泛素连接酶Parkin通过蛋白酶体与异体自噬途径介导对虾的抗病毒免疫反应

发布时间：2020-12-17 06:45

　　白斑综合症病毒简称为WSSV（White spot syndrome virus, WSSV）危害水产养殖界,它能感染多种虾、蟹等多种甲壳类动物。由WSSV引起的白斑病导致水产养殖出现高致死率并带来了重大的经济损失。因此,研究宿主先天免疫系统抗病毒的机制,对预防和控制甲壳类大规模爆发病毒性疾病具有重要意义。前期研究发现,泛素化和类泛素化途径在对虾的抗病毒免疫中发挥重要作用。E3泛素连接酶Parkin作为线粒体质量控制的分子,在线粒体自噬中发挥重要作用。最近又报道Parkin能够通过类似线粒体自噬的途径清除胞内的病原菌。但是一些详细机理还不清楚。通过转录组测序在日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）中鉴定出了泛素连接酶Parkin,我们把它其命名为sParkin （shrimp Parkin）。 sParkin的cDNA全长1656bp,这里面含有一个完整的开放阅读框含为552个氨基酸。其中包含N端的泛素样结构域（ubiquitin-like UBQ）和其后的RINGO, RING1, RING2结构域。组织分布显示sParkin在对虾的主要器官如心脏、肝胰腺、胃、鳃... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
符号说明
第一章 无脊椎动物先天免疫概述
    一. 细胞免疫和体液免疫
        1. 吞噬作用
        2. 包囊与结节的形成
        3. 胞吐作用
        4. 酚氧化酶级联反应
        5. 抗菌肽的表达
        6. 凝集素
        7. 免疫相关信号的激活
    二、泛素化修饰与免疫应答
        1. 泛素化过程
        2. 泛素化在免疫中的功能
            2.1. 泛素化修饰在Toll信号通路中的调控
            2.2. 泛素化修饰在IMD信号通路中的调控
            2.3. 泛素化修饰与抗病毒免疫
    三、泛素连接酶Parkin的研究进展
        1. E3的种类
        2. Parkin的结构
        3. Parkin的功能
            3.1. Parkin与线粒体自噬
            3.2. Parkin在神经性疾病保护方面的功能
            3.3. Parkin介导其有害底物通过蛋白酶体途径的降解
            3.4. Parkin介导的非降解信号转导
            3.5. Parkin参与的自噬性免疫
    四、本论文研究的目的与技术路线
第二章 泛素连接酶Parkin通过蛋白酶体和异体自噬途径介导对虾的抗病毒免疫反应
    一、引言
    二、材料与方法
        1. 菌株,载体,试剂,仪器
        2. 实验材料和免疫刺激
        3. 基因克隆及序列分析
        4. RNA的提取与cDNA的合成
        5. 连接转化与筛选阳性克隆
        6. 重组蛋白的表达与纯化
        7. 实时定量PCR
        8. 基因组DNA的提取
        9. Pull-down实验
        10. SDS-PAGE及Western blot
        11. 免疫细胞化学
        12. 体内RNA干扰及过表达实验
        13. 免疫胶体金实验
        14. 体外泛素化实验
        15. 蛋白酶体途径与自噬途径的抑制试验
    三、结果
        1. sParkin的序列分析
        2. sParkin的组织分布
        3. WSSV感染对虾后sParkin会呈现出表达量上调的趋势
        4. 干扰sParkin后能促进WSSV在体内的复制
        5. 干扰sParkin后对虾的存活率降低而过表达sParkin后对虾存活率升高
        6. rsParkin能与WSSV的囊膜蛋白VP19,VP24,VP26,VP28相结合,并主要通过rsParkin的UBQ结构域负责结合
        7. rsParkin能够与WSSV病毒粒子相结合
        8. sParkin能够在体外泛素化修饰VP19,VP24,VP26,VP28
        9. WSSV的囊膜蛋白泛素化修饰后进入蛋白酶体降解
        10. WSSV的囊膜蛋白泛素化修饰后进入自噬溶酶体途径降解
    四、讨论
总结与创新点
参考文献
致谢
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：2921586