大洋性金枪鱼和三文鱼的分子鉴定技术研究
发布时间：2020-12-09 00:59
大洋性金枪鱼和三文鱼具有较高的营养价值,近年来国际、国内该类产品的消费也逐渐上升。除了优质金枪鱼和三文鱼种类外,与金枪鱼属于同一科的鲔、扁舵鲣、东方狐鲣等种类,与三文鱼的亲缘关系比较近的狗鱼、鳓鱼等种类,也都常用于生产金枪鱼或三文鱼罐头和鱼酥等产品。但是,不同原鱼料所生产的鱼类产品的营养价值和过敏物质含量有很大不同,价格千差万别,因其引发的鱼类产品安全性问题也成为关注的焦点。虽然很多国家都有相应标签明确的法规,但是掺假造假的判定标准和标签制度的有效实施,都必须建立在准确、快速的鱼类种类鉴定的基础上。为杜绝某些商贩以劣质充当优质种类的欺诈非法行为,保障消费者的购物知情权益,迫切需要灵敏和可靠的检测方法和体系来鉴定金枪鱼和三文鱼食品的物种来源。本文以金枪鱼和三文鱼两类样品为研究对象,阴性对照分别为与金枪鱼或三文鱼亲缘关系相近的鱼类,采用传统定性PCR技术和双重荧光定量PCR技术对样品种类进行检测。在双重荧光定量PCR检测体系中选择的特征基因是线粒体16S rDNA以及CR基因。本研究还通过环等温扩增技术(LAMP)对三文鱼的CR基因进行了扩增,首次探究LAMP技术在鱼类物种鉴定方面的应用。...
【文章来源】：浙江理工大学浙江省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1 主要金枪鱼类的介绍
1.1 主要金枪鱼类的生物学特征、营养和生产消费状况
1.2 6种主要经济金枪鱼类的生物学性状和渔业状况
1.2.1 蓝鳍金枪鱼（T. maccoyii）
1.2.2 金枪鱼（T. thynnus）
1.2.3 大眼金枪鱼（T. obesus）
1.2.4 长鳍金枪鱼（T. alalunga）
1.2.5 黄鳍金枪鱼（T. albacares）
1.2.6 鲣（K. pelamis）
2 主要鲑鱼类的介绍
2.1 主要鲑鱼类的生物学分类、特征、习性与分布
2.2 4种大洋性主要经济三文鱼类的生物学性状和渔业状况
2.2.1 大西洋鲑（S. salar）
2.2.2 虹鳟（O. mykiss）
2.2.3 狗鲑（O. keta）
2.2.4 红鲑（O. nerka）
3 鱼类种类鉴定的必要性
4 目前国内外对鱼类种类鉴别的研究现状
4.1 鱼类种类鉴定方法的研究分析
4.2 常用的DNA分子标记技术
4.3 鱼类物种鉴定中特征基因的选择
4.4 DNA分子标记技术在鱼类种类研究中的研究与应用
5 本论文的研究目的及意义
第二章 金枪鱼类的双重荧光定量PCR技术鉴定研究
1 材料与仪器
1.1 实验材料
1.1.1 生鲜金枪鱼样品
1.1.2 金枪鱼深加工样品
1.2 实验仪器与试剂
1.2.1 主要实验仪器
1.2.2 主要试剂
2 实验方法
2.1 样品保存与样品DNA的提取
2.2 常规PCR扩增与特征基因的选择
2.3 荧光定量PCR的引物与探针设计
2.4 荧光定量PCR检测
2.5 标准曲线的制定
2.6 克隆验证
2.6.1 PCR扩增
2.6.2 PCR产物割胶回收
2.6.3 连接转化与培养
2.6.4 重组质粒的提取与酶切鉴定
2.6.5 测序分析
2.7 混合样品的检测
2.8 深加工样品的检测
3 结果与分析
3.1 样品DNA提取
3.2 PCR扩增结果与特征基因的选择
3.3 荧光定量PCR引物和探针
3.4 双重荧光定量PCR体系的建立
3.4.1 荧光定量PCR体系的引物与探针的验证
3.4.2 双重荧光定量PCR体系的验证
3.5 荧光定量PCR体系的标准曲线
3.6 混合样品的检测
3.7 深加工产品的双重荧光定量PCR检测
4 讨论
第三章 鲑科鱼类的双重荧光定量PCR技术鉴定研究
1 材料与仪器
1.1 实验材料
1.1.1 生鲜三文鱼样品
1.1.2 三文鱼深加工样品
1.2 实验仪器与试剂
1.2.1 主要实验仪器
1.2.2 主要试剂
2 实验方法
2.1 样品保存与样品DNA的提取
2.2 荧光定量PCR的引物与探针设计
2.3 荧光定量PCR引物和探针的特异性验证
2.4 制定标准曲线
2.5 混合样品的检测
2.6 深加工样品的检测
3 结果与分析
3.1 三文鱼样品DNA提取
3.2 特征基因的选择与体系设计
3.3 荧光定量PCR引物和探针
3.4 双重荧光定量PCR体系的建立
3.4.1 荧光定量PCR体系的引物与探针的验证
3.4.2 双重荧光定量PCR体系的建立
3.5 荧光定量PCR体系的标准曲线
3.6 混合样品的检测
3.7 三文鱼加工产品的双重荧光定量PCR检测
4 讨论
第四章 环介导等温扩增技术鉴定鲑科鱼类种类的研究
1 材料与仪器
1.1 实验材料
1.2 主要仪器设备
1.3 试剂
2 实验方法
2.1 三文鱼样品基因组DNA提取
2.2 LAMP特异性引物设计与合成
2.3 LAMP反应体系
2.3.1 初始反应过程
2.3.2 反应体系的优化
2.3.3 LAMP检测特异性
3 结果与分析
3.1 LAMP检测方法的建立
3.2 LAMP反应体系的优化
