南美白对虾4种病原体可视化快速检测试剂盒（生物芯片法）的研发

发布时间：2021-03-11 00:57

　　利用反向点杂交技术,研制灵敏度较高的南美白对虾4种病原体检测试剂盒,其检测指标包括致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌（VpAHPND）、对虾白斑综合征病毒（WSSV）、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）、对虾肝肠胞虫（EHP）,用重组质粒分别对其进行了最低检测限测试,并与现有推荐方法进行比较。本研究研发的检测试剂盒对4种病原体的最低检测限为1μl 10～100拷贝。特异性检测结果表明,4种病原体彼此不产生交叉反应,特异性良好,与各病原体推荐检测方法的结果相比,阳性符合率完全一致。本研究研发的检测试剂盒具有操作方便,灵敏度高,特异性好,检测时间短,设备要求简单等特点,适合应用于南美白对虾VpAHPND、WSSV、IHHNV、EHP的检测、筛查工作中。 

【文章来源】：江苏农业学报. 2020,36(03)北大核心

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

普通PCR法和生物芯片法对IHHNV的检测结果

表2 探针及其序列Table 2 Sequences of the probes used in this study 探针名称 序列 (5′→3′) 探针长度 (bp) 检测对象 Pir-P AGGAAAACCAACAGCAGGTGA 21 pirB 基因 EHP-P CATCGCTCTCGCAACACCCA 20 对虾肝肠胞虫 vp28-P TAGAGACGGGGGTGAAGGAG 20 对虾白斑综合征病毒 IHHNV-P CTTTCGGCGTGTTCTTCGTC 20 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒 18S rDNA-P CTAGGGCGGTATCTGATCGC 20 南美白对虾 HC TTTTTTTAAATGTTGGGGAA 20 扩增产物1.2.5 对虾组织样本提取

图5显示,将最低检测限浓度的质粒与阴性虾基因组混合,VpAHPND、WSSV、IHHNV的最低检测限可达到1 μl 10拷贝,EHP的最低检测限为1 μl 100拷贝,VpAHPND、IHHNV、WSSV、EHP在最低检测限下的信号均明显增强。图3 生物芯片检测体系杂交时间的优化

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪伪狂犬病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 温书香,安利民,赵协,张军,潘燕燕,葛位西.  江苏农业科学. 2019(07)
[2]云南地区猪毕氏微孢子虫的分子检测及其基因型鉴定[J]. 石莲琴,翟国莲,吴杰,李朝,赵国洪,邹丰才.  南方农业学报. 2018(08)
[3]Comparison of the Tellgenplex HPV DNA test with the PCR-reverse dot blot assay for human papillomavirus genotyping[J]. Ya-Chao Yao,Nan Li,Liang-Shan Hu,Ya-Hong Li,Zhi Zhang.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2018(02)
[4]应用锁式探针结合斑点杂交技术检测甜瓜细菌性叶斑病[J]. 徐瑞,胡白石,田艳丽,黄艳宁,谢进,曹亮,彭斯文,朱校奇.  中国农业科学. 2017(04)



本文编号：3075580