凡纳滨对虾CHC、RAS、Profilin蛋白与WSSV作用及wsv112作用宿主分子筛选
发布时间：2021-04-17 16:47
本文以凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的网格重链蛋白（CHC）、RAS和Profilin蛋白为研究对象,分析它们与WSSV的作用;以WSSV的两个开放阅读框（ORF）wsv079和wsv112为研究对象,筛选与之互作的候选宿主蛋白,为进一步揭示WSSV侵染途径奠定了理论基础。主要包括以下4个内容:第一章:根据凡纳滨对虾网格重链蛋白的两个功能结构域:Clathtin Propel Repeat（CHC1）和Clathrin Heavy Chain Repeat Homology（CHC2）,分别设计两对特异性引物,扩增目的片段,并克隆至pBAD/gIIIA载体上,以E.coli Top10为宿主菌,在L-阿拉伯糖（L-Arab）的诱导下获得CHC1和CHC2重组蛋白。质谱分析显示,纯化的重组蛋白为CHC1和CHC2。利用Co2+亲和层析方法得到纯度很高的CHC1和CHC2蛋白。采用Far-western和酶联免疫吸附（ELISA）方法分析CHC1和CHC2蛋白与VP26、VP28N和VP37的作用,结果表明CHC1蛋白和CHC2蛋白与VP28N...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
chc1和chc2基因的克隆M:DNA标准品DL2000；1-2:chc1基因;3:阴性对照;4-5:chc2基因
图 1-2 chc1 和 chc2 基因的克隆M: DNA 标准品 DL2000；1-2: chc1 基因; 3: 阴性对照; 4-5: chc2 基因Fig.1-2 Cloning of chc1 and chc2M: DNA Marker DL2000; 1-2: chc1 gene; 3: negative control; 4-5: chc2 gene1.1.3.2 pBAD/gⅢA-chc1 和 pBAD/gⅢA-chc2 重组质粒的鉴定用 T4 DNALigase 将双酶切后的片段与具有相同粘性末端的 pBAD/gⅢA 表达载体连接，经细胞转化和 Amp+筛选后，挑取单克隆，37 ℃培养 4 h 后，菌液 PCR产物电泳鉴定结果见图 1-3 和图 1-4，条带在 1000 bp 左右，初步断定连接成功。取部分连接成功的菌液测序，测序结果经过 DNAMAN 软件与标准序列对比分析，结果证明重组表达载体序列完全正确，无移码错配现象，可继续实验。
图 1-2 chc1 和 chc2 基因的克隆M: DNA 标准品 DL2000；1-2: chc1 基因; 3: 阴性对照; 4-5: chc2 基因Fig.1-2 Cloning of chc1 and chc2M: DNA Marker DL2000; 1-2: chc1 gene; 3: negative control; 4-5: chc2 gene1.1.3.2 pBAD/gⅢA-chc1 和 pBAD/gⅢA-chc2 重组质粒的鉴定用 T4 DNALigase 将双酶切后的片段与具有相同粘性末端的 pBAD/gⅢA 表达载体连接，经细胞转化和 Amp+筛选后，挑取单克隆，37 ℃培养 4 h 后，菌液 PCR产物电泳鉴定结果见图 1-3 和图 1-4，条带在 1000 bp 左右，初步断定连接成功。取部分连接成功的菌液测序，测序结果经过 DNAMAN 软件与标准序列对比分析，结果证明重组表达载体序列完全正确，无移码错配现象，可继续实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国对虾蛋白磷酸酶1催化亚基β基因的克隆表达及特性分析[J]. 何亮银,李微,唐小千,邢婧,绳秀珍,战文斌. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2016(11)
[2]G蛋白偶联受体脱敏內吞和复敏调控机制进展[J]. 李胜,白波,陈京. 济宁医学院学报. 2016(02)
[3]甲型流感H1N1（2009）流感病毒M2e单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 孙新城,王云龙,李玉林,景建洲,董彩文. 中国病原生物学杂志. 2015(06)
[4]酵母双杂交系统及其应用研究进展[J]. 崔红军,魏玉清. 安徽农业科学. 2015(13)
[5]对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP110在中国明对虾鳃细胞中结合蛋白的鉴定与特性[J]. 赵建梅,唐小千,战文斌. 中国水产科学. 2014(01)
[6]酵母双杂交技术及应用的研究进展[J]. 郑立双,李向楠,孙城涛,刘红羽,刘勋,贺明,吕文发. 中国畜牧兽医. 2013(09)
[7]对虾白斑综合症病毒的概述[J]. 马晓燕,李鹏,严洁,周开亚. 南京师大学报(自然科学版). 2012(04)
[8]ELISA方法在基础医学研究中的应用及注意事项[J]. 徐瑞霞,时那,宋莉,张燕婉,叶珏,孟宪敏. 标记免疫分析与临床. 2011(06)
[9]葫芦种子传黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测[J]. 秦碧霞,蔡健和,陆秀红,林林,廖富荣,刘志明. 植物保护. 2011(03)
[10]三疣梭子蟹Profilin基因全长cDNA的克隆与表达分析[J]. 申望,叶茂,石戈,王日昕. 动物学研究. 2010(03)
博士论文
[1]网格重链蛋白CHC2在百脉根结瘤信号途径中功能及作用机制的研究[D]. 祝茂生.华中农业大学 2015
[2]十足目甲壳动物C型凝集素功能研究[D]. 王显伟.山东大学 2012
硕士论文
[1]对虾Coat-ε、CCAP17和CHC的克隆、表达及其在WSSV感染中的作用[D]. 王修芳.大连海洋大学 2016
[2]三个Tetraspanin蛋白的表达及其在WSSV感染中的作用分析[D]. 关广阔.上海海洋大学 2015
