4 海洋酵母
1.4.1 海洋酵母的概念及其营养成分
1.4.2 海洋酵母在水产养殖中的应用
1.5 壳寡糖
1.5.1 壳寡糖的生物功能
1.5.2 壳寡糖在水产养殖中的应用
1.6 本项目的意义
第2章 枯草芽孢杆菌发酵海带在刺参养殖中的应用
2.1 材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验用发酵微生物
2.1.3 实验用主要药品及试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 发酵微生物菌种准备
2.2.2 海带发酵条件的优化
2.2.3 刺参养殖试验
2.2.4 发酵样品制备
2.2.5 养殖试验样品采集与处理
2.2.6 发酵样品粗蛋白测定
2.2.7 体腔液蛋白含量测定
2.2.8 刺参生长率测定
2.2.9 免疫相关指标测定
2.2.10 消化酶活性测定方法
2.2.11 刺参肠道主要菌群数量分析
2.3 数据处理与分析
2.4 结果
2.4.1 发酵条件对发酵海带的影响
2.4.2 枯草芽孢杆菌发酵海带正交试验
2.4.3 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参生长率的影响
2.4.4 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参免疫活性的影响
2.4.5 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参消化酶活性的影响
2.4.6 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参肠道菌群的影响
2.5 讨论
2.5.1 枯草芽孢杆菌发酵海带对其粗蛋白含量的影响
2.5.2 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参生长率的影响
2.5.3 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参非特异性免疫的影响
2.5.4 枯草芽孢杆菌发酵海带对刺参消化酶活性的影响
2.5.5 枯草芽孢杆菌对刺参肠道菌群的影响
2.6 小结
第3章 黑曲霉发酵海带在刺参养殖中的应用
3.1 材料
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验用发酵微生物
3.1.3 主要实验药品及试剂
3.1.4 主要仪器设备
3.2 方法
3.2.1 发酵微生物菌种准备
3.2.2 海带发酵条件的优化
3.2.3 刺参养殖试验
3.2.4 发酵样品制备
3.2.5 养殖试验样品采集与处理
3.2.6 发酵样品粗蛋白测定
3.2.7 体腔液蛋白含量测定
3.2.8 刺参生长率测定
3.2.9 免疫相关指标测定
3.2.10 消化酶活性测定方法
3.2.11 刺参肠道主要菌群数量分析
3.3 数据处理与分析
3.4 结果与分析
3.4.1 发酵条件对黑曲霉发酵海带的影响
3.4.2 黑曲霉发酵发酵海带正交试验
3.4.3 黑曲霉发酵发酵海带对刺参生长的影响
3.4.4 黑曲霉发酵海带对刺参免疫活性的影响
3.4.5 黑曲霉发酵发酵海带对刺参消化酶活性的影响
3.4.6 黑曲霉发酵发酵海带对刺参肠道菌群的影响
3.5 讨论
3.5.1 黑曲霉发酵海带的营养成分变化
3.5.2 投饲黑曲霉发酵海带对刺参生长的影响
3.5.3 投饲黑曲霉发酵海带对刺参非特异性免疫的影响
3.5.4 投饲黑曲霉发酵海带对刺参消化酶活性的影响
3.5.5 投饲黑曲霉发酵海带对刺参消化道菌群的影响
3.6 小结
第4章 海洋酵母的分离培养及其发酵海带在刺参养殖中的应用
4.1 材料
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验用海带发酵微生物
4.1.3 实验用主要药品及试剂
4.1.4 主要仪器设备
4.1.5 海洋酵母培养基
4.2 方法
4.2.1 海洋酵母的分离与筛选
