胶体金免疫层析法快速检测迟钝爱德华氏菌
发布时间：2020-12-12 03:20
迟钝爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是一种重要的鱼类病原菌,由它引起的迟钝爱德华氏菌病对海水鱼和淡水鱼都具有很高的致死率。为了及时采取有效措施控制迟钝爱德华氏菌病的暴发,迫切需要建立便捷、准确的方法对E. tarda早期感染进行快速准确的诊断。本课题制备了E. tarda单克隆抗体和多克隆抗体,并用其制备了E. tarda检测试纸条,同时将此方法与斑点杂交和环介导等温扩增方法进行了比较。用柠檬酸还原氯金酸的方法制备了各种不同粒径的胶体金溶液,并用可见光谱和透射电镜评价了胶体金溶液的分散性、形状以及粒径分布。选择粒径为30 nm的胶体金颗粒标记E. tarda多克隆抗体,并将其吸附至玻璃纤维素膜上,将E. tarda多克隆抗体和羊抗兔二抗包被于分析膜上预定的检测线（T）和质控线（C）上,然后将金标垫、样品垫、分析膜以及吸水垫组装成检测试纸条。该试纸条对E. tarda特异性良好,检测三株E.tarda均为阳性结果,与其他环境常见细菌无交叉反应。该试纸条检测限为107CFU/ml（3-10 min内）,延长反应时间后可达到105 CFU/ml。自渔场采集疑似罹患迟钝爱德华...
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．２胶体金检测试纸条俯视
第Ｈ页?华东理王大学硕±学位论文??口）将ＮＣ膜置于３７°Ｃ环境中瞭干；??（３）将已划线的ＮＣ膜浸泡在封闭液中，在３７°Ｃ环境中封闭１?ｈ；??（４）向一个洁净的平皿中加入含有０．０５％?Ｔｗｅｅｎ－２０的ＰＢＳ，并将封闭后的ＮＣ膜置??于平皿中。然后将平皿放在脱色摇床上洗澡２次，每次３?ｍｉｎ；??（５）将洗澡过的ＮＣ膜置于３７°Ｃ环境中瞭干后，放在４。（：环境中的干燥器内备用。??２．３．３．６样品垫的预处理??将玻璃纤维素膜浸泡于样品垫预处理溶液中，２ｈ后，将样品垫取出，于３７°Ｃ环境??中喊干后，放在４°Ｃ环境中的干燥器内备用。??２．３．３．７试纸条组装??如图２．１，首先将分析膜粘贴至ＰＶＣ胶板上。然后，将金标垫在上与分析膜重叠２??ｍｍ粘贴在靠前的位置，将吸水垫在上与分析膜重叠２?ｍｍ粘贴在靠后的位置。最后，??将样品垫在上与金标垫重叠２ｍｍ粘贴在最前端。组装完成么后，用数控切条机将其切??成５?ｍｍ宽的试纸条，将试纸条填装至夹壳内。??
