产EPA海洋微藻的分离筛选及培养条件优化
发布时间：2020-12-08 18:00
近年来,EPA（二十碳五烯酸）在人类健康保健方面的应用越来越受到关注,EPA的消费市场也随着人类的需求而不断扩大。微藻由于其总脂含量丰富,不饱和脂肪酸种类多样性,EPA含量高,细胞繁殖生长快、细胞结构简单而被认为是最具潜力的EPA生产原料来源。本研究从广西北部湾海域红树林保护区中采样,利用平板涂布分离法、平板划线分离法、微吸管分离法分离海洋微藻,通过尼罗红染色法初筛分离得到10株总脂含量较高海洋微藻。经气相色谱检测EPA含量,得到5株产EPA微藻,其中2株微藻HD02和HE06的EPA含量分别为0.22%和0.16%,产率分别为33.4μg·L-1·d-1和25.8μg·L-1·d-1,其倍增时间分别为2.7 d和2.5 d,悬浮生长,具有一定的工业化应用价值。经形态观察及18s DNA序列分析,鉴定HD02为桥湾藻属、HE06为菱形藻属。采用正交试验对这两株海洋微藻进行了培养条件优化,以提高其生物产量以及EPA产率。优化结果显示:桥湾藻HD02的最适培养条件硅元素80mg/L、硝酸钠75 mg/L、维生素B1 50μg/L、维生素B12 0.5μg/L、生物素8μg/L、IAA 4 ...
【文章来源】：广西民族大学广西壮族自治区
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
广西北部湾红树林Fig2.1mangrovesforestinthenorthGulfofGuangxiZhuangAutonomous
PCR 条件为：95℃预变性 2 min，95℃变性 30 s，55℃退火 30 s，72℃延伸 90 s，3环，最后 72℃终延伸 2 min。PCR 产物经电泳检测后进行测序。2.2 结果本实验从广西北海山口镇国家级红树林自然保护区、广西钦州茅尾海自治区级红树林区、广西东兴市北仑河口国家自然生态保护区、广西防城港珍珠湾红领巾红树林保护分离到 75 株海洋微藻。2.2.1 尼罗红染色初筛通过尼罗红染色法从 75 株分离株中获得 10 株荧光强度较高的海洋微藻。图 2.2 中，1、HE07 的总脂含量最为明显，在各个细胞内分布比较均匀，说明其脂肪酸含量高，内有较大较明显黄色脂肪滴，说明其含有较高的非极性脂类和中性脂，而 HE05、HE0红色，内含极性脂为主[29]。HD02 与 HE06 细胞形态相似，两者细胞内的脂肪滴不明但许多细胞内都含有两个小的脂肪滴。
测定结果 和 DHA 的标准品气相图谱中可以看出，标准品 EPA 的出峰时间在 25.37，根据气相结果建立的 EPA 标准方程 R 值达到到 99.94。从图 2.4 微藻的气相测定结果中可以看出微藻 HD留时间为 21.9 时均出现了不同大小的峰值，说明这些微藻然总脂峰值较好，在保留时间 21.9 处却没有峰值，说明 HE EPA。微藻 HE08 中细胞内的脂肪酸含量不高，也没有出现 曲线计算得出藻株HD01、HD02、HE05、HE06、HQ01的EPA含0.16%、0.14%。EPA 测定结果最终得到五株含量在 1000 μ
【参考文献】：
期刊论文
[1]激素IAA和ABA对小球藻(Chlorella sp.)生长和油脂积累的影响[J]. 邓晓东,吴小霞,范新照,费小雯,任大明. 中国油料作物学报. 2013(01)
[2]尼罗红染色法筛选产油酵母及定量检测胞内油脂含量的研究[J]. 林义,钟添华,骆祝华,黄翔玲,叶德赞. 微生物学通报. 2012(01)
[3]不同碳、氮源对优势藻株Hhw总脂含量及脂肪酸成分的影响[J]. 马帅,胡小文,付莉莉,弓淑芬,谭德冠,张家明. 中国农学通报. 2011(12)
[4]不同培养方式下微藻产油能力的研究[J]. 杨静,蒋剑春,张宁. 生物质化学工程. 2011(02)
[5]不同氮源对4种海洋微藻生长的影响[J]. 胡章喜,徐宁,段舜山. 生态环境学报. 2010(10)
[6]产油微藻的筛选及中性脂动态积累过程的检测[J]. 王金娜,严小军,周成旭,徐继林. 生物物理学报. 2010(06)
[7]32株海洋微藻总脂含量及其脂肪酸组成的研究[J]. 卢丽娜,孙利芹,田焕玲,任蒙,王长海. 中国油脂. 2009(11)
[8]6种海洋微藻提取物抑菌活性研究[J]. 李侠,郑法新,程璐. 德州学院学报. 2007(06)
