拟穴青蟹硫氧还蛋白系统及抗氧化相关基因的研究分析
发布时间：2021-03-23 08:40
拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是我国沿海最为常见的水产养殖品种，其养殖规模和产量都很大，是我国重要的三大经济蟹类之一，具有很高的经济价值、药用价值和营养价值，因而具有很高的研究价值。本文通过构建文库和RACE克隆等方法获得了拟穴青蟹硫氧还蛋白-1基因cDNA序列，并运用实时荧光定量PCR技术分析其在不同组织和副溶血弧菌感染条件下的表达情况；此外，对硫氧还蛋白还原酶在不同组织和细菌感染条件下的活性变化进行了分析；最后，运用GeXP多重基因表达技术对拟穴青蟹抗氧化系统中的部分基因进行了初步探究。主要研究结果如下：1.硫氧还蛋白（Thioredoxin, Trx）属于氧化还原蛋白家族。本文运用SMART技术获得了拟穴青蟹Trx1基因的cDNA全长，系统进化分析显示它与其他物种Trx基因具有较高的同源性，综合分析后确定命名为拟穴青蟹硫氧还蛋白-1基因（SpTrx1）。SpTrx1的cDNA全长672bp，包括318bp的开放阅读框（ORF），编码105个氨基酸，分子量约为12.05kDa，等电点约为4.85。运用荧光定量PCR（Quantitative real-time ...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 硫氧还蛋白系统的研究
1.1.1 硫氧还蛋白基因的研究
1.1.2 硫氧还蛋白还原酶的研究
1.2 抗氧化系统的研究
1.2.1 过氧化物还原酶的研究
1.2.2 过氧化氢酶的研究
1.2.3 超氧化物歧化酶的研究
1.2.4 谷胱甘肽过氧化物酶的研究
1.2.5 谷胱甘肽-S-转移酶的研究
1.3 荧光定量 PCR 技术和 GeXP 多重 PCR 技术
1.3.1 荧光定量 PCR 技术
1.3.2 GeXP 技术
1.4 本研究的目的、意义
第二章 拟穴青蟹硫氧还蛋白基因-1 cDNA 的克隆、表达分析
2.1 实验材料
2.1.1 实验材料及前期准备
2.1.2 实验仪器
2.1.3 试剂盒及购买的试剂
2.1.4 自配试剂
2.2 实验方法
2.2.1 RNA 提取
2.2.2 cDNA 第一链的合成
2.2.3 SpTrx1 cDNA 序列的获得和验证
2.2.4 引物序列
2.2.5 SpTrx1 基因表达分析
2.3 实验结果
2.3.1 总 RNA 的提取与鉴定
2.3.2 SpTrx1cDNA 序列 ORF 片段克隆及验证
2.3.3 SpTrx1 生物学分析
2.3.4 SpTrx1 基因表达分析
2.4 讨论
第三章 拟穴青蟹硫氧还蛋白还原酶活性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料及样品处理
3.1.2 实验试剂配制
3.1.3 实验方法
3.1.3.1 制作标准曲线
3.1.3.2 实验样品检测
3.2 实验结果
3.3 讨论
第四章 拟穴青蟹抗氧化系统相关基因 GeXP 多重基因表达
4.1 实验材料和方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验方法
4.1.2.1 RNA 提取
4.1.2.2 引物设计
4.1.2.3 RT-PCR 反应
4.2 实验结果
4.2.1 拟穴青蟹所选的抗氧化相关基因引物的检测
4.2.2 拟穴青蟹不同组织中所选抗氧化相关基因的表达
4.2.3 经弧菌刺激后不同时间点拟穴青蟹血细胞中所选抗氧化相关基因的表达
4.3 讨论
第五章 小结
5.1 全文小结
5.2 本文创新点
5.3 展望
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征[J]. 陈文波,邵方元,刘晓,王一飞,刘忠. 安徽农业科学. 2013(18)
[2]同时鉴别6种鸡病毒性呼吸道病GeXP检测方法的建立[J]. 罗思思,谢芝勋,谢丽基,庞耀珊,范晴,邓显文,刘加波,谢志勤. 病毒学报. 2013(03)
[3]青蟹免疫相关基因的研究进展[J]. 张丹,房娅博,蒋科技,张凤英,孙曼曼,乔振国,马凌波. 渔业信息与战略. 2012(03)
[4]飞蝗谷胱甘肽S-转移酶基因克隆、序列分析及表达特征[J]. 张学尧,王建新,郭艳琼,张建珍,马恩波. 昆虫学报. 2012(05)
[5]硫氧还蛋白2的研究进展[J]. 潘晓青,魏瑾. 医学综述. 2012(05)
[6]牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶基因的生物信息学分析[J]. 王宇,黄江,戴佳琳,廖兴江. 贵阳医学院学报. 2012(01)
[7]癫痫大鼠海马硫氧还蛋白还原酶活性及cleaved caspase-3表达检测[J]. 魏学文,张晓伟. 检验医学与临床. 2011(22)
[8]谷胱甘肽转移酶的研究进展[J]. 蔡群芳,邬强. 海南医学院学报. 2011(12)
[9]条斑紫菜谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆与表达分析[J]. 周向红,易乐飞,李信书,王萍,阎斌伦. 水产学报. 2011(09)
[10]COX基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达[J]. 韩勇军,吴新荣. 广东药学院学报. 2010(06)
博士论文