真空冷冻干燥后，用抗体重悬液重悬。用考马斯亮蓝法测得纯化的多克隆抗体浓度为??４．７７?ｍｇ／ｍｌ。用甲酸灭活的口Ｗａ菌液包被酶标板，将多克隆抗体做梯度稀释，用间??接ＥＬＩＳＡ实验测定其效价，结果如图２．２和表２．３。所制备的／ｆｌＷａ多克隆抗体化ＩＳＡ??效价高于１：３２０００。??ｋ?Ｉ＊?？?ｍｔｓ．?￡？?ｗ－ｆｒｉｉ?ｔＪｉｈ?．?４？ｒｖ＇ｍ?■??ｉ?霄带＇’．紫Ａ?；?５??Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１??Ｂｌａｎｋ?（－）?ＰＡ?ＰＡ?ＰＡ?ＰＡ??至：１０朋?ｍ㈱０?１；如㈱?１：３２０００?１?；１现０００??图２．２多克隆抗体间接ＥＬＩＳＡ效价??Ｆｉｇ．?２．２?ＥＬＩＳＡ?ｌｉｔｒｅ?ｏｆ?ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ?ａｇａｉｎｓｔ?Ｅ．?ｔａｒｄａ．?Ｆｏｒｍａｌｉｎ?ｋｉｌｌｅｄ?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌｓ?ｏｆ?￡．?ｔａｒｄａ?ａｔ??ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏ打?ｏｆ?ｌｘｌ〇８?ＣＦＵ／ｍｌ?ｗｅｒｅ?ｃｏａｔｅｄ?ａｎｄ?ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ?ｉｎｄｉｒｅｃｔ?巨ＬＩＳＡ?ｕｓｉｎ呂?ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ａｔ??ｓｅｒｉａｌ?ｄｉｌｕｔｉｏｎｓ?ｏｆ?１：１０００
本文编号：2911759
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．２胶体金检测试纸条俯视
第Ｈ页?华东理王大学硕±学位论文??口）将ＮＣ膜置于３７°Ｃ环境中瞭干；??（３）将已划线的ＮＣ膜浸泡在封闭液中，在３７°Ｃ环境中封闭１?ｈ；??（４）向一个洁净的平皿中加入含有０．０５％?Ｔｗｅｅｎ－２０的ＰＢＳ，并将封闭后的ＮＣ膜置??于平皿中。然后将平皿放在脱色摇床上洗澡２次，每次３?ｍｉｎ；??（５）将洗澡过的ＮＣ膜置于３７°Ｃ环境中瞭干后，放在４。（：环境中的干燥器内备用。??２．３．３．６样品垫的预处理??将玻璃纤维素膜浸泡于样品垫预处理溶液中，２ｈ后，将样品垫取出，于３７°Ｃ环境??中喊干后，放在４°Ｃ环境中的干燥器内备用。??２．３．３．７试纸条组装??如图２．１，首先将分析膜粘贴至ＰＶＣ胶板上。然后，将金标垫在上与分析膜重叠２??ｍｍ粘贴在靠前的位置，将吸水垫在上与分析膜重叠２?ｍｍ粘贴在靠后的位置。最后，??将样品垫在上与金标垫重叠２ｍｍ粘贴在最前端。组装完成么后，用数控切条机将其切??成５?ｍｍ宽的试纸条，将试纸条填装至夹壳内。??
真空冷冻干燥后，用抗体重悬液重悬。用考马斯亮蓝法测得纯化的多克隆抗体浓度为??４．７７?ｍｇ／ｍｌ。用甲酸灭活的口Ｗａ菌液包被酶标板，将多克隆抗体做梯度稀释，用间??接ＥＬＩＳＡ实验测定其效价，结果如图２．２和表２．３。所制备的／ｆｌＷａ多克隆抗体化ＩＳＡ??效价高于１：３２０００。??ｋ?Ｉ＊?？?ｍｔｓ．?￡？?ｗ－ｆｒｉｉ?ｔＪｉｈ?．?４？ｒｖ＇ｍ?■??ｉ?霄带＇’．紫Ａ?；?５??Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１??Ｂｌａｎｋ?（－）?ＰＡ?ＰＡ?ＰＡ?ＰＡ??至：１０朋?ｍ㈱０?１；如㈱?１：３２０００?１?；１现０００??图２．２多克隆抗体间接ＥＬＩＳＡ效价??Ｆｉｇ．?２．２?ＥＬＩＳＡ?ｌｉｔｒｅ?ｏｆ?ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ?ａｇａｉｎｓｔ?Ｅ．?ｔａｒｄａ．?Ｆｏｒｍａｌｉｎ?ｋｉｌｌｅｄ?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌｓ?ｏｆ?￡．?ｔａｒｄａ?ａｔ??ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏ打?ｏｆ?ｌｘｌ〇８?ＣＦＵ／ｍｌ?ｗｅｒｅ?ｃｏａｔｅｄ?ａｎｄ?ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ?ｉｎｄｉｒｅｃｔ?巨ＬＩＳＡ?ｕｓｉｎ呂?ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ａｔ??ｓｅｒｉａｌ?ｄｉｌｕｔｉｏｎｓ?ｏｆ?１：１０００
本文编号：2911759
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/2911759.html
