大黄鱼CD3的分子特征及CD3ε多克隆抗体的制备
发布时间：2021-04-07 15:14
脊椎动物的适应性免疫应答主要由B淋巴细胞和T淋巴细胞介导。T细胞通过释放细胞毒性因子直接杀死被感染细胞或异常细胞,或通过分泌各种细胞因子协同其他免疫细胞执行其功能。硬骨鱼是最早具有适应性免疫系统的脊椎动物,尽管对于哺乳动物T细胞信号转导机制的研究取得了显著进展,但对于硬骨鱼T细胞的活化过程仍有待研究。CD3分子在T细胞激活和T细胞信号转导中发挥重要作用,本文对大黄鱼CD3分子的研究结果将为研究硬骨鱼T细胞的活化奠定基础。本论文从大黄鱼中克隆得到了CD3γ/δA、CD3γ/δB、CD3ε和CD3ζ的开放阅读框（Open reading frame,ORF）序列,它们的ORF分别长522、573、555和456 bp,分别编码一个含173、190、184和151个氨基酸残基的多肽。LcCD3γ/δA、LcCD3γ/δB和LcCD3ε的胞外段均含有2个保守的半胱氨酸和一个CXXCXE结构域;胞质区含有一个可以传递信号的ITAM（immunoreceptor tyrosine-based activation motif）基序;LcCD3ε跨膜区含有一个保守的天冬氨酸,而LcCD3γ/δA和L...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大黄鱼CD3基因PCR产物琼脂糖凝胶电泳图
结果26（aa20-115），一个跨膜区（aa116-137）和一个较为保守的胞内段（aa138-190）（图2-2C），预测其成熟蛋白分子量约18.9kDa；LcCD3ζORF包含456个核苷酸，编码一个含151个氨基酸的蛋白质，含有一个信号肽（aa1-22），一个胞外段（aa23-30），一个跨膜区（aa31-50）以及一个胞内段（aa51-151）（图2-2D），预测其成熟蛋白分子量约14.8kDa。LcCD3γ/δA、LcCD3γ/δB和LcCD3ε的胞外段分别含有两个保守的半胱氨酸和一个CXXCXE结构域，其胞内段各含有一个能够传递信号的免疫酪氨酸活化基序（immunoreceptortyrosine-basedactivationmotif，ITAM）(YXXL/I-X6-8-YXXL/I）。LcCD3ε的跨膜区含有一个保守的带电氨基酸天冬氨酸，而LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB的跨膜区各含有一个天冬酰胺。LcCD3ζ的胞外段较短，只含有8个氨基酸，而其胞内区含有3个ITAM基序。图2-2LcCD3ORF核苷酸序列及氨基酸序列分析Fig.2-2analysisofLcCD3ORFcDNAandconcludedaminoacidsequence（A）LcCD3ε核苷酸序列及氨基酸序列分析；（B）LcCD3γ/δA核苷酸序列及氨基酸序列分析；（C）LcCD3γ/δB核苷酸序列及氨基酸序列分析；（D）LcCD3ζ核苷酸序列及氨基酸序列分析。保守的半胱氨酸用红色字体标出，CXXCXE结构域用黑色矩形标出，ITAM结构域用红色直线标出，预测的N-糖基化位点用黑色直线标出。*代表终止密码子。(A)AnalysisofLcCD3εcDNAandconcludedaminoacidsequence.(B)AnalysisofLcCD3γ/δAcDNAandconcludedaminoacidsequence.(C)AnalysisofLcCD3γ/δBcDNAandconcludedaminoacidsequence.(D)AnalysisofLcCD3ζcDNAandconcludedaminoacidsequence.Theconservedcysteineswereinred.TheCXXCXEmotifwasshownwithinblackrectangle.The
大黄鱼CD3的分子特征及CD3ε多克隆抗体的制备27ITAMmotifwasshownwithinredrectangle.ThepotentialN-glycosylationsitewasshowninsingleunderscore.*representstheterminationcodon.3.1.3大黄鱼CD3共线性分析根据大黄鱼基因组的测序结果分析，LcCD3ε、LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB串联相继分布在7号染色体上（图2-3A），LcCD3ζ单独位于19号染色体上（图2-3B）。LcCD3ε与MPZL2相邻，LcCD3ζ靠近CREG1。图2-3不同物种来源CD3的线性分析Fig.2-3GenomicrelatioshipsofCD3genesamongvertebrates（A）CD3ε、CD3γ、CD3δ（γ/δ）；（B）CD3ζ。图中箭头代表转录方向，线段长度和基因长度无关。图中基因相对位置从NCBI上检索得到，所用基因组版本为H.sapiens（GRCh38.p13）,G.gallus（AADN00000000.5），X.tropicalis（AAMC00000000.3），S.salar（BT060238.1），P.olivaceus（AB054068.1），L.crocea（JRPU00000000.2）。Chr：染色体，Sc:scaffold。(A)CD3ε、CD3γ、CD3δ(γ/δ).(B)CD3ζ.Arrowsindicatedthetranscriptionaldirection.Thecomparisonisschematicanddoesnotreflectvirtualgenedistances.GenerelativelocationswereobtainedfromGenBankandversionsusedinthisanalysiswereH.sapiens(GRCh38.p13),G.gallus(AADN00000000.5),X.tropicalis(AAMC00000000.3),S.salar(BT060238.1),P.olivaceus(AB054068.1),L.crocea(JRPU00000000.2).Chr:chromosome,Sc:scaffold.3.1.4大黄鱼CD3同源比对和系统进化分析通过T-CoffeeServer在线程序将大黄鱼CD3ε、CD3γ/δA、CD3γ/δB和CD3ζ
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄鱼EBI3基因的克隆与表达分析[J]. 霍洁颖,刘小玲,林蠡,陈新华. 应用海洋学学报. 2017(03)
