溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统C-环组分VscQ的原核表达及免疫原性
发布时间：2021-03-03 05:43
为探究溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）HY9901菌株Ⅲ型分泌系统（Type Ⅲ secretion system,T3SS）胞质环（C-环）组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌vscQ序列（NO.MN862753）,设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscQ基因,进行序列分析。结果显示,该基因全长969bp,预计分子量35.61kDa。将vscQ基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEXvscQ。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后,能在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中表达分子质量约为61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表达的最优条件为:0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h。用纯化后的VscQ融合蛋白免疫白兔,获得高效多克隆抗体,抗体效价为1∶121500。兔抗VscQ血清能与重组VscQ蛋白发生特异性反应,表明T3SS C-环组分VscQ可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。
【文章来源】：安徽农学通报. 2020,26(18)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
Vsc Q原核表达载体的鉴定
将p GEX-vsc Q质粒转化大肠杆菌BL21(DE3）中，经IPTG诱导可表达相对分子质量约61.6kDa的VscQ蛋白（图2泳道2），其中VscQ的预计分子量35.6k Da,p GEX-4T-1表达的融合标签为26k Da。对照组均未表达Vsc Q蛋白。2.3 诱导表达的条件优化
IPTG诱导浓度0.4mmol/L时Vsc Q表达量最大（图3A）；诱导时间为12h时表达量最佳（图3B）；诱导温度为37℃时全菌、沉淀中蛋白表达量较15℃时高，上清中几乎不表达（图3C），而诱导温度为15℃时上清中Vsc Q蛋白表达量较大（图4）。通过对IPTG浓度、诱导时间、诱导温度的优化，确定Vsc Q的最佳诱导表达条件为：0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h。图4 p GEX-vsc Q在上清和沉淀中的表达
【参考文献】：
期刊论文
[1]海水养殖贝类弧菌病流行暴发及其环境影响因素研究进展[J]. 张颖雪,苏洁,樊景凤,叶仕根. 海洋环境科学. 2020(03)
[2]养殖贝类病原弧菌的耐药性及防治方法研究进展[J]. 张颖雪,苏洁,叶仕根. 江西水产科技. 2019(05)
[3]复方中草药及其与抗生素联用对斜带石斑鱼溶藻弧菌病的治疗效果[J]. 徐晓津,李秀华,马一帆,李慧耀,祁欣,郑江,吕海龙,鄢庆枇. 水产学报. 2019(05)
[4]对虾弧菌病的研究进展[J]. 吕莉,朱志东,邓剑壕,冯豆,蔡延渠,朱宇嘉,朱盛山. 水产学杂志. 2018(04)
[5]疫苗及其在水生动物疾病预防中的应用(一)[J]. 王玉堂. 中国水产. 2018(07)
[6]一起菲律宾蛤仔出血病病原的鉴定[J]. 李启蒙,朱贝贝,方皓,刘金玉,郭志明,王雪鹏. 山东畜牧兽医. 2017(10)
[7]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscP基因的克隆与生物信息学分析[J]. 李静,庞欢瑛,简纪常,鲁义善,汤菊芬,吴灶和. 广东海洋大学学报. 2016(04)
[8]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统注射装置蛋白VscO的原核表达及免疫原性[J]. 庞欢瑛,周泽军,丁燏,黄郁葱,吴灶和,简纪常. 广东海洋大学学报. 2014(03)
[9]溶藻弧菌acfA基因克隆与生物信息学分析[J]. 程海燕,庞欢瑛,鲁义善,简纪常,吴灶和,蔡双虎. 广东海洋大学学报. 2014(01)
