团头鲂血红素加氧酶（HO）2重复基因低氧应答分析及PB-Tgf2复合转座元件的插入诱变研究

发布时间：2021-04-02 04:27

　　团头鲂（Megalobrama amblycephala）,鲤科,是我国重要的淡水养殖经济鱼类,具有养殖成本低、成活率高、生长快等优点,上海海洋大学也培育出了“浦江1号”团头鲂,具有明显的生长优势;但团头鲂与鲤鱼、鲫鱼等鱼类相比,表现为极不耐低氧,在实际大规模养殖中,容易由于缺氧而引起死亡,给团头鲂养殖带来极大危害。因此,探索团头鲂低氧调控机制、发掘主效基因的功能对团头鲂遗传育种基础研究及耐低氧品种的选育都具有重要的实际应用意义。血红素加氧酶（Heme oxygenase,HO）是血红素分解代谢过程中的限速酶,主要功能是分解血红素产生一氧化碳（CO）,亚铁和胆绿素,随后胆绿素被还原为胆红素。本研究采用cDNA末端快速扩增（RACE）的方法成功克隆出了团头鲂HO-2a和HO-2b基因,并对团头鲂不同发育时期的胚胎和成鱼的多个组织进行表达分析,同时对不同时期的胚胎及成鱼进行低氧处理。序列分析表明,团头鲂HO-2a和HO-2b基因cDNA序列全长分别为1380 bp和1390 bp,分别编码305个氨基酸（aa）和317 aa;团头鲂HO-2a和-2b基因具有相对较低,67%的相似度,两者在... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
第一章 团头鲂血红素加氧酶（HO）2 重复基因低氧应答分析
    1.1 材料、仪器和试剂
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 主要仪器
        1.1.3 主要试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 RNA提取
        1.2.2 团头鲂重复基因HO-2 全长cDNA的克隆
        1.2.3 团头鲂qRT -PCR组织和胚胎表达
        1.2.4 整胚原位杂交（WISH）
        1.2.5 急性缺氧实验
        1.2.6 序列分析与系统进化树的构建
    1.3 结果
        1.3.1 团头鲂HO-2a和HO-2b全长cDNA序列的克隆
        1.3.2 团头鲂HO-2a和HO-2b基因氨基酸序列同源性及分子进化分析
        1.3.3 团头鲂HO-2a和HO-2b表达模式分析
        1.3.4 整胚原位杂交（WISH）
        1.3.5 急性缺氧处理对团头鲂HO-2a和HO-2b mRNA表达的影响
    1.4 讨论
第二章 PB-Tgf2复合转座元件在团头鲂基因组中的插入诱变研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要化学和生物试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 引物设计
        2.2.2 转座酶mRNA制备
        2.2.3 显微注射和子代培育
        2.2.4 团头鲂基因组中的阳性率检测
    2.3 实验结果
        2.3.1 本实验室已构建的供体质粒pPBs-Tgf2-RPrmP-eGFP和转基因辅助质粒pCS2-PBTP的结构
    2.4 讨论
结论与展望
参考文献
附录：英文缩略语表
在校发表论文情况
致谢



本文编号：3114584