3.2.1 单因子试验
3.2.1.1 Mg2+浓度的优化
3.2.1.2 dNTP Mix浓度的优化
3.2.1.3 Betaine浓度的优化
3.2.2 LAMP反应体系优化正交试验
3.3 LAMP检测的特异性
4 讨论
4.1 LAMP方法对三文鱼种类鉴定方面的可行性探讨
4.2 存在的问题和技术改进
4.2.1 重复性分析
4.2.2 引物设计过程及扩增产物的判别
4.2.3 假阳性问题分析
5 小结
总结
参考文献
致谢
攻读硕士研究生期间的研究成果
本文编号：2905979
【文章来源】：浙江理工大学浙江省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1 主要金枪鱼类的介绍
1.1 主要金枪鱼类的生物学特征、营养和生产消费状况
1.2 6种主要经济金枪鱼类的生物学性状和渔业状况
1.2.1 蓝鳍金枪鱼（T. maccoyii）
1.2.2 金枪鱼（T. thynnus）
1.2.3 大眼金枪鱼（T. obesus）
1.2.4 长鳍金枪鱼（T. alalunga）
1.2.5 黄鳍金枪鱼（T. albacares）
1.2.6 鲣（K. pelamis）
2 主要鲑鱼类的介绍
2.1 主要鲑鱼类的生物学分类、特征、习性与分布
2.2 4种大洋性主要经济三文鱼类的生物学性状和渔业状况
2.2.1 大西洋鲑（S. salar）
2.2.2 虹鳟（O. mykiss）
2.2.3 狗鲑（O. keta）
2.2.4 红鲑（O. nerka）
3 鱼类种类鉴定的必要性
4 目前国内外对鱼类种类鉴别的研究现状
4.1 鱼类种类鉴定方法的研究分析
4.2 常用的DNA分子标记技术
4.3 鱼类物种鉴定中特征基因的选择
4.4 DNA分子标记技术在鱼类种类研究中的研究与应用
5 本论文的研究目的及意义
第二章 金枪鱼类的双重荧光定量PCR技术鉴定研究
1 材料与仪器
1.1 实验材料
1.1.1 生鲜金枪鱼样品
1.1.2 金枪鱼深加工样品
1.2 实验仪器与试剂
1.2.1 主要实验仪器
1.2.2 主要试剂
2 实验方法
2.1 样品保存与样品DNA的提取
2.2 常规PCR扩增与特征基因的选择
2.3 荧光定量PCR的引物与探针设计
2.4 荧光定量PCR检测
2.5 标准曲线的制定
2.6 克隆验证
2.6.1 PCR扩增
2.6.2 PCR产物割胶回收
2.6.3 连接转化与培养
2.6.4 重组质粒的提取与酶切鉴定
2.6.5 测序分析
2.7 混合样品的检测
2.8 深加工样品的检测
3 结果与分析
3.1 样品DNA提取
3.2 PCR扩增结果与特征基因的选择
3.3 荧光定量PCR引物和探针
3.4 双重荧光定量PCR体系的建立
3.4.1 荧光定量PCR体系的引物与探针的验证
3.4.2 双重荧光定量PCR体系的验证
3.5 荧光定量PCR体系的标准曲线
3.6 混合样品的检测
3.7 深加工产品的双重荧光定量PCR检测
4 讨论
第三章 鲑科鱼类的双重荧光定量PCR技术鉴定研究
1 材料与仪器
1.1 实验材料
1.1.1 生鲜三文鱼样品
1.1.2 三文鱼深加工样品
1.2 实验仪器与试剂
1.2.1 主要实验仪器
1.2.2 主要试剂
2 实验方法
2.1 样品保存与样品DNA的提取
2.2 荧光定量PCR的引物与探针设计
2.3 荧光定量PCR引物和探针的特异性验证
2.4 制定标准曲线
2.5 混合样品的检测
2.6 深加工样品的检测
3 结果与分析
3.1 三文鱼样品DNA提取
3.2 特征基因的选择与体系设计
3.3 荧光定量PCR引物和探针
3.4 双重荧光定量PCR体系的建立
3.4.1 荧光定量PCR体系的引物与探针的验证
3.4.2 双重荧光定量PCR体系的建立
3.5 荧光定量PCR体系的标准曲线
3.6 混合样品的检测
3.7 三文鱼加工产品的双重荧光定量PCR检测
4 讨论
第四章 环介导等温扩增技术鉴定鲑科鱼类种类的研究
1 材料与仪器
1.1 实验材料
1.2 主要仪器设备
1.3 试剂
2 实验方法
2.1 三文鱼样品基因组DNA提取
2.2 LAMP特异性引物设计与合成
2.3 LAMP反应体系
2.3.1 初始反应过程
2.3.2 反应体系的优化
2.3.3 LAMP检测特异性
3 结果与分析
3.1 LAMP检测方法的建立
3.2 LAMP反应体系的优化
3.2.1 单因子试验
3.2.1.1 Mg2+浓度的优化
3.2.1.2 dNTP Mix浓度的优化
3.2.1.3 Betaine浓度的优化
3.2.2 LAMP反应体系优化正交试验
3.3 LAMP检测的特异性
4 讨论
4.1 LAMP方法对三文鱼种类鉴定方面的可行性探讨
4.2 存在的问题和技术改进
4.2.1 重复性分析
4.2.2 引物设计过程及扩增产物的判别
4.2.3 假阳性问题分析
5 小结
总结
参考文献
致谢
攻读硕士研究生期间的研究成果
本文编号：2905979
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