大黄鱼TNFR和IgH的克隆及免疫相关基因的表达分析
发布时间：2021-04-23 11:37
大黄鱼（Larimichthys crocea）是中国重要经济海水养殖鱼类之一,为中国特有的地方性种类,人工养殖技术的成功使其成为目前网箱养殖量最大的鱼类,但是随着养殖量的增加和养殖环境的破坏,常常导致大面积疾病的爆发,其中副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是养殖大黄鱼中最常见的病原菌之一,给大黄鱼的养殖业造成了巨大的损失。本研究从大黄鱼免疫基因入手,首先克隆获得肿瘤坏死因子受体（Tumor Necrosis Factor Receptor,TNFR）和免疫球蛋白重链（Immunoglobulin heavy chain,IgH）的cDNA全长。从实验室已构建的大黄鱼EST文库和前人的研究中筛选获得18个免疫相关基因:Toll样受体9（toll-like receptor,TLR9）、Toll样受体22（TLR22）、肿瘤坏死因子受体13B（TNFR13B）、RAC-GTP酶（RacGTPase,RAC）、白介素8（interleukin8,IL8）、白介素10（IL10）、干扰素调节因子1（interferon regulatory factor,IRF1）...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
1.1 大黄鱼的养殖现状及面临的问题
1.2 副溶血弧菌
1.3 鱼类的免疫系统
1.3.1 鱼类的免疫组织和器官
1.3.2 细胞免疫
1.3.3 体液免疫
1.4 研究内容和目的意义
1.4.1 研究内容
1.4.2 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要试剂和仪器
2.1.3 引物
2.2 实验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链的合成和基因片段的获得
2.2.3 SMART-RACE技术获取基因全长
2.2.4 割胶纯化基因片段
2.2.5 与PET19-T质粒载体连接
2.2.6 JM109感受态细胞的转化及筛选
2.2.7 质粒插入片段的PCR检测
2.2.8 质粒测序
2.2.9 目的基因的生物信息学分析
2.2.10 实时荧光定量PCR反应体系及条件
第3章 结果
3.1 大黄鱼性腺、脾脏及其他各组织总RNA的质量
3.2 TNFR基因的克隆和序列分析
3.2.1 TNFR基因的克隆
3.2.2 TNFR的cDNA序列分析
3.2.3 大黄鱼Lc TNFR空间模拟结构预测及系统进化树构建
3.3 IgH基因的克隆和序列分析
3.3.1 IgH基因的克隆
3.3.2 IgH的cDNA序列分析
3.3.3 IgH的同源性分析和系统发育分析
3.4 免疫基因在不同组织器官中的表达结果
3.4.1 大黄鱼LcTNFR基因在不同组织器官中的差异性表达结果
3.4.2 大黄鱼LcIgH基因在不同组织器官中的差异性表达结果
3.5 大黄鱼免疫相关基因在应激情况下的表达
第4章 讨论
4.1 肿瘤坏死因子受体TNFR
4.2 免疫球蛋白重链IgH
4.3 其它免疫相关基因
4.3.1 主要组织相容性复合体MHC基因
4.3.2 趋化因子CC、CCL、CCL114和SDF-1 基因
4.3.3 Toll信号通路其它相关基因TNFR13B、TLR9、TLR22、IL8、IL10、IRF1、Caspass9和Rac
4.3.4 补体1抑制因子、β2-微球蛋白和臂板蛋白
第5章 结论和展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]奥利亚罗非鱼髓样分化因子（MyD88）的克隆及其在组织中的表达[J]. 邹芝英,王倩,杨弘,李大宇,祝璟琳,肖炜. 动物学杂志. 2013(06)