4.2.2 海洋酵母细胞干重的测定
4.2.3 海洋酵母的形态和培养特征
4.2.4 海洋酵母的生理生化特征
4.2.5 海洋酵母 18srDNA序列分析
4.2.6 海洋酵母用作发酵微生物菌种准备
4.2.7 海带发酵
4.2.8 刺参养殖试验
4.2.9 养殖试验样品采集与处理
4.2.10 发酵海带粗蛋白测定
4.2.11 刺参体腔液蛋白含量测定
4.2.12 刺参生长率测定
4.2.13 刺参免疫相关指标测定
4.2.14 刺参消化酶活性测定方法
4.2.15 刺参肠道主要菌群数量分析
4.3 数据处理与分析
4.4 结果与分析
4.4.1 菌株粗蛋白含量及细胞干重测定结果
4.4.2 菌株菌落形态与细胞形态特征观察结果
4.4.3 菌株生理生化鉴定结果
4.4.4 分子生物学鉴定结果
4.4.5 6株菌最终鉴定结果
4.4.6 发酵后海带中粗蛋白含量
4.4.7 海洋酵母发酵海带对刺参生长的影响
4.4.8 海洋酵母发酵海带对刺参免疫机能的影响
4.4.9 海洋酵母发酵海带对刺参消化酶活性的影响
4.4.10 海洋酵母对刺参肠道菌群的影响
4.5 讨论
4.5.1 海洋酵母在水产养殖中的应用
4.5.2 投饲海洋酵母发酵海带对刺参生长的影响
4.5.3 投饲海洋酵母发酵海带对刺参免疫功能的影响
4.5.4 投饲海洋酵母发酵海带对刺参消化酶活性的影响
4.5.5 投饲海洋酵母对刺参肠道菌群的影响
4.6 小结
第5章 饲料中添加壳寡糖对刺参饲养效果的影响
5.1 材料
5.1.1 实验材料
5.1.2 主要实验药品及试剂
5.1.3 主要仪器设备
5.2 方法
5.2.1 实验设计
5.2.2 样品采集与处理
5.2.3 刺参生长率测定
5.2.4 体腔液蛋白含量测定
5.2.5 免疫相关指标测定
5.2.6 消化酶活性测定方法
5.2.7 刺参肠道主要菌群数量分析
5.2.8 不同壳寡糖浓度对溶藻弧菌、枯草芽孢杆菌抗菌性能的测定
5.3 数据处理与分析
5.4 结果与分析
5.4.1 饲料中添加壳寡糖对刺参生长的影响
5.4.2 饲料中添加壳寡糖对刺参免疫指标的影响
5.4.3 饲料中添加壳寡糖对刺参消化酶活性的影响
5.4.4 饲料中添加壳寡糖对刺参肠道菌群的影响
5.4.5 不同浓度壳寡糖对溶藻弧菌的抑制作用
5.4.6 不同浓度壳寡糖对枯草芽孢杆菌的抑制作用
5.5 讨论
5.5.1 壳寡糖对刺参生长特性的影响
5.5.2 壳寡糖对刺参免疫功能的影响
5.5.3 壳寡糖对刺参消化酶活性的影响
5.5.4 壳寡糖对刺参肠道菌群的影响
5.5.5 壳寡糖对副溶血弧菌、枯草芽孢杆菌的抑制作用
5.6 小结
总结
致谢
参考文献
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1 马跃华;胡守义;;免疫多糖投喂海参幼体试验[J];河北渔业;2006年07期
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3 徐琴;李健;刘淇;王群;;噬菌蛭弧菌和粘红酵母对中国对虾生长及非特异免疫因子的影响[J];海洋水产研究;2007年05期
4 李成林;宋爱环;胡炜;张艳萍;赵斌;李翘楚;麻丹萍;;山东省刺参养殖产业现状分析与可持续发展对策[J];渔业科学进展;2010年04期
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6 张赛乐;闫茂仓;陈少波;楼宝;谢起浪;单乐州;;枯草芽孢杆菌对黄姑鱼免疫机能的影响[J];科技通报;2012年11期
7 宫向红;王玮云;张秀珍;徐英江;任利华;刘云;安红红;;乙酰甲喹与喹烯酮对刺参致病菌的抑菌效果研究[J];渔业现代化;2014年01期
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10 蔡诗庆;胡超群;任春华;;三株海洋酵母的生化营养成分分析[J];热带海洋学报;2009年02期
本文编号：2836367
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