[10]文蛤疾病学研究进展[J]. 刘连生,闫茂仓,赵海泉,李国,马爱敏,林志华. 水产科学. 2009(04)
博士论文
[1]溶藻弧菌主要毒力相关基因的克隆、表达及其免疫原性研究[D]. 钱荣华.浙江大学 2007
硕士论文
[1]中草药提取物与抗生素联用抑制副溶血弧菌机制研究[D]. 陈会.江苏大学 2018
[2]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统“针状样”毒力装置相关基因功能的研究[D]. 李静.广东海洋大学 2016
[3]迟钝爱德华氏菌与创伤弧菌外膜蛋白基因原核表达及其免疫原性研究[D]. 段丽华.集美大学 2016
[4]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的功能研究[D]. 周泽军.广东海洋大学 2013
本文编号：3060726
【文章来源】：安徽农学通报. 2020,26(18)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
Vsc Q原核表达载体的鉴定
将p GEX-vsc Q质粒转化大肠杆菌BL21(DE3）中，经IPTG诱导可表达相对分子质量约61.6kDa的VscQ蛋白（图2泳道2），其中VscQ的预计分子量35.6k Da,p GEX-4T-1表达的融合标签为26k Da。对照组均未表达Vsc Q蛋白。2.3 诱导表达的条件优化
IPTG诱导浓度0.4mmol/L时Vsc Q表达量最大（图3A）；诱导时间为12h时表达量最佳（图3B）；诱导温度为37℃时全菌、沉淀中蛋白表达量较15℃时高，上清中几乎不表达（图3C），而诱导温度为15℃时上清中Vsc Q蛋白表达量较大（图4）。通过对IPTG浓度、诱导时间、诱导温度的优化，确定Vsc Q的最佳诱导表达条件为：0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h。图4 p GEX-vsc Q在上清和沉淀中的表达
【参考文献】：
期刊论文
[1]海水养殖贝类弧菌病流行暴发及其环境影响因素研究进展[J]. 张颖雪,苏洁,樊景凤,叶仕根. 海洋环境科学. 2020(03)
[2]养殖贝类病原弧菌的耐药性及防治方法研究进展[J]. 张颖雪,苏洁,叶仕根. 江西水产科技. 2019(05)
[3]复方中草药及其与抗生素联用对斜带石斑鱼溶藻弧菌病的治疗效果[J]. 徐晓津,李秀华,马一帆,李慧耀,祁欣,郑江,吕海龙,鄢庆枇. 水产学报. 2019(05)
[4]对虾弧菌病的研究进展[J]. 吕莉,朱志东,邓剑壕,冯豆,蔡延渠,朱宇嘉,朱盛山. 水产学杂志. 2018(04)
[5]疫苗及其在水生动物疾病预防中的应用(一)[J]. 王玉堂. 中国水产. 2018(07)
[6]一起菲律宾蛤仔出血病病原的鉴定[J]. 李启蒙,朱贝贝,方皓,刘金玉,郭志明,王雪鹏. 山东畜牧兽医. 2017(10)
[7]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscP基因的克隆与生物信息学分析[J]. 李静,庞欢瑛,简纪常,鲁义善,汤菊芬,吴灶和. 广东海洋大学学报. 2016(04)
[8]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统注射装置蛋白VscO的原核表达及免疫原性[J]. 庞欢瑛,周泽军,丁燏,黄郁葱,吴灶和,简纪常. 广东海洋大学学报. 2014(03)
[9]溶藻弧菌acfA基因克隆与生物信息学分析[J]. 程海燕,庞欢瑛,鲁义善,简纪常,吴灶和,蔡双虎. 广东海洋大学学报. 2014(01)
[10]文蛤疾病学研究进展[J]. 刘连生,闫茂仓,赵海泉,李国,马爱敏,林志华. 水产科学. 2009(04)
博士论文
[1]溶藻弧菌主要毒力相关基因的克隆、表达及其免疫原性研究[D]. 钱荣华.浙江大学 2007
硕士论文
[1]中草药提取物与抗生素联用抑制副溶血弧菌机制研究[D]. 陈会.江苏大学 2018
[2]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统“针状样”毒力装置相关基因功能的研究[D]. 李静.广东海洋大学 2016
[3]迟钝爱德华氏菌与创伤弧菌外膜蛋白基因原核表达及其免疫原性研究[D]. 段丽华.集美大学 2016
[4]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的功能研究[D]. 周泽军.广东海洋大学 2013
本文编号：3060726
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