迟缓爱德华氏菌和鳗弧菌灭活疫苗的免疫佐剂筛选
发布时间：2020-10-16 23:07
迟缓爱德华氏菌和鳗弧菌是两种重要的鱼类致病菌,可分别引起爱德华氏菌病和弧菌病,导致世界范围内养殖鱼类的重大损失。目前,针对上述两种病原菌的感染,多种形式的疫苗已经被广泛的研究,包括灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗等。其中,灭活疫苗由于安全性高、成本低廉等优势在水产养殖行业被广泛应用,然而灭活疫苗无法在鱼体内繁殖的缺陷常导致免疫原性偏低,选择有效的免疫佐剂或免疫增强剂是增加灭活疫苗免疫保护效果的重要手段。本研究首先以鳗弧菌灭活疫苗为基础进行灭活疫苗佐剂的筛选,发现鳗弧菌灭活疫苗单独免疫大菱鲆或与佐剂配合使用时均获得良好免疫保护效果,不适合灭活疫苗佐剂的筛选。而后以迟缓爱德华氏菌灭活疫苗为基础,进行迟缓爱德华氏菌灭活疫苗佐剂的筛选。研究发现,在13种不同的佐剂疫苗组中,以鞭毛蛋白FlgD为佐剂的迟缓爱德华氏菌灭活疫苗组免疫大菱鲆之后获得良好的免疫保护效果,免疫大菱鲆一个月后的相对免疫保护率达到70%。此外,免疫大菱鲆体内特异性抗体水平在免疫后第三周达到最大值,免疫反应相关因子基因,如MHC-I, IgM, IL-1β, TCR,和TNFα等的表达也在免疫大菱鲆体内显著上调,上述结果都表明以鞭毛蛋白FlgD为佐剂的迟缓爱德华氏菌灭活疫苗能够同时激活大菱鲆体内的体液免疫和细胞免疫。由此可见,鞭毛蛋白能够有效增强迟缓爱德华氏菌灭活疫苗的免疫保护效果,可以作为鱼类疫苗的潜在佐剂,用于后续疫苗产品的开发。
【学位单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：S948
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 水产养殖业与鱼类病害
1.1.1 迟缓爱德华氏菌
1.1.2 鳗弧菌
1.2 鱼用疫苗
1.2.1 灭活疫苗
1.2.2 减毒活疫苗
1.2.3 亚单位疫苗
1.2.4 载体疫苗
1.2.5 DNA疫苗
1.3 鱼用疫苗的接种方式
1.3.1 注射免疫
1.3.2 浸泡免疫
1.3.3 口服免疫
1.4 鱼用免疫佐剂
1.4.1 油乳佐剂
1.4.2 纳米或微米粒子佐剂
1.4.3 铝盐佐剂
1.4.4 鞭毛蛋白
1.5 本课题研究内容和意义
第2章 鳗弧菌灭活疫苗的免疫佐剂筛选
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验用动物及菌株
2.2.2 实验用培养基和相关溶液配制
2.3 实验方法
2.3.1 实验用大菱鲆的健康检查和饲养
2.3.2 灭活鳗弧菌的制备
2.3.3 灭活鳗弧菌与多糖或寡糖佐剂混合制备鳗弧菌灭活疫苗溶液
2.3.4 鳗弧菌MVM425在大菱鲆上的预攻毒实验
2.3.5 不同佐剂的鳗弧菌灭活疫苗组的免疫实验
2.4 实验结果与分析
2.4.1 鳗弧菌在大菱鲆上攻毒剂量的确定
2.4.2 多糖或寡糖佐剂(2 mg/ml)对鳗弧菌灭活疫苗效果的影响
2.4.3 多糖或寡糖佐剂(1 mg/ml)对鳗弧菌灭活疫苗效果的影响
2.4.4 鳗弧菌灭活疫苗浓度对多糖或寡糖佐剂效果的影响
2.5 本章小结
第3章 迟缓爱德华氏菌灭活疫苗佐剂的免疫效果评价
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验动物和实验用菌株
3.2.2 实验用培养基及试剂
3.3 实验方法
3.3.1 鞭毛蛋白FlgD的表达
3.3.2 迟缓爱德华氏菌灭活疫苗与佐剂的乳化工艺以及乳化液的质量检测
3.3.3 包含不同佐剂的迟缓爱德华氏菌灭活疫苗组在大菱鲆上的免疫评价实验
3.4 实验结果
3.4.1 鞭毛蛋白FlgD的表达与纯化
3.4.2 迟缓爱德华氏菌灭活疫苗乳化液质量检测
3.4.3 包含不同佐剂的迟缓爱德华氏菌灭活疫苗在大菱鲆上的免疫保护效果分析
3.5 小结
第4章 以鞭毛蛋白FlgD为佐剂的疫苗免疫效果分析
4.1 引言
4.2 实验材料
4.3 实验方法
4.3.1 大菱鲆迟缓爱德华氏菌灭活疫苗的免疫以及免疫后的取样和攻毒
4.3.2 大菱鲆肾脏病理组织切片制作
4.3.3 免疫大菱鲆血清中抗体效价检测
4.3.4 免疫大菱鲆血清杀菌活力实验
4.3.5 免疫大菱鲆相关免疫因子应答分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 不同实验组迟缓爱德华氏菌灭活疫苗在大菱鲆上的免疫保护效果分析