[3]柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建及EtAMA1相互作用蛋白的初步筛选[D]. 薛璞.上海师范大学 2013
[4]应用酵母双杂交系统筛选与CITED1相互作用蛋白[D]. 林振.南方医科大学 2013
[5]WSSV-VP90、VP39与WSSV及宿主蛋白的作用[D]. 李倩.上海海洋大学 2012
[6]表面等离子体共振技术对溶菌酶（lysozyme）生物吸附的应用研究[D]. 胡瑞.华东师范大学 2012
本文编号：3143795
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
chc1和chc2基因的克隆M:DNA标准品DL2000；1-2:chc1基因;3:阴性对照;4-5:chc2基因
图 1-2 chc1 和 chc2 基因的克隆M: DNA 标准品 DL2000；1-2: chc1 基因; 3: 阴性对照; 4-5: chc2 基因Fig.1-2 Cloning of chc1 and chc2M: DNA Marker DL2000; 1-2: chc1 gene; 3: negative control; 4-5: chc2 gene1.1.3.2 pBAD/gⅢA-chc1 和 pBAD/gⅢA-chc2 重组质粒的鉴定用 T4 DNALigase 将双酶切后的片段与具有相同粘性末端的 pBAD/gⅢA 表达载体连接，经细胞转化和 Amp+筛选后，挑取单克隆，37 ℃培养 4 h 后，菌液 PCR产物电泳鉴定结果见图 1-3 和图 1-4，条带在 1000 bp 左右，初步断定连接成功。取部分连接成功的菌液测序，测序结果经过 DNAMAN 软件与标准序列对比分析，结果证明重组表达载体序列完全正确，无移码错配现象，可继续实验。
图 1-2 chc1 和 chc2 基因的克隆M: DNA 标准品 DL2000；1-2: chc1 基因; 3: 阴性对照; 4-5: chc2 基因Fig.1-2 Cloning of chc1 and chc2M: DNA Marker DL2000; 1-2: chc1 gene; 3: negative control; 4-5: chc2 gene1.1.3.2 pBAD/gⅢA-chc1 和 pBAD/gⅢA-chc2 重组质粒的鉴定用 T4 DNALigase 将双酶切后的片段与具有相同粘性末端的 pBAD/gⅢA 表达载体连接，经细胞转化和 Amp+筛选后，挑取单克隆，37 ℃培养 4 h 后，菌液 PCR产物电泳鉴定结果见图 1-3 和图 1-4，条带在 1000 bp 左右，初步断定连接成功。取部分连接成功的菌液测序，测序结果经过 DNAMAN 软件与标准序列对比分析，结果证明重组表达载体序列完全正确，无移码错配现象，可继续实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国对虾蛋白磷酸酶1催化亚基β基因的克隆表达及特性分析[J]. 何亮银,李微,唐小千,邢婧,绳秀珍,战文斌. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2016(11)
[2]G蛋白偶联受体脱敏內吞和复敏调控机制进展[J]. 李胜,白波,陈京. 济宁医学院学报. 2016(02)
[3]甲型流感H1N1（2009）流感病毒M2e单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 孙新城,王云龙,李玉林,景建洲,董彩文. 中国病原生物学杂志. 2015(06)
[4]酵母双杂交系统及其应用研究进展[J]. 崔红军,魏玉清. 安徽农业科学. 2015(13)
[5]对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP110在中国明对虾鳃细胞中结合蛋白的鉴定与特性[J]. 赵建梅,唐小千,战文斌. 中国水产科学. 2014(01)
[6]酵母双杂交技术及应用的研究进展[J]. 郑立双,李向楠,孙城涛,刘红羽,刘勋,贺明,吕文发. 中国畜牧兽医. 2013(09)
[7]对虾白斑综合症病毒的概述[J]. 马晓燕,李鹏,严洁,周开亚. 南京师大学报(自然科学版). 2012(04)
[8]ELISA方法在基础医学研究中的应用及注意事项[J]. 徐瑞霞,时那,宋莉,张燕婉,叶珏,孟宪敏. 标记免疫分析与临床. 2011(06)
[9]葫芦种子传黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测[J]. 秦碧霞,蔡健和,陆秀红,林林,廖富荣,刘志明. 植物保护. 2011(03)
[10]三疣梭子蟹Profilin基因全长cDNA的克隆与表达分析[J]. 申望,叶茂,石戈,王日昕. 动物学研究. 2010(03)
博士论文
[1]网格重链蛋白CHC2在百脉根结瘤信号途径中功能及作用机制的研究[D]. 祝茂生.华中农业大学 2015
[2]十足目甲壳动物C型凝集素功能研究[D]. 王显伟.山东大学 2012
硕士论文
[1]对虾Coat-ε、CCAP17和CHC的克隆、表达及其在WSSV感染中的作用[D]. 王修芳.大连海洋大学 2016
[2]三个Tetraspanin蛋白的表达及其在WSSV感染中的作用分析[D]. 关广阔.上海海洋大学 2015
[3]柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建及EtAMA1相互作用蛋白的初步筛选[D]. 薛璞.上海师范大学 2013
[4]应用酵母双杂交系统筛选与CITED1相互作用蛋白[D]. 林振.南方医科大学 2013
[5]WSSV-VP90、VP39与WSSV及宿主蛋白的作用[D]. 李倩.上海海洋大学 2012
[6]表面等离子体共振技术对溶菌酶（lysozyme）生物吸附的应用研究[D]. 胡瑞.华东师范大学 2012
本文编号：3143795
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