不同食性鱼类4型葡萄糖转运蛋白（GLUT4）基因克隆及表达比较研究

发布时间：2021-03-12 13:03

　　本实验以凶猛肉食性军曹鱼,温和肉食性卵形鲳鲹,杂食性罗非鱼为实验对象,采用RACE-PCR技术克隆了卵形鲳鲹、军曹鱼GLUT4基因,分析其在结构和进化上的区别;比较三种食性养殖鱼类在不同饲料糖水平（高CH,中CM,低CL,罗非鱼:40%、30%、20%,卵形鲳鲹:39%、26%、13%,军曹鱼:36%、24%、12%）下各组织中GLUT4基因表达量的变化。研究不同饲料糖水平对尼罗罗非鱼生长和糖代谢的影响,并结合糖耐量实验对尼罗罗非鱼血糖、胰岛素、类胰岛素生长因子1（IGF-1）等血浆生化指标及肝/肌糖原,GLUT4基因表达进行了检测,旨在探索不同食性鱼类对葡萄糖利用能力低下的耐受机理与分子机制。主要研究内容如下:1、卵形鲳鲹和军曹鱼的GLUT4基因克隆和序列分析成功克隆了卵形鲳鲹GLUT4（GB:KP693688.1）基因全长1937 bp,ORF为1521bp,编码506aa;军曹鱼GLUT4（GB:KP684143.1）全长2241bp,ORF为1524b bp,编码507aa。卵形鲳鲹和军曹鱼GLUT4序列和人类的GLUT4具有较高的同源性,多序列比较分析显示,关键功能位点如FQ... 

【文章来源】：广东海洋大学广东省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词 （Abbreviation）
1 前言
    1.1 鱼类对糖利用的研究进展
    1.2 鱼类GLUT4研究进展
        1.2.1 胰岛素敏感性糖转运蛋白GLUT4
        1.2.2 GLUT4基因结构的演化
        1.2.3 鱼类GLUT4表达的调控
    1.3 本论文的研究意义与目的
2 卵形鲳鲹和军曹鱼GLUT4分子克隆及序列分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 仪器与设备
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要溶液的配制
        2.1.5 生物信息学分析方法
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验样品采集
        2.2.2 DH5α感受态细胞的制备
        2.2.3 总RNA的提取和检测
        2.2.4 c DNA第一链的合成
        2.2.5 引物设计
    2.3 卵形鲳鲹和军曹鱼GLUT4基因克隆
        2.3.1 PCR产物的纯化回收
        2.3.2 PCR纯化产物的连接转化
        2.3.3 阳性菌落PCR鉴定与测序
        2.3.4 卵形鲳鲹GLUT4基因的RACE克隆
    2.4 结果和分析
        2.4.1 核心片段获取
        2.4.2 GLUT4克隆结果与序列分析
    2.5 讨论
3、不同饲料糖水平对不同食性鱼类GLUT4组织特异性表达的影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料及饲养管理
        3.1.2 仪器与试剂
        3.1.3 样品采集
        3.1.4 荧光定量PCR
        3.1.5 数据统计与分析
    3.2 结果
        3.2.1 GLUT4的组织特异性表达
        3.2.2 不同饲料糖水平对军曹鱼、卵形鲳鲹、军曹鱼组织中GLUT4表达量的影响
    3.3 讨论
4 三种不同饲料糖水平对尼罗罗非鱼生长、糖代谢及GLUT4表达的影响
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料及饲养管理
        4.1.2 样品采集
        4.1.3 血液生化指标测定
        4.1.4 糖代谢酶活性的测定
        4.1.5 总RNA提取和荧光定量c DNA模板的合成
        4.1.6 GLUT4实时荧光定量检测
        4.1.7 相关指标计算及数据分析
    4.2 结果
        4.2.1 三种不同饲料糖水平对尼罗罗非鱼生长的影响
        4.2.2 三种不同饲料糖水平对尼罗罗非鱼血液生化指标的影响
        4.2.3 三种不同饲料糖水平对尼罗罗非鱼肝肌糖原的影响
        4.2.4 三种不同饲料糖水平对尼罗罗非鱼糖代谢关键酶活性的影响
        4.2.5 三种不同饲料糖水平对尼罗罗非鱼GLUT4表达的影响
    4.3 讨论
5 三种不同饲料糖水平下，注射葡萄糖对尼罗罗非鱼糖代谢和GLUT4表达的影响
    5.1 实验材料及饲养管理
    5.2 材料与方法
    5.3 结果
        5.3.1 三种不同饲料糖水平下，注射葡萄糖对尼罗罗非鱼血浆生化指标的影响
        5.3.2 三种不同饲料糖水平下，注射葡萄糖对尼罗罗非鱼肝/肌糖原的影响
        5.3.3 三种不同饲料糖水平下，注射葡萄糖对尼罗罗非鱼肝脏糖代谢酶GK、PK和PEPCK的影响
        5.3.4 三种不同饲料糖水平下，注射葡萄糖对尼罗罗非鱼肌肉中GLUT4，肝脏中IGF-1 表达量的影响
    5.4 讨论
6 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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[3]不同添加量的糖对军曹鱼生长代谢的影响[D]. 刘迎隆.中国海洋大学 2014
[4]饲料中不同淀粉、蛋白质和脂肪水平对罗非鱼生长及生理生化指标的影响[D]. 陈孟瑶.集美大学 2014
[5]注射葡萄糖对罗非鱼糖代谢、胰岛素受体和GLUT4基因表达的影响[D]. 刘含亮.山东农业大学 2012
[6]鲤胰岛素样生长因子的克隆与表达研究[D]. 商汉桥.华中农业大学 2007



本文编号：3078354