4.4.2 免疫大菱鲆血清中抗体水平分析
4.4.3 免疫大菱鲆血清中杀菌活力分析
4.4.4 免疫后大菱鲆脾脏和肾脏中免疫相关因子的应答
4.5 小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
论文发表
致谢
【参考文献】
本文编号：2843902
【学位单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：S948
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 水产养殖业与鱼类病害
1.1.1 迟缓爱德华氏菌
1.1.2 鳗弧菌
1.2 鱼用疫苗
1.2.1 灭活疫苗
1.2.2 减毒活疫苗
1.2.3 亚单位疫苗
1.2.4 载体疫苗
1.2.5 DNA疫苗
1.3 鱼用疫苗的接种方式
1.3.1 注射免疫
1.3.2 浸泡免疫
1.3.3 口服免疫
1.4 鱼用免疫佐剂
1.4.1 油乳佐剂
1.4.2 纳米或微米粒子佐剂
1.4.3 铝盐佐剂
1.4.4 鞭毛蛋白
1.5 本课题研究内容和意义
第2章 鳗弧菌灭活疫苗的免疫佐剂筛选
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验用动物及菌株
2.2.2 实验用培养基和相关溶液配制
2.3 实验方法
2.3.1 实验用大菱鲆的健康检查和饲养
2.3.2 灭活鳗弧菌的制备
2.3.3 灭活鳗弧菌与多糖或寡糖佐剂混合制备鳗弧菌灭活疫苗溶液
2.3.4 鳗弧菌MVM425在大菱鲆上的预攻毒实验
2.3.5 不同佐剂的鳗弧菌灭活疫苗组的免疫实验
2.4 实验结果与分析
2.4.1 鳗弧菌在大菱鲆上攻毒剂量的确定
2.4.2 多糖或寡糖佐剂(2 mg/ml)对鳗弧菌灭活疫苗效果的影响
2.4.3 多糖或寡糖佐剂(1 mg/ml)对鳗弧菌灭活疫苗效果的影响
2.4.4 鳗弧菌灭活疫苗浓度对多糖或寡糖佐剂效果的影响
2.5 本章小结
第3章 迟缓爱德华氏菌灭活疫苗佐剂的免疫效果评价
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验动物和实验用菌株
3.2.2 实验用培养基及试剂
3.3 实验方法
3.3.1 鞭毛蛋白FlgD的表达
3.3.2 迟缓爱德华氏菌灭活疫苗与佐剂的乳化工艺以及乳化液的质量检测
3.3.3 包含不同佐剂的迟缓爱德华氏菌灭活疫苗组在大菱鲆上的免疫评价实验
3.4 实验结果
3.4.1 鞭毛蛋白FlgD的表达与纯化
3.4.2 迟缓爱德华氏菌灭活疫苗乳化液质量检测
3.4.3 包含不同佐剂的迟缓爱德华氏菌灭活疫苗在大菱鲆上的免疫保护效果分析
3.5 小结
第4章 以鞭毛蛋白FlgD为佐剂的疫苗免疫效果分析
4.1 引言
4.2 实验材料
4.3 实验方法
4.3.1 大菱鲆迟缓爱德华氏菌灭活疫苗的免疫以及免疫后的取样和攻毒
4.3.2 大菱鲆肾脏病理组织切片制作
4.3.3 免疫大菱鲆血清中抗体效价检测
4.3.4 免疫大菱鲆血清杀菌活力实验
4.3.5 免疫大菱鲆相关免疫因子应答分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 不同实验组迟缓爱德华氏菌灭活疫苗在大菱鲆上的免疫保护效果分析
4.4.2 免疫大菱鲆血清中抗体水平分析
4.4.3 免疫大菱鲆血清中杀菌活力分析
4.4.4 免疫后大菱鲆脾脏和肾脏中免疫相关因子的应答
4.5 小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
论文发表
致谢
【参考文献】
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1 王斌;孙岑;范薇;刘双凤;刘永波;孙彦珂;;养殖大菱鲆出血性败血症病原菌致病性的研究及鉴定[J];大连水产学院学报;2006年02期
2 黄艳平,杨先乐,湛嘉,吴小兰;水产动物疾病控制的研究和进展[J];上海水产大学学报;2004年01期
3 陈超然,陈昌福,毛芝娟;鱼用疫苗研制过程中面临的问题与课题[J];河南水产;2002年01期
本文编号：2843902
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