斑马鱼甘露糖受体的分子克隆和功能研究
发布时间：2021-04-08 10:53
甘露糖受体（mannose receptor,MR）是一种模式识别受体（pattern-recognition receptors,PRRs）,在病原微生物引起的机体免疫应答中至关重要。关于哺乳动物和鸟类的甘露糖受体研究很多,但是鱼类甘露糖受体的研究甚少。本论文分离并鉴定了温和气单胞菌是斑马鱼的致病菌,在此基础上,研究了斑马鱼甘露糖受体和温和气单胞菌感染的关系,主要结果如下:1.克隆得到了斑马鱼的甘露糖受体基因全长,命名为zfMR,基因的cDNA全长为6248 bp,其中5’UTR为119 bp,3’UTR为1842 bp,ORF为4287 bp,编码1428 aa。预测的氨基酸序列表明,zfMR包含一个富含半胱氨酸区域,一个Ⅱ型纤连蛋白区域,八个串联的C型凝集素样区域,一个跨膜结构域和一个胞质尾区。构建的进化树表明,斑马鱼zfMR与草鱼和团头鲂的MR聚为一支组成硬骨鱼类分支。2.甘露糖受体的mRNA在健康斑马鱼的肝脏、脾脏、肾脏、肠道、鳃、脑、心脏、肌肉和皮肤中均有表达,并且在肾脏中的的表达水平最高。3.温和气单胞菌感染斑马鱼后,用qRT-PCR方法检测到其免疫相关组织（肝脏、脾脏、...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviation）
1 前言
1.1 课题的由来与意义
1.2 国内外甘露糖受体的研究概况
1.2.1 甘露糖受体的结构
1.2.2 甘露糖受体的功能
1.2.4 甘露糖受体与疾病的关系
1.2.5 调控甘露糖受体表达的因素
1.2.6 本研究的目的和意义
2 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 病原
2.2 主要仪器及厂家
2.3 主要试剂
2.4 主要溶液配制
2.4.1 常用培养基
2.4.2 感受态相关试剂配制
2.4.3 琼脂糖电泳相关溶液配制
2.5 实验方法
2.5.1 病原菌的分离与纯化
2.5.2 菌种的保藏
2.5.3 纯化菌株的人工感染实验
2.5.4 菌株的鉴定
2.5.5 总RNA的提取
2.5.6 cDNA第一链的合成
2.5.7 zfMR基因cDNA片段的克隆
2.5.8 zfMR基因cDNA 3’末端扩增
2.5.9 zfMR基因cDNA 5’末端扩增
2.5.10 生物信息学分析
2.5.11 zfMR基因表达的定量分析
2.5.12 Western blotting检测zf MR蛋白水平的变化
2.5.13 免疫组化检测zf MR蛋白水平的变化
3 结果和分析
3.1 病原菌的分离纯化和人工感染结果
3.2 ZA菌株 16SrDNA的PCR结果
3.3 ZA菌株的生理生化鉴定结果
3.4 RNA样品的制备与鉴定
3.5 zfMR基因的生物信息学分析
3.5.1 zfMR基因cDNA全长及序列特征
3.5.2 zfMR的系统进化树分析
3.6 zfMR基因的表达分析
3.6.1 健康鱼不同组织内zfMR基因的表达
3.6.2 A. sobria刺激后免疫相关组织zfMR、IL-1β 和TNF-α 基因的表达
3.6.3 Western blot检测zf MR蛋白水平的变化
3.6.4 免疫组化法检测zf MR蛋白水平的变化
4 讨论
5 结论
参考文献
硕士期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘露糖受体在肝细胞癌中的表达及意义[J]. 郭林娜,高恒宇,何苗,刘丹. 世界华人消化杂志. 2016(01)
[2]甘露糖受体结构、功能、表达和应用研究的新进展[J]. 刘小玲,曾令兵. 水产学杂志. 2013(01)
[3]中国斑马鱼研究发展历程及现状[J]. 贾顺姬,孟安明. 遗传. 2012(09)
[4]甘露糖受体在宿主免疫应答中的作用[J]. 张典,梅其炳. 细胞与分子免疫学杂志. 2011(02)
[5]鱼类髓样分化因子88（MyD88）的研究进展[J]. 郑琳琳,张圣强,安利国. 科技信息. 2009(34)
[6]天然免疫识别机制及天然免疫受体的相互调节[J]. 张彩,田志刚. 生物化学与生物物理进展. 2008(02)
[7]由不同接头分子介导的Toll样受体信号通路[J]. 张炜,袁金铎,安利国. 细胞与分子免疫学杂志. 2006(04)
