团头鲂JAK家族基因的鉴定和表达分析
发布时间：2021-03-23 06:51
大量的研究表明,JAK/STAT信号通路作为非特异性免疫系统的重要组成,在脊椎动物抗细菌活动中起着关键的作用。JAK激酶是一种非受体型络氨酸激酶,在哺乳动物中,已被证实是参与干扰素或白介素介导信号传导的关键蛋白。团头鲂（Megalobrama amblycephala）是我国重要的淡水养殖鱼类之一,但由嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）引起的细菌性败血症严重影响了其经济效益。为了探究团头鲂JAK家族基因是否参与团头鲂感染嗜水气单胞菌后的免疫过程,本研究以团头鲂为对象,克隆鉴定了5个团头鲂JAK家族基因的ORF序列,并对其进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR技术对团头鲂JAK家族基因在健康成鱼组织和感染嗜水气单胞菌后免疫相关组织中的表达进行了分析;利用Western-blot技术检测MamJAK1磷酸化蛋白在团头鲂感染嗜水气单胞菌后,在脾脏和中肾中的表达变化;之后,使用LPS刺激草鱼CIK细胞后,检测IL-6R和JAK1基因的表达,以及JAK1蛋白磷酸化表达;最后,构建真核表达载体p EGFP-IL-6R转染到草鱼CIK细胞中,检测JAK1磷酸化蛋白的表达变化...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
JAK/STAT信号通路（Yanetal2018）
华中农业大学2020届硕士学位（毕业）论文20图3团头鲂JAK家族基因氨基酸序列对比Fig.3AminoacidsequencecomparisonofJAKgenefamilyinM.amblycephala相同和相似的氨基酸残基分别以灰色和浅灰色阴影显示。红色矩形标记磷酸化位点。Identicalandsimilarresiduesareshadedingrayandlightgray,respectively.Theredsquaremarksthephosphorylationsite.使用MEGA7.0对脊椎动物的JAK家族蛋白进行了系统进化分析，结果如图4所示，人、小鼠、原鸡和非洲爪蟾的JAK1、JAK3和TYK2蛋白分别聚为一支；而草鱼、斑马鱼、青鳉、鲤和半滑舌鳎等硬骨鱼的聚为一支，其中草鱼、鲤和团头鲂的最先聚在一起，在进化关系上最为接近。另外，硬骨鱼类如矛尾虎虾鱼、斑马鱼和团头鲂的JAK2b和哺乳动物的JAK2聚为一支，硬骨鱼类的JAK2a聚为另外一支，说明硬骨鱼类的JAK2b和哺乳动物的JAK2在进化关系上较为接近；其中，斑马鱼的JAK2a和JAK2b蛋白与团头鲂的在进化关系上最为接近。
团头鲂JAK家族基因的鉴定和表达分析21图4脊椎动物JAKs蛋白的系统进化分析Fig.4PhylogeneticanalysisoftheproteinsequencesofJAKsproteininvertebrates物种登录号：1.JAK1蛋白：草鱼Ctenopharyngodonidella（AMK47891.1），鲤Cyprinuscarpio（AAB38256.1），斑马鱼Daniorerio（BAH47261.1），斑点叉尾鮰Ictaluruspunctatus（XP_017335000.1），黄颡鱼Tetraodonfluviatilis（AAC00207.1），大西洋鲑Salmosalar（XP_013978894.1），青鳉Oryziaslatipe（XP_020558118.1），半滑舌鳎Cynoglossussemilaevis（XP_008331503.1），大黄鱼Larimichthyscrocea（XP_019120796.1），非洲爪蟾Xenopuslaevis（AAH77570.1），原鸡Gallusgallus（NP_990201.1），小鼠Musmusculus（P52332.1），马Equuscaballus（XP_023497716.1），人Homosapiens（P23458.2），野牦牛Bosmutus（XP_005886754.1），野猪Susscrofa（XP_020949197.1）；2.JAK2蛋白：斑马鱼DaniorerioJAK2a(AAI62596.1)，斑马鱼JAK2bDaniorerioJAK2b（ABD73285.1），青鳉NothobranchiusfurzeriJAK2a（tr|A0A1A8UC21|A0A1A8UC21），青鳉NothobranchiusfurzeriJAK2b（tr|A0A1A8ANY6|A0A1A8ANY6），矛尾复虾虎鱼AcanthogobiushastaJAK2a（tr|A0A1Z1BIC0|A0A1Z1BIC0_9GOBI），矛尾复虾虎鱼AcanthogobiushastaJAK2b（tr|A0A1Z1B8L8|A0A1Z1B8L8_9GOBI），黄颡鱼TachysurusfulvidracoJAK2a（ALJ92427.1），黄颡鱼TachysurusfulvidracoJAK2b（ALJ92428.1），