[2]斜带石斑鱼MyD88基因的克隆与表达[J]. 韦友传,高谦,昌明先,罗廷荣. 基因组学与应用生物学. 2011(03)
[3]半滑舌鳎髓样分化因子的克隆和表达分析[J]. 沙珍霞,王娜,王启龙,徐田军,王磊,董晓丽,陈松林. 中国水产科学. 2010(04)
[4]赤点石斑鱼（Epinephelus akaara）MHC IIB基因的克隆与表达多态性分析[J]. 丁少雄,张之文,杜佳莹,王军,曾华嵩,王颖,陈晓峰. 海洋学报(中文版). 2009(02)
[5]大黄鱼β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的重组表达[J]. 余素红,王玉桥,陈新华. 台湾海峡. 2009(01)
[6]鱼类补体系统成分及补体特异性和功能的研究进展[J]. 王志平,张士璀,王光锋. 水生生物学报. 2008(05)
[7]鱼类趋化因子的研究进展[J]. 张金洲,陈新华. 生物技术通报. 2006(S1)
[8]鱼类趋化因子基因的研究[J]. 赫崇波,王强,刘卫东,周遵春,徐晓虹. 水产科学. 2006(07)
[9]鱼类免疫促进剂研究进展[J]. 姜因萍,吴后波,何毛贤. 海洋科学. 2006(07)
[10]HBV感染者人类白细胞Ⅰ,Ⅱ类抗原等位基因多态性分析[J]. 张淑云,李迪,谷鸿喜,李兴库,金茜,刘伟,杜博,卢滨. 世界华人消化杂志. 2006(10)
博士论文
[1]内源性凋亡途径在大黄鱼抗细菌感染中的作用及两个新的CC型趋化因子的功能研究[D]. 张金洲.厦门大学 2008
[2]草鱼MHC相关多肽与肿瘤坏死因子受体相关因子的克隆及其表达分析[D]. 徐在言.中国科学院研究生院（水生生物研究所） 2007
[3]牙鲆免疫系统形态结构、发育和感染病理反应的研究[D]. 刘云.中国海洋大学 2003
硕士论文
[1]虹鳟鱼γ-IFN诱导的溶酶体巯基还原酶及LIGHT（TNFSF14）的克隆、表达及生物学活性研究[D]. 刘萌.南京师范大学 2013
[2]拟穴青蟹（Scylla paramamosain）Toll样信号途径关键基因及抗菌肽SpALF的克隆、表达与功能分析[D]. 朱磊.四川农业大学 2012
[3]主要经济鱼类血清免疫球蛋白的共同表位研究[D]. 郑惠.福建农林大学 2012
[4]胸腺γδT细胞的分化去向[D]. 李红恩.中国医科大学 2009
本文编号：3155257
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
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摘要
abstract
第1章 引言
1.1 大黄鱼的养殖现状及面临的问题
1.2 副溶血弧菌
1.3 鱼类的免疫系统
1.3.1 鱼类的免疫组织和器官
1.3.2 细胞免疫
1.3.3 体液免疫
1.4 研究内容和目的意义
1.4.1 研究内容
1.4.2 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要试剂和仪器
2.1.3 引物
2.2 实验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链的合成和基因片段的获得
2.2.3 SMART-RACE技术获取基因全长
2.2.4 割胶纯化基因片段
2.2.5 与PET19-T质粒载体连接
2.2.6 JM109感受态细胞的转化及筛选
2.2.7 质粒插入片段的PCR检测
2.2.8 质粒测序
2.2.9 目的基因的生物信息学分析
2.2.10 实时荧光定量PCR反应体系及条件
第3章 结果
3.1 大黄鱼性腺、脾脏及其他各组织总RNA的质量
3.2 TNFR基因的克隆和序列分析
3.2.1 TNFR基因的克隆
