两种形态变异类型日本囊对虾α-淀粉酶基因的克

发布时间：2021-04-17 23:37

　　日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）是我国重要的经济养殖品种,依据其头胸甲侧部斜纹的形态特征可分为两种不同的形态变异类型,即形态变异类型Ⅰ（variety Ⅰ）和形态变异类型Ⅱ（variety Ⅱ）,二者形态相似但遗传分化程度很高,具有不同的地理分布。α-淀粉酶是一种重要的碳水化合物水解酶,在虾类的食物消化和营养代谢方面具有重要作用。本文克隆了两种形态变异类型日本囊对虾的α-淀粉酶基因,分析了该基因的分子结构特征,通过基因的时空表达探讨其功能,并比较了两种形态变异类型α-淀粉酶基因的差异。主要结果如下：（1）形态变异类型1日本囊对虾α-淀粉酶基因MjAmy-1的cDNA序列长1651bp,其中开放阅读框1539 bp,编码一个由512个氨基酸组成的蛋白质。预测分子质量为57.10KDa,等电点为4.99,该多肽具有一个由17个氨基酸组成的信号肽。该基因DNA序列长3387bp,包含11个外显子和10个内含子。多序列比对和同源性分析显示,MjAmy-1是α-淀粉酶基因家族的成员,具有a-淀粉酶家族典型的功能位点和功能域,与凡纳滨对虾a-淀粉酶的氨基酸序列相似性最高（... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：124 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 日本囊对虾简介
        1.1.1 分类地位与形态特征
        1.1.2 地理分布和生活习性
        1.1.3 生活史
        1.1.4 日本囊对虾两种形态变异类型的相关研究
    1.2 α-淀粉酶研究概述
        1.2.1 α -淀粉酶概述
        1.2.2 α -淀粉酶的结构和分类
        1.2.3 α -淀粉酶的功能与应用
    1.3 动物、植物和微生物α-淀粉酶研究概况
        1.3.1 微生物α-淀粉酶
        1.3.2 植物α-淀粉酶
        1.3.3 动物α-淀粉酶
    1.4 水产动物α-淀粉酶的研究进展
        1.4.1 水产动物淀粉酶酶活的相关研究
            1.4.1.1 不同环境因子对淀粉酶活性的影响
            1.4.1.2 水产动物不同种类、食性与淀粉酶活性的关系
            1.4.1.3 水产动物不同生长发育阶段淀粉酶活性的研究
        1.4.2 水产动物α-淀粉酶基因的相关研究
    1.5 遗传多样性
        1.5.1 DNA分子标记
        1.5.2 单核苷酸多态性（SNP）
    1.6 本研究的内容与意义
    1.7 实验技术路线
第二章 日本囊对虾形态变异类型Ⅰα-淀粉酶基因MjAmy-1的基因克隆与序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 常用溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 总RNA提取
        2.2.2 cDNA第一链的合成
        2.2.3 MjAmy-1基因中间片段的克隆
        2.2.4 MjAmy-1基因3'RACE扩增
        2.2.5 MjAmy-1基因编码区克隆
        2.2.6 序列及结构特征分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 MjAmy-1基因的cDNA与氨基酸序列分析
        2.3.2 MjAmy-1基因的同源性分析
        2.3.3 MjAmy-1基因的系统进化分析
        2.3.4 MjAmy-1的基因组序列分析
        2.3.5 MjAmy-1基因的二级、三级结构预测
    2.4 讨论
第三章 日本囊对虾形态变异类型Ⅰα-淀粉酶基因MjAmy-1的组织分布与表达
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 主要试剂与材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 总RNA提取
        3.2.2 RT-PCR模板的制备
        3.2.3 实时荧光定量PCR实验
        3.2.4 α-淀粉酶蛋白在不同组织的分布
    3.3 实验结果
        3.3.1 引物特异性扩增检验和标准曲线的制作
        3.3.2 MjAmy-1基因的组织分布
        3.3.3 MjAmy-1基因在幼体发育阶段的表达变化
        3.3.4 α-淀粉酶蛋白在不同组织的分布
    3.4 讨论
        3.4.1 MjAmy-1基因的组织分布
        3.4.2 MjAmy-1基因在不同幼体发育阶段的表达
第四章 日本囊对虾形态变异类型Ⅱα-淀粉酶基因MjAmy-2的基因克隆与序列分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验仪器
        4.1.3 主要试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 引物设计
        4.2.2 MjAmy-2基因编码区的克隆
        4.2.3 序列及结构特征分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 MjAmy-2基因的开放阅读框与氨基酸序列分析
        4.3.2 MjAmy-2基因的同源性分析
        4.3.3 MjAmy-2基因的基因组序列分析
        4.3.4 MjAmy-2基因的二级、三级结构预测
    4.4 讨论
第五章 日本囊对虾两种形态变异类型α-淀粉酶基因MjAmy-1和MjAmy-2的比较
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 实验仪器
        5.1.3 主要试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 基因组总DNA的提取
        5.2.2 群体DNA片段的PCR扩增与测序
        5.2.3 群体SNP位点的筛选与统计
        5.2.4 SNP位点的遗传学参数分析
    5.3 实验结果
        5.3.1 MjAmy-1和MjAmy-2基因核苷酸序列的比较
        5.3.2 MjAmy-1和MjAmy-2基因氨基酸序列的比较
        5.3.3 MjAmy-1和MjAmy-2二级结构的比较
        5.3.4 两种形态变异类型群体α-淀粉酶基因SNP的比较
    5.4 讨论
第六章 结语
    6.1 结论
    6.2 主要创新点
    6.3 研究展望
参考文献
在学期间参与的项目与成果
致谢



本文编号：3144353