东北林蛙MyD88的克隆及虹彩病毒胁迫下其通路中相关分子的表达研究
发布时间：2021-02-07 01:17
近二十年,两栖类种群数量呈全球性急剧减少趋势,研究表明传染病的产生和蔓延成为两栖类种群数量下降的主要原因。作为中国东北地区优势两栖物种,东北林蛙（Rana dybowskii）也正遭受着病原微生物的威胁,其中虹彩病毒科蛙虹彩病毒属（Ranavirus）是其中一重要因素。Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）信号通路作为固有免疫系统的重要组成部分,可以识别病原微生物所携带的模式分子（pathogen-associated molecular patterns, PAMP）,进而启动固有免疫应答以及调控适应性免疫应答。MyD88是TLR信号通路中重要接头蛋白,被除TLR3之外其它所有TLRs共用。本研究应用cDNA末端快速扩增技术（rapid-amplification of cDNA ends, RACE）获得东北林蛙MyD88全长cDNA序列,通过生物信息学方法对东北林蛙MyD88进行了保守结构域查找（conserved domain research）、多序列比对（multiple sequence alignment）、同源性分析（homology a...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 两栖动物
1.1.1 两栖动物概述
1.1.2 两栖动物生存现状
1.1.3 两栖动物锐减的诱因
1.2 东北林蛙
1.2.1 东北林蛙概述
1.2.2 东北林蛙的研究意义
1.3 虹彩病毒
1.3.1 虹彩病毒概述
1.3.2 虹彩病毒的致病机制
1.3.3 虹彩病毒对两栖动物的危害
1.4 TLR信号通路
1.4.1 TLRs概述
1.5 TLR信号通路的转导
1.6 TLRs的应用
1.7 东北林蛙固有免疫研究现状
1.8 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物及病原微生物的暂养与保存
2.1.2 主要实验仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 mRNA序列及引物设计
2.2.2 RGV接种及组织样品采集
2.2.3 组织总RNA提取
2.2.4 RACE法获得东北林蛙MyD88全长cDNA序列
2.2.5 东北林蛙MyD88的生物信息学分析
2.2.6 cDNA合成
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.3 本章小结
3 结果
3.1 RACE结果
3.2 东北林蛙MyD88的生物信息学分析
3.2.1 全长cDNA序列及保守结构域查找
3.2.2 多序列比对及同源性分析
3.2.3 系统发育分析
3.3 引物特异性及扩增效率的鉴定
3.3.1 β-actin标准曲线及溶解曲线
3.3.2 MyD88标准曲线及溶解曲线
3.3.3 IRAK4标准曲线及溶解曲线
3.3.4 TRAF6标准曲线及溶解曲线
3.3.5 TRAF3标准曲线及溶解曲线
3.4 RGV胁迫下东北林蛙MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3的差异表达变化
3.4.1 东北林蛙皮肤MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.4.2 东北林蛙肾脏MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.4.3 东北林蛙肝脏MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.4.4 东北林蛙心脏MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.5 本章小结
4 讨论
4.1 TLRs与病毒识别
4.2 东北林蛙MyD88与TLR信号通路
4.3 东北林蛙TLR信号通路与抗病毒免疫反应
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]育成期林蛙棚内养殖引种白菜抗病技术[J]. 邓际华,程越超,郝迪萩,宋英博,王囡囡. 特种经济动植物. 2015(06)
[2]大鲵虹彩病毒的形态结构及其包涵体特征[J]. 周小愿,张星朗,吉红,韩亚慧,贾秋红,高宏伟. 淡水渔业. 2015(01)
[3]虹彩病毒胁迫下东北林蛙NF-κB和I-κB的差异表达[J]. 周旋,肖向红,张晶钰,柴龙会,牛曙东,吕晨. 东北林业大学学报. 2013(10)
[4]棘胸蛙嗜水气单胞菌的生物被膜特性[J]. 马有智. 浙江农业科学. 2013(07)
[5]东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST对小鼠皮肤创伤愈合的作用[J]. 苗慧敏,肖向红,孙婷婷,漆俊,柴龙会,张晶钰,郭娜. 中国实验方剂学杂志. 2011(23)
[6]东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的表达、纯化及抑菌活性分析[J]. 郭娜,肖向红,徐义刚,柴龙会,张晶钰. 中国农业科学. 2011(15)
[7]中国两栖动物保护需求总述[J]. 谢锋,刘惠宁,Simon N Stuart,Janice S Chanson,Neil A Cox,Debra L Fischman. 中国科学C辑:生命科学. 2006(06)
[8]两栖动物在水体污染生物监测中作为指示生物的研究概况[J]. 徐士霞,李旭东,王跃招. 动物学杂志. 2003(06)
