异育银鲫鳃出血病检测方法的建立和生化指标分析

发布时间：2020-12-12 02:26

　　异育银鲫（Carassius auratus gibelio）因具有个头大、生长快、肉质鲜美、营养丰富等优点而受到人民群众的喜爱,其产量持续增长,带来了巨大的经济效益和社会效益。然而,大规模病害的爆发阻碍了异育银鲫养殖业的发展,其中病害主要有寄生虫病、细菌性疾病、真菌性疾病、病毒性疾病等。2012年来,异育银鲫养殖区爆发了大规模“鳃出血病”,该病死亡率极高,造成重大经济损失,经鉴定引起这种疾病的是鲤疱疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）。CyHV-2最早于1992年在日本的金鱼中被发现,因其是第二个从鲤科鱼中分离出的病毒,国际病毒系统分类与命名委员会命名其为鲤疱疹病毒Ⅱ型（cyprinid herpesvirus Ⅱ,CyHV-2）,因其可造成鲫鱼造血组织器官坏死,因此,又称该病毒为“疱疹病毒性造血器官坏死症病毒”,（Herpes viral haematopoietic necrosis virus,HVHNV）。鲤科鱼疱疹病毒目前分为三个型,分别为鲤痘疮病毒（Carp pox herpesvirus,Cyprinid herpesvirus,CyHV-1）;鲤疱疹病毒 Ⅱ 型（CyHV-2）... 

【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校

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图２．１用于提取病毒液的病鱼组织ＰＣＲ结果

??染ＣｙＨＶ－２，检测结果如图２．１所示，４条病鱼的肾组织皆为阳性。因此这些病??鱼提取的病毒液可以放心用于人工回感。??Ｍ?１?２３４５６７８９?Ｍ??１＞Ｐ?ｂｐ??２０００?２０００??ｚｓｏ??ｉｕｕ?ｌｏｏ??图２．１用于提取病毒液的病鱼组织ＰＣＲ结果。Ｍ：ＤＬ２０００ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１－４：用于提取病毒??液的４条病鱼的肾组织；６为阴性对照；９为阳性对照：５、７、８为空白对照。??Ｆｉｇ．?２．１?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｉｓｓｕｅ?ＤＮＡ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ｄｉｓｅａｓｅｄ?ｆｉｓｈ?ｕｓｅｄ?ｔｏ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｔｈｅ?ｓｉｃｋ?ｐｏｉｓｏｎ．?Ｍ：??ＤＬ２０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?Ｍ：?ｋｉｄｎｅｙ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｏｆ?４?ｓｉｃｋ?ｆｉｓｈ；?６：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?９：?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；??５、７、８：?ｂｌａｎｋ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??２．３．２疾病感染症状??与正常鱼相比，回感的鱼出现行动缓慢、离群独游等反应。从第二天开始鱼??出现了轻微病症，第三天开始出现死亡，都出现典型的病症，如图２．２所示：鳍??基部有出血点、尾鳍末端发白、眼球突出、解剖可见鱼鳔上有出血点等，第七天??９９°／。回感鱼死亡。??图２．２异育银鲫人工感染鲤疱疹病毒ＩＩ型后的疾病症状和健康鱼的对比。Ａ：感染３天后有??１８??

２．３．４荧光定量ＰＣＲ标准曲线的绘制??将获取的ＤＮＡ模板测定浓度后，１０倍梯度稀释，分别以６．０７ｘ１?〇８？６．０７ｘ１０２??ｃｏｐｉｅｓ／Ｌ为模板，进行荧光定量ＰＣＲ检测，检测结果见表２．３和图２．４，计算并??得出标准曲线：ｙ?＝?－３．６３９９?ｘ?＋３６．９４１，Ｒ２＝?０．９９９８。??表２．３荧光定量ＰＣＲ标准曲线绘制相关数值??Ｔａｂｌｅ?２．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｖａｌｕｅｓ?ａｂｏｕｔ?ｔｈｅ?ｄｒａｗｉｎｇ?ｏｆ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ＰＣＲ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ??拷贝数?ｌｏｇｌＯ?重复数?ＣＴ平均值??１９??


本文编号：2911679