[1]松江鲈（Trachidermus fasciatus）抗氧化相关基因的克隆、表达与功能分析[D]. 刘莹莹.山东大学 2012
[2]中国明对虾丝氨酸蛋白酶、活性氧的产生与消除及其半胱氨酸蛋白酶研究[D]. 任乾.山东大学 2010
[3]中华绒螯蟹表达序列标签（EST）分析及免疫相关基因的克隆、表达模式研究[D]. 赵大显.华东师范大学 2009
[4]栉孔扇贝抗氧化酶基因的克隆与表达分析[D]. 倪多娇.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2007
本文编号：3095511
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 硫氧还蛋白系统的研究
1.1.1 硫氧还蛋白基因的研究
1.1.2 硫氧还蛋白还原酶的研究
1.2 抗氧化系统的研究
1.2.1 过氧化物还原酶的研究
1.2.2 过氧化氢酶的研究
1.2.3 超氧化物歧化酶的研究
1.2.4 谷胱甘肽过氧化物酶的研究
1.2.5 谷胱甘肽-S-转移酶的研究
1.3 荧光定量 PCR 技术和 GeXP 多重 PCR 技术
1.3.1 荧光定量 PCR 技术
1.3.2 GeXP 技术
1.4 本研究的目的、意义
第二章 拟穴青蟹硫氧还蛋白基因-1 cDNA 的克隆、表达分析
2.1 实验材料
2.1.1 实验材料及前期准备
2.1.2 实验仪器
2.1.3 试剂盒及购买的试剂
2.1.4 自配试剂
2.2 实验方法
2.2.1 RNA 提取
2.2.2 cDNA 第一链的合成
2.2.3 SpTrx1 cDNA 序列的获得和验证
2.2.4 引物序列
2.2.5 SpTrx1 基因表达分析
2.3 实验结果
2.3.1 总 RNA 的提取与鉴定
2.3.2 SpTrx1cDNA 序列 ORF 片段克隆及验证
2.3.3 SpTrx1 生物学分析
2.3.4 SpTrx1 基因表达分析
2.4 讨论
第三章 拟穴青蟹硫氧还蛋白还原酶活性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料及样品处理
3.1.2 实验试剂配制
3.1.3 实验方法
3.1.3.1 制作标准曲线
3.1.3.2 实验样品检测
3.2 实验结果
3.3 讨论
第四章 拟穴青蟹抗氧化系统相关基因 GeXP 多重基因表达
4.1 实验材料和方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验方法
4.1.2.1 RNA 提取
4.1.2.2 引物设计
4.1.2.3 RT-PCR 反应
4.2 实验结果
4.2.1 拟穴青蟹所选的抗氧化相关基因引物的检测
4.2.2 拟穴青蟹不同组织中所选抗氧化相关基因的表达
4.2.3 经弧菌刺激后不同时间点拟穴青蟹血细胞中所选抗氧化相关基因的表达
4.3 讨论
第五章 小结
5.1 全文小结
5.2 本文创新点
5.3 展望
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征[J]. 陈文波,邵方元,刘晓,王一飞,刘忠. 安徽农业科学. 2013(18)
[2]同时鉴别6种鸡病毒性呼吸道病GeXP检测方法的建立[J]. 罗思思,谢芝勋,谢丽基,庞耀珊,范晴,邓显文,刘加波,谢志勤. 病毒学报. 2013(03)
[3]青蟹免疫相关基因的研究进展[J]. 张丹,房娅博,蒋科技,张凤英,孙曼曼,乔振国,马凌波. 渔业信息与战略. 2012(03)
[4]飞蝗谷胱甘肽S-转移酶基因克隆、序列分析及表达特征[J]. 张学尧,王建新,郭艳琼,张建珍,马恩波. 昆虫学报. 2012(05)
[5]硫氧还蛋白2的研究进展[J]. 潘晓青,魏瑾. 医学综述. 2012(05)
[6]牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶基因的生物信息学分析[J]. 王宇,黄江,戴佳琳,廖兴江. 贵阳医学院学报. 2012(01)
[7]癫痫大鼠海马硫氧还蛋白还原酶活性及cleaved caspase-3表达检测[J]. 魏学文,张晓伟. 检验医学与临床. 2011(22)
[8]谷胱甘肽转移酶的研究进展[J]. 蔡群芳,邬强. 海南医学院学报. 2011(12)
[9]条斑紫菜谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆与表达分析[J]. 周向红,易乐飞,李信书,王萍,阎斌伦. 水产学报. 2011(09)
[10]COX基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达[J]. 韩勇军,吴新荣. 广东药学院学报. 2010(06)
博士论文
[1]松江鲈（Trachidermus fasciatus）抗氧化相关基因的克隆、表达与功能分析[D]. 刘莹莹.山东大学 2012
[2]中国明对虾丝氨酸蛋白酶、活性氧的产生与消除及其半胱氨酸蛋白酶研究[D]. 任乾.山东大学 2010
[3]中华绒螯蟹表达序列标签（EST）分析及免疫相关基因的克隆、表达模式研究[D]. 赵大显.华东师范大学 2009
[4]栉孔扇贝抗氧化酶基因的克隆与表达分析[D]. 倪多娇.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2007
本文编号：3095511
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