[2]CD8:Adhesion Molecule,Co-Receptor and Immuno-Modulator[J]. David K Cole,George F Gao. Cellular & Molecular Immunology. 2004(02)
[3]CTL细胞毒作用机制的研究进展[J]. 宋建勋. 国外医学(免疫学分册). 1997(04)
博士论文
[1]鲆鲽鱼IgM+B细胞内吞作用及其调控机制研究[D]. 李逸群.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2018
本文编号：3123727
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大黄鱼CD3基因PCR产物琼脂糖凝胶电泳图
结果26（aa20-115），一个跨膜区（aa116-137）和一个较为保守的胞内段（aa138-190）（图2-2C），预测其成熟蛋白分子量约18.9kDa；LcCD3ζORF包含456个核苷酸，编码一个含151个氨基酸的蛋白质，含有一个信号肽（aa1-22），一个胞外段（aa23-30），一个跨膜区（aa31-50）以及一个胞内段（aa51-151）（图2-2D），预测其成熟蛋白分子量约14.8kDa。LcCD3γ/δA、LcCD3γ/δB和LcCD3ε的胞外段分别含有两个保守的半胱氨酸和一个CXXCXE结构域，其胞内段各含有一个能够传递信号的免疫酪氨酸活化基序（immunoreceptortyrosine-basedactivationmotif，ITAM）(YXXL/I-X6-8-YXXL/I）。LcCD3ε的跨膜区含有一个保守的带电氨基酸天冬氨酸，而LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB的跨膜区各含有一个天冬酰胺。LcCD3ζ的胞外段较短，只含有8个氨基酸，而其胞内区含有3个ITAM基序。图2-2LcCD3ORF核苷酸序列及氨基酸序列分析Fig.2-2analysisofLcCD3ORFcDNAandconcludedaminoacidsequence（A）LcCD3ε核苷酸序列及氨基酸序列分析；（B）LcCD3γ/δA核苷酸序列及氨基酸序列分析；（C）LcCD3γ/δB核苷酸序列及氨基酸序列分析；（D）LcCD3ζ核苷酸序列及氨基酸序列分析。保守的半胱氨酸用红色字体标出，CXXCXE结构域用黑色矩形标出，ITAM结构域用红色直线标出，预测的N-糖基化位点用黑色直线标出。*代表终止密码子。(A)AnalysisofLcCD3εcDNAandconcludedaminoacidsequence.(B)AnalysisofLcCD3γ/δAcDNAandconcludedaminoacidsequence.(C)AnalysisofLcCD3γ/δBcDNAandconcludedaminoacidsequence.(D)AnalysisofLcCD3ζcDNAandconcludedaminoacidsequence.Theconservedcysteineswereinred.TheCXXCXEmotifwasshownwithinblackrectangle.The
大黄鱼CD3的分子特征及CD3ε多克隆抗体的制备27ITAMmotifwasshownwithinredrectangle.ThepotentialN-glycosylationsitewasshowninsingleunderscore.*representstheterminationcodon.3.1.3大黄鱼CD3共线性分析根据大黄鱼基因组的测序结果分析，LcCD3ε、LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB串联相继分布在7号染色体上（图2-3A），LcCD3ζ单独位于19号染色体上（图2-3B）。LcCD3ε与MPZL2相邻，LcCD3ζ靠近CREG1。图2-3不同物种来源CD3的线性分析Fig.2-3GenomicrelatioshipsofCD3genesamongvertebrates（A）CD3ε、CD3γ、CD3δ（γ/δ）；（B）CD3ζ。图中箭头代表转录方向，线段长度和基因长度无关。图中基因相对位置从NCBI上检索得到，所用基因组版本为H.sapiens（GRCh38.p13）,G.gallus（AADN00000000.5），X.tropicalis（AAMC00000000.3），S.salar（BT060238.1），P.olivaceus（AB054068.1），L.crocea（JRPU00000000.2）。Chr：染色体，Sc:scaffold。(A)CD3ε、CD3γ、CD3δ(γ/δ).(B)CD3ζ.Arrowsindicatedthetranscriptionaldirection.Thecomparisonisschematicanddoesnotreflectvirtualgenedistances.GenerelativelocationswereobtainedfromGenBankandversionsusedinthisanalysiswereH.sapiens(GRCh38.p13),G.gallus(AADN00000000.5),X.tropicalis(AAMC00000000.3),S.salar(BT060238.1),P.olivaceus(AB054068.1),L.crocea(JRPU00000000.2).Chr:chromosome,Sc:scaffold.3.1.4大黄鱼CD3同源比对和系统进化分析通过T-CoffeeServer在线程序将大黄鱼CD3ε、CD3γ/δA、CD3γ/δB和CD3ζ
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄鱼EBI3基因的克隆与表达分析[J]. 霍洁颖,刘小玲,林蠡,陈新华. 应用海洋学学报. 2017(03)
[2]CD8:Adhesion Molecule,Co-Receptor and Immuno-Modulator[J]. David K Cole,George F Gao. Cellular & Molecular Immunology. 2004(02)
[3]CTL细胞毒作用机制的研究进展[J]. 宋建勋. 国外医学(免疫学分册). 1997(04)
博士论文
[1]鲆鲽鱼IgM+B细胞内吞作用及其调控机制研究[D]. 李逸群.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2018
本文编号：3123727
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