草鱼CRH、CRH-R1基因的全长克隆及表达分析

发布时间：2021-01-19 12:17

　　促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）是协调应激系统及下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）的关键因子,其不仅作用于垂体,同时也广泛分布在中枢神经系统和下丘脑,在脊椎动物的应激反应调节中起着至关重要的作用。本研究以草鱼为试验材料,克隆了草鱼CRH基因和CRH-R1基因的全长cDNA序列,对健康草鱼的心、脾、肾、肝、脑、皮、头肾、鳃8个组织进行了组织表达的差异分析,对草鱼CRH基因在心、脾、肾、肝、脑、头肾、鳃等组织进行组化分析。本文的主要研究结果如下：1、根据GenBank中斑马鱼、人类、鲤鱼的CRH基因序列的保守区设计简并引物,扩增出草鱼CRH基因的部分序列。再通过RACE扩增技术分别获得草鱼CRH基因的3’端和5’端序列,经序列拼接获得CRH基因的全长cDNA序列。经分析表明,草鱼的CRH基因的cDNA全长为907 bp,开放阅读框共489bp,共编码163个氨基酸,其中5’端非编码区大小126bp,3’端非编码区大小为292bp。草鱼CRH基因的相对分子量约为18KD。2、根据克隆得到的CRH基因设计荧光定量PCR引物,以管家基因β-actin为内参,采用荧光定量对草鱼CRH在心、肾、头肾... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 促肾上腺皮质激素释放激素家族
        1.1.1 促肾上腺皮质激素释放激素
        1.1.2 促肾上腺皮质激素释放激素受体
        1.1.3 促肾上腺皮质激素释放激素结合蛋白
    1.2 CRH和CRH-R1调节应激系统的作用
        1.2.1 CRH对于大鼠应激的研究
        1.2.2 CRH的体外细胞实验研究
        1.2.3 CRH-R1对于动物应激的研究
    1.3 鱼类CRH和CRH-R1的研究进展
    1.4 CRH和CRH-R1的展望
    1.5 本研究的目的与意义
第二章 草鱼CRH基因cDNA全长克隆与序列分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 药品及试剂
        2.1.3 主要实验仪器设备
        2.1.4 引物设计
    2.2 实验方法
        2.2.1 总RNA的提取
        2.2.2 草鱼CRH基因cDNA的克隆与测序
        2.2.3 CRH基因3’端和5’端片段扩增
        2.2.4 CRH基因3’端和5’端克隆、测序
        2.2.5 草鱼CRH基因全长cDNA序列拼接及分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 草鱼脑组织总RNA提取
        2.3.2 PCR扩增结果
        2.3.3 草鱼CRH基因序列分析
    2.4 讨论
第三章 草鱼CRH基因的表达分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 药品及试剂
        3.1.3 仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 荧光定量PCR检测草鱼CRH基因在不同组织中的表达
        3.2.2 草鱼CRH基因在不同组织的组织化学分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 草鱼总RNA的提取
        3.3.2 Real Time检测CRH基因在草鱼不同组织中的表达
    3.4 讨论
第四章 草鱼CRH-R1基因cDNA全长克隆与序列分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 药品及试剂
        4.1.3 主要实验仪器设备
        4.1.4 引物设计
    4.2 实验方法
        4.2.1 动物材料获得
        4.2.2 总RNA的提取
        4.2.3 草鱼CRH-R1基因cDNA的克隆与测序
        4.2.4 CRH-R1基因3’端和5’端片段扩增
        4.2.5 CRH-R1基因3’端和5’端克隆、测序
        4.2.6 草鱼CRH-R1基因全长cDNA序列拼接及分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 草鱼脑组织总RNA提取
        4.3.2 PCR扩增结果
        4.3.3 草鱼CRH-R1基因序列分析
    4.4 讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]神经肽CRH对原代大鼠皮层小胶质细胞NO、TNF-α和IL-6释放的影响[J]. 毕燕华,宋婷婷,陈学群,杜继曾.  中国应用生理学杂志. 2013(04)
[2]草鱼脂肪酸去饱和酶和延长酶基因cDNA全序列的克隆与分析[J]. 杜嵇华,梁旭方,程佳齐,朱滔,朱择敏,郁颖.  暨南大学学报(自然科学与医学版). 2011(05)
[3]盐度变化对斜带石斑鱼生理生化因子的影响[J]. 余德光,杨宇晴,王海英,谢骏,郁二蒙,王广军,龚望宝.  水产学报. 2011(05)
[4]疏肝饮对肝郁脾虚大鼠CRH和NT的调节作用[J]. 潘相学.  中国现代药物应用. 2010(12)
[5]鱼类的非特异性免疫概述[J]. 李新文,吕延玲.  黑龙江水产. 2010(02)
[6]促肾上腺皮质激素释放激素结合蛋白基因的研究进展[J]. 李媛媛,白春艳,吴潇,潘玉春.  上海畜牧兽医通讯. 2008(02)
[7]运动训练对应激大鼠下丘脑CRH mRNA的影响[J]. 李宁川,王金玉,黄美蓉.  中国体育科技. 2006(05)
[8]促肾上腺皮质激素释放激素受体的研究进展[J]. 金丹,沙金燕.  中国妇幼健康研究. 2006(03)
[9]动物应激医学及应激的分子调控机制[J]. 吴永魁,胡仲明.  中国兽医学报. 2005(05)
[10]不同治法方药对慢性心理应激大鼠下丘脑CRH mRNA表达的影响[J]. 严灿,吴丽丽,徐志伟,高丽.  中国药理学通报. 2004(10)

博士论文
[1]CRH与Urocortin经RhoGTPases调节巨噬细胞吞噬作用的机制研究[D]. 王伍超.第三军医大学 2009
[2]应激对黄颡鱼非特异性免疫细胞的影响[D]. 刘小玲.华中农业大学 2006
[3]大剂量GC对PVN神经元合成CRH的调节及机制研究[D]. 张岫竹.第三军医大学 2005

硕士论文
[1]CRH-R1同源性脱敏在大鼠创伤早期下丘脑室旁核CRH分泌调节中的作用[D]. 谭浩.第三军医大学 2003



本文编号：2986972