硕士论文
[1]团头鲂甘露糖受体CTLD4-8结构域抗体制备及功能分析[D]. 赵晓恒.华中农业大学 2015
[2]草鱼甘露糖受体基因的克隆与表达分析[D]. 王莉.华中农业大学 2014
[3]实验用斑马鱼常见病菌的分离检测及其致病性研究[D]. 杨迟.东华大学 2014
[4]团头鲂甘露糖受体基因的克隆与表达研究[D]. 汤孝成.华中农业大学 2013
[5]甘露糖受体在脂多糖诱导的急性肺损伤中的表达[D]. 林志辉.浙江大学 2009
本文编号：3125414
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviation）
1 前言
1.1 课题的由来与意义
1.2 国内外甘露糖受体的研究概况
1.2.1 甘露糖受体的结构
1.2.2 甘露糖受体的功能
1.2.4 甘露糖受体与疾病的关系
1.2.5 调控甘露糖受体表达的因素
1.2.6 本研究的目的和意义
2 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 病原
2.2 主要仪器及厂家
2.3 主要试剂
2.4 主要溶液配制
2.4.1 常用培养基
2.4.2 感受态相关试剂配制
2.4.3 琼脂糖电泳相关溶液配制
2.5 实验方法
2.5.1 病原菌的分离与纯化
2.5.2 菌种的保藏
2.5.3 纯化菌株的人工感染实验
2.5.4 菌株的鉴定
2.5.5 总RNA的提取
2.5.6 cDNA第一链的合成
2.5.7 zfMR基因cDNA片段的克隆
2.5.8 zfMR基因cDNA 3’末端扩增
2.5.9 zfMR基因cDNA 5’末端扩增
2.5.10 生物信息学分析
2.5.11 zfMR基因表达的定量分析
2.5.12 Western blotting检测zf MR蛋白水平的变化
2.5.13 免疫组化检测zf MR蛋白水平的变化
3 结果和分析
3.1 病原菌的分离纯化和人工感染结果
3.2 ZA菌株 16SrDNA的PCR结果
3.3 ZA菌株的生理生化鉴定结果
3.4 RNA样品的制备与鉴定
3.5 zfMR基因的生物信息学分析
3.5.1 zfMR基因cDNA全长及序列特征
3.5.2 zfMR的系统进化树分析
3.6 zfMR基因的表达分析
3.6.1 健康鱼不同组织内zfMR基因的表达
3.6.2 A. sobria刺激后免疫相关组织zfMR、IL-1β 和TNF-α 基因的表达
3.6.3 Western blot检测zf MR蛋白水平的变化
3.6.4 免疫组化法检测zf MR蛋白水平的变化
4 讨论
5 结论
参考文献
硕士期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘露糖受体在肝细胞癌中的表达及意义[J]. 郭林娜,高恒宇,何苗,刘丹. 世界华人消化杂志. 2016(01)
[2]甘露糖受体结构、功能、表达和应用研究的新进展[J]. 刘小玲,曾令兵. 水产学杂志. 2013(01)
[3]中国斑马鱼研究发展历程及现状[J]. 贾顺姬,孟安明. 遗传. 2012(09)
[4]甘露糖受体在宿主免疫应答中的作用[J]. 张典,梅其炳. 细胞与分子免疫学杂志. 2011(02)
[5]鱼类髓样分化因子88（MyD88）的研究进展[J]. 郑琳琳,张圣强,安利国. 科技信息. 2009(34)
[6]天然免疫识别机制及天然免疫受体的相互调节[J]. 张彩,田志刚. 生物化学与生物物理进展. 2008(02)
[7]由不同接头分子介导的Toll样受体信号通路[J]. 张炜,袁金铎,安利国. 细胞与分子免疫学杂志. 2006(04)
硕士论文
[1]团头鲂甘露糖受体CTLD4-8结构域抗体制备及功能分析[D]. 赵晓恒.华中农业大学 2015
[2]草鱼甘露糖受体基因的克隆与表达分析[D]. 王莉.华中农业大学 2014
[3]实验用斑马鱼常见病菌的分离检测及其致病性研究[D]. 杨迟.东华大学 2014
[4]团头鲂甘露糖受体基因的克隆与表达研究[D]. 汤孝成.华中农业大学 2013
[5]甘露糖受体在脂多糖诱导的急性肺损伤中的表达[D]. 林志辉.浙江大学 2009
本文编号：3125414
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