3.2.2 TNFR的cDNA序列分析
3.2.3 大黄鱼Lc TNFR空间模拟结构预测及系统进化树构建
3.3 IgH基因的克隆和序列分析
3.3.1 IgH基因的克隆
3.3.2 IgH的cDNA序列分析
3.3.3 IgH的同源性分析和系统发育分析
3.4 免疫基因在不同组织器官中的表达结果
3.4.1 大黄鱼LcTNFR基因在不同组织器官中的差异性表达结果
3.4.2 大黄鱼LcIgH基因在不同组织器官中的差异性表达结果
3.5 大黄鱼免疫相关基因在应激情况下的表达
第4章 讨论
4.1 肿瘤坏死因子受体TNFR
4.2 免疫球蛋白重链IgH
4.3 其它免疫相关基因
4.3.1 主要组织相容性复合体MHC基因
4.3.2 趋化因子CC、CCL、CCL114和SDF-1 基因
4.3.3 Toll信号通路其它相关基因TNFR13B、TLR9、TLR22、IL8、IL10、IRF1、Caspass9和Rac
4.3.4 补体1抑制因子、β2-微球蛋白和臂板蛋白
第5章 结论和展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]奥利亚罗非鱼髓样分化因子（MyD88）的克隆及其在组织中的表达[J]. 邹芝英,王倩,杨弘,李大宇,祝璟琳,肖炜. 动物学杂志. 2013(06)
[2]斜带石斑鱼MyD88基因的克隆与表达[J]. 韦友传,高谦,昌明先,罗廷荣. 基因组学与应用生物学. 2011(03)
[3]半滑舌鳎髓样分化因子的克隆和表达分析[J]. 沙珍霞,王娜,王启龙,徐田军,王磊,董晓丽,陈松林. 中国水产科学. 2010(04)
[4]赤点石斑鱼（Epinephelus akaara）MHC IIB基因的克隆与表达多态性分析[J]. 丁少雄,张之文,杜佳莹,王军,曾华嵩,王颖,陈晓峰. 海洋学报(中文版). 2009(02)
[5]大黄鱼β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的重组表达[J]. 余素红,王玉桥,陈新华. 台湾海峡. 2009(01)
[6]鱼类补体系统成分及补体特异性和功能的研究进展[J]. 王志平,张士璀,王光锋. 水生生物学报. 2008(05)
[7]鱼类趋化因子的研究进展[J]. 张金洲,陈新华. 生物技术通报. 2006(S1)
[8]鱼类趋化因子基因的研究[J]. 赫崇波,王强,刘卫东,周遵春,徐晓虹. 水产科学. 2006(07)
[9]鱼类免疫促进剂研究进展[J]. 姜因萍,吴后波,何毛贤. 海洋科学. 2006(07)
[10]HBV感染者人类白细胞Ⅰ,Ⅱ类抗原等位基因多态性分析[J]. 张淑云,李迪,谷鸿喜,李兴库,金茜,刘伟,杜博,卢滨. 世界华人消化杂志. 2006(10)
博士论文
[1]内源性凋亡途径在大黄鱼抗细菌感染中的作用及两个新的CC型趋化因子的功能研究[D]. 张金洲.厦门大学 2008
[2]草鱼MHC相关多肽与肿瘤坏死因子受体相关因子的克隆及其表达分析[D]. 徐在言.中国科学院研究生院（水生生物研究所） 2007
[3]牙鲆免疫系统形态结构、发育和感染病理反应的研究[D]. 刘云.中国海洋大学 2003
硕士论文
[1]虹鳟鱼γ-IFN诱导的溶酶体巯基还原酶及LIGHT（TNFSF14）的克隆、表达及生物学活性研究[D]. 刘萌.南京师范大学 2013
[2]拟穴青蟹（Scylla paramamosain）Toll样信号途径关键基因及抗菌肽SpALF的克隆、表达与功能分析[D]. 朱磊.四川农业大学 2012
[3]主要经济鱼类血清免疫球蛋白的共同表位研究[D]. 郑惠.福建农林大学 2012
[4]胸腺γδT细胞的分化去向[D]. 李红恩.中国医科大学 2009
本文编号：3155257
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