鱼类出血性败血症病毒基质蛋白原核表达、多克隆抗体制备及应用
发布时间：2021-01-17 06:44
鱼类病毒性出血性败血症病毒（Viral Hemorrhagic Septicemia Virus,VHSV）,属于单负股RNA病毒目（Mononegavirales）,弹状病毒科（Rhabdoviridae）,诺拉弹状病毒属（Novirhabdovirus）,是一种能侵染虹鳟、牙鲆和大菱鲆等80多种鱼类,造成造血器官坏死和爆发性死亡的病原,给国内外水产养殖业带来了巨大经济损失。该病毒基因组编码的一种结构蛋白-基质蛋白（Matrix protein,M）,是一种多功能蛋白,在病毒侵染宿主细胞的过程中发挥着重要作用。为了对M蛋白的功能进行详细研究,本实验对M蛋白进行了原核表达,并制备了其多克隆抗体。主要内容如下:1.M融合蛋白的原核表达及多克隆抗体制备通过RT-PCR扩增VHSV病毒的M基因全长序列,将目的序列克隆到原核表达载体pET-32a（+）中,转化到BL21（DE3）感受态细胞后,进行IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示,经RT-PCR扩增获得了长度为606bp的M基因,经IPTG诱导得到的M融合蛋白主要以包涵体的形式存在,其大小约为36kDa,比预计略小。取切胶纯化的M融合蛋白,进...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pBLUE-T-M、pET32a-M重组质粒双酶切验证M,Super10000DNAmarker250200
目的蛋白表达的量较多（图3-2）。图 3-2 不同条件蛋白诱导表达产物的 SDS-PAGE 分析M：蛋白 maker; S：未诱导的大肠杆菌 BL21（DE3）；1：诱导后样品 A；2：诱导后样品 B；3：诱导后样品 C；4：诱导后样品 D。Fig. 3-2 SDS-PAGE analysis of prokaryotic expression products by different conditionsM, protein marker; S, non-induced Escherichia coli BL21(DE3) ; 1, induced sampleA; 2, induced sample B; 3, inducedsample C; 4, induced sample D;将诱导表达产物和未诱导对照进行 SDS-PAGE 电泳，结果显示在约 36kDa 大小的位置出现了差异表达蛋白，诱导菌体在此处出现了大量表达的蛋白质，其大小比软件预测的理论值略小。超声破碎处理诱导后的菌体，将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE 电泳检测，结果显示，融合蛋白主要存在于沉淀中，以不溶性的包涵体形1000050003000200015007505001000250200bp M pMD18-T-M pET-32a-MM S 1 S 2 S 3 S 4kDa1004030
图 3-3 蛋白诱导表达产物的 SDS-PAGE 分析的 BL21（DE3）大肠杆菌；2：诱导；3：诱导上M 融合蛋白，箭头所示为融合蛋白所在位置-3 SDS-PAGE analysis of prokaryotic expression prodization of non-induced BL21(DE3) Escherichia coli; 2cipitation; 5, purified fusion protein; The target protein验结果和抗体效价的检测抗原包被的浓度与酶标抗抗体的稀释 0.04 左右，结果如（表 3-1），当包被：1500 时，OD450值最趋向 1.0，此时的正式实验的值。通过两次重复采样结果阴性对照N和空白对照PBS检测数据的效价，如表 3-2 所示，待检血清效
本文编号：2982389
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pBLUE-T-M、pET32a-M重组质粒双酶切验证M,Super10000DNAmarker250200
目的蛋白表达的量较多（图3-2）。图 3-2 不同条件蛋白诱导表达产物的 SDS-PAGE 分析M：蛋白 maker; S：未诱导的大肠杆菌 BL21（DE3）；1：诱导后样品 A；2：诱导后样品 B；3：诱导后样品 C；4：诱导后样品 D。Fig. 3-2 SDS-PAGE analysis of prokaryotic expression products by different conditionsM, protein marker; S, non-induced Escherichia coli BL21(DE3) ; 1, induced sampleA; 2, induced sample B; 3, inducedsample C; 4, induced sample D;将诱导表达产物和未诱导对照进行 SDS-PAGE 电泳，结果显示在约 36kDa 大小的位置出现了差异表达蛋白，诱导菌体在此处出现了大量表达的蛋白质，其大小比软件预测的理论值略小。超声破碎处理诱导后的菌体，将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE 电泳检测，结果显示，融合蛋白主要存在于沉淀中，以不溶性的包涵体形1000050003000200015007505001000250200bp M pMD18-T-M pET-32a-MM S 1 S 2 S 3 S 4kDa1004030
图 3-3 蛋白诱导表达产物的 SDS-PAGE 分析的 BL21（DE3）大肠杆菌；2：诱导；3：诱导上M 融合蛋白，箭头所示为融合蛋白所在位置-3 SDS-PAGE analysis of prokaryotic expression prodization of non-induced BL21(DE3) Escherichia coli; 2cipitation; 5, purified fusion protein; The target protein验结果和抗体效价的检测抗原包被的浓度与酶标抗抗体的稀释 0.04 左右，结果如（表 3-1），当包被：1500 时，OD450值最趋向 1.0，此时的正式实验的值。通过两次重复采样结果阴性对照N和空白对照PBS检测数据的效价，如表 3-2 所示，待检血清效
本文编号：2982389
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