本文编号：3095357
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
JAK/STAT信号通路（Yanetal2018）
华中农业大学2020届硕士学位（毕业）论文20图3团头鲂JAK家族基因氨基酸序列对比Fig.3AminoacidsequencecomparisonofJAKgenefamilyinM.amblycephala相同和相似的氨基酸残基分别以灰色和浅灰色阴影显示。红色矩形标记磷酸化位点。Identicalandsimilarresiduesareshadedingrayandlightgray,respectively.Theredsquaremarksthephosphorylationsite.使用MEGA7.0对脊椎动物的JAK家族蛋白进行了系统进化分析，结果如图4所示，人、小鼠、原鸡和非洲爪蟾的JAK1、JAK3和TYK2蛋白分别聚为一支；而草鱼、斑马鱼、青鳉、鲤和半滑舌鳎等硬骨鱼的聚为一支，其中草鱼、鲤和团头鲂的最先聚在一起，在进化关系上最为接近。另外，硬骨鱼类如矛尾虎虾鱼、斑马鱼和团头鲂的JAK2b和哺乳动物的JAK2聚为一支，硬骨鱼类的JAK2a聚为另外一支，说明硬骨鱼类的JAK2b和哺乳动物的JAK2在进化关系上较为接近；其中，斑马鱼的JAK2a和JAK2b蛋白与团头鲂的在进化关系上最为接近。
团头鲂JAK家族基因的鉴定和表达分析21图4脊椎动物JAKs蛋白的系统进化分析Fig.4PhylogeneticanalysisoftheproteinsequencesofJAKsproteininvertebrates物种登录号：1.JAK1蛋白：草鱼Ctenopharyngodonidella（AMK47891.1），鲤Cyprinuscarpio（AAB38256.1），斑马鱼Daniorerio（BAH47261.1），斑点叉尾鮰Ictaluruspunctatus（XP_017335000.1），黄颡鱼Tetraodonfluviatilis（AAC00207.1），大西洋鲑Salmosalar（XP_013978894.1），青鳉Oryziaslatipe（XP_020558118.1），半滑舌鳎Cynoglossussemilaevis（XP_008331503.1），大黄鱼Larimichthyscrocea（XP_019120796.1），非洲爪蟾Xenopuslaevis（AAH77570.1），原鸡Gallusgallus（NP_990201.1），小鼠Musmusculus（P52332.1），马Equuscaballus（XP_023497716.1），人Homosapiens（P23458.2），野牦牛Bosmutus（XP_005886754.1），野猪Susscrofa（XP_020949197.1）；2.JAK2蛋白：斑马鱼DaniorerioJAK2a(AAI62596.1)，斑马鱼JAK2bDaniorerioJAK2b（ABD73285.1），青鳉NothobranchiusfurzeriJAK2a（tr|A0A1A8UC21|A0A1A8UC21），青鳉NothobranchiusfurzeriJAK2b（tr|A0A1A8ANY6|A0A1A8ANY6），矛尾复虾虎鱼AcanthogobiushastaJAK2a（tr|A0A1Z1BIC0|A0A1Z1BIC0_9GOBI），矛尾复虾虎鱼AcanthogobiushastaJAK2b（tr|A0A1Z1B8L8|A0A1Z1B8L8_9GOBI），黄颡鱼TachysurusfulvidracoJAK2a（ALJ92427.1），黄颡鱼TachysurusfulvidracoJAK2b（ALJ92428.1），
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