强力霉素单克隆抗体的制备及其快速检测试剂条的研究

发布时间：2021-02-06 21:48

　　现如今,我国作为水产养殖大国,渔药的使用必不可少,尤其是对抗生素的使用颇为依赖,从而引起许多抗生素残留等问题,不仅对养殖环境造成危害,对人体健康也构成了威胁。强力霉素就是一种最为常见的渔药抗生素,作为四环素类药物,可以治疗衣原体支原体感染,对革兰氏阳性菌和革兰阴性杆菌也有作用。强力霉素具有抗菌谱广,抗菌作用强等特点,因此被广泛地应用于水产养殖行业,但四环素类药物对人体的毒害作用也是非常大的,通常刺激人体胃肠道黏膜,影响食欲,引起呕吐,恶心等不良反应,对肝脏和肾脏也有损害,造成肝腹水及肿大。我国农业部《动物性食品中兽药最高残留限量》规定肌肉、肝脏、肾脏的最高残留量为100mg/kg、300mg/kg、600mg/kg,快速检测可以达到池边监控的目的,发现渔药残留超标,可进行简单处理,即延长休药期,防患于未然。本文目的为强力霉素单克隆抗体的制备及快速检测试剂条的研制。1、强力霉素人工抗原的合成与鉴定:强力霉素做为小分子半抗原,无免疫原性,采用戊二醛法（GA）将强力霉素分别与牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）进行偶联,偶联后得到强力霉素免疫原（DC-BSA）和强力霉素包被原（DC-... 

【文章来源】：鲁东大学山东省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 我国水产养殖现状
        1.1.1 我国水产养殖现状
        1.1.2 我国渔药使用现状
        1.1.3 引起渔药残留的原因
    1.2 渔药残留的危害
        1.2.1 渔药残留对动物体及环境的危害
        1.2.2 渔药残留对人体的危害
    1.3 渔药残留的检测方法
        1.3.1 微生物检测方法
        1.3.2 色质谱检测方法
        1.3.3 免疫分析检测法
    1.4 强力霉素概述
    1.5 单克隆抗体技术
    1.6 本文研究目的及意义
第2章 强力霉素人工抗原的制备及鉴定
    2.1 实验材料
        2.1.1 药品
        2.1.2 缓冲液配制
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 戊二醛法（GA）合成强力霉素人工抗原
        2.2.2 人工完全抗原的鉴定
            2.2.2.1 人工完全抗原蛋白浓度测定
            2.2.2.2 紫外分光光度法（UV法）
            2.2.2.3 SDS-PAGE电泳法检测
    2.3 实验结果
        2.3.1 人工完全抗原的浓度
        2.3.2 紫外扫描及SDS-PAGE电泳图谱
    2.4 结果分析与讨论
        2.4.1 偶联蛋白的选择
        2.4.2 人工完全抗原鉴定分析
第3章 强力霉素人工抗原免疫原性的评价
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验材料及药品
        3.1.2 缓冲液配制
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 实验动物
    3.2 实验方法
        3.2.1 小鼠免疫方法
        3.2.2 血清抗体效价的测定
        3.2.3 多抗血清特异性的检测
    3.3 实验结果
        3.3.1 血清抗体效价的测定结果
        3.3.2 多抗血清特异性的检测结果
    3.4 实验结果分析与讨论
        3.4.1 免疫方法对抗体效价的影响分析
        3.4.2 多抗血清特异性检测分析
第4章 制备与筛选杂交瘤细胞
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验材料及药品
        4.1.2 溶液配制
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 实验动物
    4.2 实验方法
        4.2.1 SP2/0 的复苏
        4.2.2 SP2/0 扩大培养.
        4.2.3 细胞融合
        4.2.4 杂交瘤细胞的培养及阳性筛选
    4.3 实验结果
        4.3.1 细胞融合结果及融合率
        4.3.2 杂交瘤细胞阳性孔的筛选
    4.4 实验结果分析与讨论
        4.4.1 培养状态良好的骨髓瘤细胞
        4.4.2 细胞融合方法的选择
第5章 杂交瘤细胞的克隆及单克隆抗体的制备
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验材料及药品
        5.1.2 溶液配制
        5.1.3 实验仪器
        5.1.4 实验动物
    5.2 实验方法
        5.2.1 杂交瘤细胞的克隆
        5.2.2 单抗细胞的筛选
        5.2.3 单抗的制备
        5.2.4 单抗的纯化
        5.2.5 单克隆抗体交叉实验
    5.3 实验结果
        5.3.1 单克隆抗体细胞的筛选
        5.3.2 单克隆抗体纯化后浓度
        5.3.3 交叉实验结果
    5.4 实验结果讨论与分析
        5.4.1 筛选克隆细胞
        5.4.2 克隆细胞的扩大培养
        5.4.3 单克隆抗体的制备及纯化
        5.4.4 特异性检测及交叉实验结果分析
第6章 强力霉素快速检测试剂条的制备
    6.1 实验材料.
        6.1.1 实验药品
        6.1.2 实验试剂配制
        6.1.3 实验仪器
    6.2 实验方法
        6.2.1 制备胶体金
        6.2.2 单克隆抗体胶体金的标记
        6.2.3 金标抗体最佳工作浓度的确定
        6.2.4 试剂条最低检测限确定
        6.2.5 胶体金试剂条的制备
    6.3 实验结果
        6.3.1 制备胶体金结果
        6.3.2 胶体金最佳标记量
        6.3.3 试剂盒最低检测量
        6.3.4 试剂条制备结果
        6.3.5 试剂条最低检测限结果
    6.4 实验结果分析与讨论
        6.4.1 胶体金制备
        6.4.2 胶体金最佳标记量及最佳工作浓度
        6.4.3 试剂条检测结果分析
第7章 实验结论
参考文献
附录A
    实验主要药品
    缓冲液配制
    实验仪器
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
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[3]广东典型海水养殖区沉积物及鱼体中磺胺类药物的残留及其对人体的健康风险评价[J]. 何秀婷,王奇,聂湘平,杨永涛,程章.  环境科学. 2014(07)
[4]锑的环境毒理效应研究进展[J]. 陈臻,吕文英.  广东化工. 2014(10)
[5]胶体金免疫层析法在畜禽产品兽药残留检测中的应用[J]. 薛晓,荣霞,叶自霞,刘力.  动物医学进展. 2013(12)
[6]除草剂扑草净在海参中的生物富集与消除效应研究[J]. 田秀慧,宫向红,徐英江,任传博,刘慧慧,刘义豪,王玮云,王茂剑.  现代食品科技. 2013(07)
[7]渔业抗生素残留的危害及防范措施[J]. 王文彬,丁卫国.  渔业致富指南. 2013(11)
[8]动物源性食品兽药残留及其危害[J]. 李存.  兽医导刊. 2013(03)
[9]磺胺类药物胶体金快速检测试剂条的研制及在水产品中的应用[J]. 张敏,李翘,盛慧萍.  中国农学通报. 2013(08)
[10]蜂蜜中四环素类抗生素的放射免疫法检测[J]. 周浩,李俊霞,杨红,肖全伟,叶梅,万渝平.  食品研究与开发. 2012(11)

硕士论文
[1]强力霉素单克隆抗体的制备及其初步应用研究[D]. 余少梅.华中农业大学 2012
[2]头孢噻肟钠人工抗原的合成与单克隆抗体的研究[D]. 王守海.鲁东大学 2012



本文编号：3021145