[9]中国东北地区林蛙属物种的分类学研究（两栖纲:蛙科）[J]. 谢锋,叶昌媛,费梁,江建平,曾晓茂,松井正文. 动物分类学报. 1999(02)
硕士论文
[1]虹彩病毒胁迫下东北林蛙皮肤TLR mRNA的差异表达[D]. 吴立舒.东北林业大学 2012
[2]长白山保护区无尾两栖类壶菌病生态危害识别与风险表征[D]. 白世卓.东北林业大学 2012
[3]长白山保护区两栖类虹彩病毒空间分布及生态安全初探[D]. 薛颖.东北林业大学 2012
[4]黑龙江省东北林蛙虹彩病毒带毒率调查与基因分型研究[D]. 许凯.东北林业大学 2010
本文编号：3021401
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 两栖动物
1.1.1 两栖动物概述
1.1.2 两栖动物生存现状
1.1.3 两栖动物锐减的诱因
1.2 东北林蛙
1.2.1 东北林蛙概述
1.2.2 东北林蛙的研究意义
1.3 虹彩病毒
1.3.1 虹彩病毒概述
1.3.2 虹彩病毒的致病机制
1.3.3 虹彩病毒对两栖动物的危害
1.4 TLR信号通路
1.4.1 TLRs概述
1.5 TLR信号通路的转导
1.6 TLRs的应用
1.7 东北林蛙固有免疫研究现状
1.8 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物及病原微生物的暂养与保存
2.1.2 主要实验仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 mRNA序列及引物设计
2.2.2 RGV接种及组织样品采集
2.2.3 组织总RNA提取
2.2.4 RACE法获得东北林蛙MyD88全长cDNA序列
2.2.5 东北林蛙MyD88的生物信息学分析
2.2.6 cDNA合成
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.3 本章小结
3 结果
3.1 RACE结果
3.2 东北林蛙MyD88的生物信息学分析
3.2.1 全长cDNA序列及保守结构域查找
3.2.2 多序列比对及同源性分析
3.2.3 系统发育分析
3.3 引物特异性及扩增效率的鉴定
3.3.1 β-actin标准曲线及溶解曲线
3.3.2 MyD88标准曲线及溶解曲线
3.3.3 IRAK4标准曲线及溶解曲线
3.3.4 TRAF6标准曲线及溶解曲线
3.3.5 TRAF3标准曲线及溶解曲线
3.4 RGV胁迫下东北林蛙MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3的差异表达变化
3.4.1 东北林蛙皮肤MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.4.2 东北林蛙肾脏MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.4.3 东北林蛙肝脏MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.4.4 东北林蛙心脏MyD88、IRAK4、TRAF6和TRAF3表达量变化
3.5 本章小结
4 讨论
4.1 TLRs与病毒识别
4.2 东北林蛙MyD88与TLR信号通路
4.3 东北林蛙TLR信号通路与抗病毒免疫反应
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]育成期林蛙棚内养殖引种白菜抗病技术[J]. 邓际华,程越超,郝迪萩,宋英博,王囡囡. 特种经济动植物. 2015(06)
[2]大鲵虹彩病毒的形态结构及其包涵体特征[J]. 周小愿,张星朗,吉红,韩亚慧,贾秋红,高宏伟. 淡水渔业. 2015(01)
[3]虹彩病毒胁迫下东北林蛙NF-κB和I-κB的差异表达[J]. 周旋,肖向红,张晶钰,柴龙会,牛曙东,吕晨. 东北林业大学学报. 2013(10)
[4]棘胸蛙嗜水气单胞菌的生物被膜特性[J]. 马有智. 浙江农业科学. 2013(07)
[5]东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST对小鼠皮肤创伤愈合的作用[J]. 苗慧敏,肖向红,孙婷婷,漆俊,柴龙会,张晶钰,郭娜. 中国实验方剂学杂志. 2011(23)
[6]东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的表达、纯化及抑菌活性分析[J]. 郭娜,肖向红,徐义刚,柴龙会,张晶钰. 中国农业科学. 2011(15)
[7]中国两栖动物保护需求总述[J]. 谢锋,刘惠宁,Simon N Stuart,Janice S Chanson,Neil A Cox,Debra L Fischman. 中国科学C辑:生命科学. 2006(06)
[8]两栖动物在水体污染生物监测中作为指示生物的研究概况[J]. 徐士霞,李旭东,王跃招. 动物学杂志. 2003(06)
[9]中国东北地区林蛙属物种的分类学研究（两栖纲:蛙科）[J]. 谢锋,叶昌媛,费梁,江建平,曾晓茂,松井正文. 动物分类学报. 1999(02)
硕士论文
[1]虹彩病毒胁迫下东北林蛙皮肤TLR mRNA的差异表达[D]. 吴立舒.东北林业大学 2012
[2]长白山保护区无尾两栖类壶菌病生态危害识别与风险表征[D]. 白世卓.东北林业大学 2012
[3]长白山保护区两栖类虹彩病毒空间分布及生态安全初探[D]. 薛颖.东北林业大学 2012
[4]黑龙江省东北林蛙虹彩病毒带毒率调查与基因分型研究[D]. 许凯.东北林业大学 2010
本文编号：3021401
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