sigX和flgM基因在变形假单胞菌感染斜带石斑鱼过程中的功能
发布时间：2021-03-04 19:40
变形假单胞菌（Pseudomonas plecoglossicida）,又称杀香鱼假单胞菌,是一种需氧型革兰氏阴性杆菌。该菌能引起大黄鱼（Larimichthys crocea）、斜带石斑鱼（Epihephelus coioides）等经济海水鱼类的“内脏白点病”,导致养殖鱼类在短期内大量死亡,造成严重的经济损失。虽然变形假单胞菌在海水养殖领域造成的危害巨大,但是对其致病机制的研究才刚刚起步。在实验室前期测定的变形假单胞菌体外不同温度及致病过程的转录组数据的基础上,本研究以本实验前期实验分离的高致病性变形假单胞菌NZBD9菌株为研究对象,斜带石斑鱼为宿主,结合RNAi和RNA测序技术研究sigX基因和flgM基因在变形假单胞菌感染斜带石斑鱼过程中的功能。主要内容如下:（1）通过RNAi技术分别构建了5株变形假单胞菌sigX基因和flgM基因的沉默突变株,用qRT-PCR测定基因的表达量,结果显示sigX-shRNA-216菌株和flgM-shRNA-18菌株的沉默效果最好,其沉默效率分别达到99.27%和99.72%。以sigX-shRNA-216菌株和flgM-shRNA-18菌株为...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
sigX基因和flgM基因在沉默株中的表达量
图 2-2 sigX 基因和 flgM 基因在沉默株中的表达量。 a：sigX 基因在构建的 5 株沉默突变株中的表达量；图 b：flgM 基因在构建的 5 株沉默突变★★★代表 P-value＜0.001。 qRT-PCR 法验证，构建的所有的沉默突变株中目的基因表达量全部下降，下在 sigX 沉默突变株中，sigX 基因的表达量在 sigX-RNAi-216、sigX-RNANAi-240、sigX-RNAi-396 和 sigX-RNAi-405 菌株中的表达量分别是野生、35.82%、39.19%、25.93%和 20.46%（图 2.2a）。在 flgM 沉默突变株中，表 达 量 在 flgM-RNAi-13 、 flgM-RNAi-14 、 flgM-RNAi-15 、 flgM-RNANAi-214 菌株中的表达量分别是野生株中的 0.42%、0.29%、0.39%、0.28%和.2b）。分别将沉默效果最好的 sigX-RNAi-216 和 flgM-RNAi-18 菌株命名为变igX 沉默株（sigX-RNAi strain）和 flgM（flgM-RNAi strain）沉默株，进行后续 变形假单胞菌各菌株生长曲线
图 2-4 斜带石斑鱼被变形假单胞菌后的生存率。注：黑色线条代表被变形假单胞菌野生株感染；红色线条代表被 flgM 沉默株感染；绿色线条代表被 sigX 沉默株感染；蓝色线条代表被 PBS 感染。★★★代表 P-value＜0.001。被 PBS 感染的斜带石斑鱼在实验周期中没有出现死亡；被变形假单胞菌野生株感染的斜带石斑鱼在感染的第 3 天出现死亡，存活率下降至 80%，第 4 天出现大量死亡，存活率下降至 20%，第 5 天全部死亡，存活率降至 0；被 sigX 沉默株感染的斜带石斑鱼在感染的第 3 天出现少量死亡，存活率下降至 95%，第 4 天继续出现少量死亡，存活率下降至 70%第 5 天出现大量死亡，存活率下降至 40%，第 6 天出现少量死亡，存活率下降至 20%，此后不再出现死亡，最终存活率较野生株感染时上升 20%；被 flgM 沉默株感染的斜带石斑鱼4 天出现少量死亡，存活率下降至 95%，第 5 第 6 天无死亡，第 7 天出现死亡，存活率下降至 80%，第 8 天无死亡，第 9 天少量死亡，存活率下降至 75%，此后不再出现死亡，最终存活率较野生株感染时上升 75%。与斜带石斑鱼被变形假单胞菌野生株感染后的生存情况相比，被 sigX 沉默株感染后，死亡时间延长，且生存率上升了 20%；被 flgM 沉默株感染后，死亡时间延长，且生存率上升 75%（图 2.4）。
本文编号：3063795
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
sigX基因和flgM基因在沉默株中的表达量
图 2-2 sigX 基因和 flgM 基因在沉默株中的表达量。 a：sigX 基因在构建的 5 株沉默突变株中的表达量；图 b：flgM 基因在构建的 5 株沉默突变★★★代表 P-value＜0.001。 qRT-PCR 法验证，构建的所有的沉默突变株中目的基因表达量全部下降，下在 sigX 沉默突变株中，sigX 基因的表达量在 sigX-RNAi-216、sigX-RNANAi-240、sigX-RNAi-396 和 sigX-RNAi-405 菌株中的表达量分别是野生、35.82%、39.19%、25.93%和 20.46%（图 2.2a）。在 flgM 沉默突变株中，表 达 量 在 flgM-RNAi-13 、 flgM-RNAi-14 、 flgM-RNAi-15 、 flgM-RNANAi-214 菌株中的表达量分别是野生株中的 0.42%、0.29%、0.39%、0.28%和.2b）。分别将沉默效果最好的 sigX-RNAi-216 和 flgM-RNAi-18 菌株命名为变igX 沉默株（sigX-RNAi strain）和 flgM（flgM-RNAi strain）沉默株，进行后续 变形假单胞菌各菌株生长曲线
图 2-4 斜带石斑鱼被变形假单胞菌后的生存率。注：黑色线条代表被变形假单胞菌野生株感染；红色线条代表被 flgM 沉默株感染；绿色线条代表被 sigX 沉默株感染；蓝色线条代表被 PBS 感染。★★★代表 P-value＜0.001。被 PBS 感染的斜带石斑鱼在实验周期中没有出现死亡；被变形假单胞菌野生株感染的斜带石斑鱼在感染的第 3 天出现死亡，存活率下降至 80%，第 4 天出现大量死亡，存活率下降至 20%，第 5 天全部死亡，存活率降至 0；被 sigX 沉默株感染的斜带石斑鱼在感染的第 3 天出现少量死亡，存活率下降至 95%，第 4 天继续出现少量死亡，存活率下降至 70%第 5 天出现大量死亡，存活率下降至 40%，第 6 天出现少量死亡，存活率下降至 20%，此后不再出现死亡，最终存活率较野生株感染时上升 20%；被 flgM 沉默株感染的斜带石斑鱼4 天出现少量死亡，存活率下降至 95%，第 5 第 6 天无死亡，第 7 天出现死亡，存活率下降至 80%，第 8 天无死亡，第 9 天少量死亡，存活率下降至 75%，此后不再出现死亡，最终存活率较野生株感染时上升 75%。与斜带石斑鱼被变形假单胞菌野生株感染后的生存情况相比，被 sigX 沉默株感染后，死亡时间延长，且生存率上升了 20%；被 flgM 沉默株感染后，死亡时间延长，且生存率上升 75%（图 2.4）。
本文编号：3063795
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