[9]VB1、VB12和VH对雨生红球藻生长及类胡萝卜素含量的影响[J]. 李立欣,段舜山,李爱芬,徐宁. 生态科学. 2006(02)
[10]不同氮源对微藻增殖的影响[J]. 张青田,董双林,胡桂坤,张兆琪. 海洋科学. 2005(02)
硕士论文
[1]部分南海可培养微藻的分子鉴定及富油藻株的筛选[D]. 冯甜.中国海洋大学 2013
[2]隐甲藻生产DHA的研究[D]. 梅志刚.华南理工大学 2011
[3]植物激素ABA和GA对紫球藻生长的影响[D]. 肖丹曦.暨南大学 2009
本文编号：2905454
【文章来源】：广西民族大学广西壮族自治区
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
广西北部湾红树林Fig2.1mangrovesforestinthenorthGulfofGuangxiZhuangAutonomous
PCR 条件为：95℃预变性 2 min，95℃变性 30 s，55℃退火 30 s，72℃延伸 90 s，3环，最后 72℃终延伸 2 min。PCR 产物经电泳检测后进行测序。2.2 结果本实验从广西北海山口镇国家级红树林自然保护区、广西钦州茅尾海自治区级红树林区、广西东兴市北仑河口国家自然生态保护区、广西防城港珍珠湾红领巾红树林保护分离到 75 株海洋微藻。2.2.1 尼罗红染色初筛通过尼罗红染色法从 75 株分离株中获得 10 株荧光强度较高的海洋微藻。图 2.2 中，1、HE07 的总脂含量最为明显，在各个细胞内分布比较均匀，说明其脂肪酸含量高，内有较大较明显黄色脂肪滴，说明其含有较高的非极性脂类和中性脂，而 HE05、HE0红色，内含极性脂为主[29]。HD02 与 HE06 细胞形态相似，两者细胞内的脂肪滴不明但许多细胞内都含有两个小的脂肪滴。
测定结果 和 DHA 的标准品气相图谱中可以看出，标准品 EPA 的出峰时间在 25.37，根据气相结果建立的 EPA 标准方程 R 值达到到 99.94。从图 2.4 微藻的气相测定结果中可以看出微藻 HD留时间为 21.9 时均出现了不同大小的峰值，说明这些微藻然总脂峰值较好，在保留时间 21.9 处却没有峰值，说明 HE EPA。微藻 HE08 中细胞内的脂肪酸含量不高，也没有出现 曲线计算得出藻株HD01、HD02、HE05、HE06、HQ01的EPA含0.16%、0.14%。EPA 测定结果最终得到五株含量在 1000 μ
【参考文献】：
期刊论文
[1]激素IAA和ABA对小球藻(Chlorella sp.)生长和油脂积累的影响[J]. 邓晓东,吴小霞,范新照,费小雯,任大明. 中国油料作物学报. 2013(01)
[2]尼罗红染色法筛选产油酵母及定量检测胞内油脂含量的研究[J]. 林义,钟添华,骆祝华,黄翔玲,叶德赞. 微生物学通报. 2012(01)
[3]不同碳、氮源对优势藻株Hhw总脂含量及脂肪酸成分的影响[J]. 马帅,胡小文,付莉莉,弓淑芬,谭德冠,张家明. 中国农学通报. 2011(12)
[4]不同培养方式下微藻产油能力的研究[J]. 杨静,蒋剑春,张宁. 生物质化学工程. 2011(02)
[5]不同氮源对4种海洋微藻生长的影响[J]. 胡章喜,徐宁,段舜山. 生态环境学报. 2010(10)
[6]产油微藻的筛选及中性脂动态积累过程的检测[J]. 王金娜,严小军,周成旭,徐继林. 生物物理学报. 2010(06)
[7]32株海洋微藻总脂含量及其脂肪酸组成的研究[J]. 卢丽娜,孙利芹,田焕玲,任蒙,王长海. 中国油脂. 2009(11)
[8]6种海洋微藻提取物抑菌活性研究[J]. 李侠,郑法新,程璐. 德州学院学报. 2007(06)
[9]VB1、VB12和VH对雨生红球藻生长及类胡萝卜素含量的影响[J]. 李立欣,段舜山,李爱芬,徐宁. 生态科学. 2006(02)
[10]不同氮源对微藻增殖的影响[J]. 张青田,董双林,胡桂坤,张兆琪. 海洋科学. 2005(02)
硕士论文
[1]部分南海可培养微藻的分子鉴定及富油藻株的筛选[D]. 冯甜.中国海洋大学 2013
[2]隐甲藻生产DHA的研究[D]. 梅志刚.华南理工大学 2011
[3]植物激素ABA和GA对紫球藻生长的影响[D]. 肖丹曦.暨南大学 2009
本文编号：2905454
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