大菱鲆卵黄蛋白原基因克

发布时间：2021-04-25 17:27

　　生产高质量的配子是动物实现有效生殖的基础。对于卵生动物而言,胚胎发育所必需的营养物质源于卵子成熟前母体的提前积累,这些物质包括蛋白质、脂质、糖类、维生素和矿物质等等,其中,Vtg是卵子蛋白类能源物质Yp的前体形式。硬骨鱼类Yp的生成过程十分复杂且具有明显的种属特异性,因此开展广泛研究十分必要。大菱鲆作为我国重要的海水养殖经济物种,却缺乏基本的Vtg及其衍生Yp的相关研究。因此本研究以繁殖季节雌性大菱鲆为研究对象,鉴定了vtg的多基因体系,分析了A类Vtg及其衍生Yp在肝脏、血液以及卵巢中的存在形式,探讨了Yp的内源合成现象并对外源途径中参与内吞作用的相关受体进行了表达研究,主要研究结果显示:1、繁殖季节,雌性大菱鲆卵巢内的卵母细胞由卵原细胞发展而来,经历了初级生长、能量物质积累、成熟过程以及退化等几个关键事件,以此可以将卵母细胞的发育分为卵原时期、染色质核仁时期、核仁外周早期、核仁外周晚期、皮层小泡时期、卵黄积累早期、卵黄积累晚期、成熟早期、成熟晚期以及退化期等几个时期,同时依据各阶段占主导的卵母细胞类型可以将大菱鲆繁殖期卵巢分为前卵黄积累时期、卵黄积累早期、卵黄积累晚期、后卵黄积累时... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)山东省

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词
第一章 文献综述
    1.1 Vtg
        1.1.1 Vtg的发现
        1.1.2 多基因体系
        1.1.3 Yp的生成途径
            1.1.3.1 Yp积累的一般模式——外源合成
            1.1.3.2 Yp的内源合成
        1.1.4 两次成熟性降解与“新功能化”
            1.1.4.1 Vtg蛋白的纯化与鉴定
            1.1.4.2 第一次成熟性降解
            1.1.4.3 第二次成熟性降解与“新功能化”
        1.1.5 vtg基因的表达调控
            1.1.5.1 雌激素与vtg基因的表达
            1.1.5.2 雌激素之外的其他因素与vtg基因的表达
            1.1.5.3 雌激素样内分泌干扰物的生物标志物
    1.2 Vtg相关受体
        1.2.1 LR8-
        1.2.2 LRP13
    1.3 大菱鲆Vtg研究背景
    1.4 本研究的意义与目的
第二章 繁殖期大菱鲆卵子发生及卵巢分期
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验试剂和仪器
        2.2.3 组织学观察
2的测定">        2.2.4 血清E₂的测定
        2.2.5 数据处理与分析
    2.3 结果
        2.3.1 繁殖期大菱鲆卵子生成过程
            2.3.1.1 卵黄积累之前的变化
            2.3.1.2 卵黄积累、成熟与退化
        2.3.2 以卵子生成为依据的卵巢分期
        2.3.3 繁殖期雌性大菱鲆的生理指标
    2.4 讨论
第三章 大菱鲆Vtg多基因体系和卵黄生成内外源途径分析
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验试剂和仪器
        3.2.3 肝脏和卵巢组织E2测定
        3.2.4 大菱鲆3个vtg基因c DNA全长的克隆
        3.2.5 序列分析
        3.2.6 荧光定量PCR分析组织特异性分布及在肝脏和卵巢中的表达模式
        3.2.7 原位杂交实验分析vtg基因在大菱鲆卵巢组织中的表达定位
        3.2.8 免疫组化实验分析卵巢组织Vtg的合成
        3.2.9 数据分析
    3.3 结果
        3.3.1 vtg基因c DNA全长及其结构分析
        3.3.2 相似性与进化分析
        3.3.3 3个vtg基因mRNA的组织特异性分布分析
        3.3.4 繁殖期雌性大菱鲆肝脏和卵巢组织的E2水平
        3.3.5 繁殖期雌性大菱鲆肝脏和卵巢中vtg基因的表达趋势
        3.3.6 卵巢中vtg基因及其蛋白的表达定位
    3.4 讨论
第四章 大菱鲆Vtg体外重组及外源合成、转运、积累模式初探
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验试剂和仪器
        4.2.3 大菱鲆VtgAa、VtgAb、VtgC结构分析
        4.2.4 VtgAa和 VtgAb抗体制备
            4.2.4.1 VtgAa和 VtgAb分段表达
            4.2.4.2 蛋白纯化及抗体制备
        4.2.5 Western blot鉴定各组织Vtg及 Yps
    4.3 结果
        4.3.1 大菱鲆VtgAa、VtgAb、VtgC结构分析
        4.3.2 抗体的制备及特异性检验
        4.3.3 大菱鲆A类 Vtg在肝脏、血清、水合前卵巢以及成熟卵子中的分子量鉴定
        4.3.4 繁殖期大菱鲆肝脏、血清以及卵巢中Vtg的动态变化
        4.3.5 体内老化卵子Yp降解分析
    4.4 讨论
第五章 大菱鲆卵黄蛋白原外源途径内吞相关受体的表达模式研究
    5.1 前言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 实验试剂和仪器
        5.2.3 受体基因cDNA全长的克隆
        5.2.4 序列分析
        5.2.5 qRT-PCR分析受体基因组织特异性分布及在性腺中的表达模式
        5.2.6 原位杂交实验分析受体基因在大菱鲆卵巢组织中的表达定位
        5.2.7 数据分析
    5.3 结果
        5.3.1 受体基因结构与进化分析
        5.3.2 受体mRNA组织特异性分布分析
        5.3.3 繁殖期大菱鲆性腺中受体基因的表达趋势
        5.3.4 繁殖期卵巢中erβ1和erβ2 的表达趋势
        5.3.5 卵巢中受体基因的表达定位
    5.4 讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
致谢
作者简历
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Characterization and differential expression of three GnRH forms during reproductive development in cultured turbot Schophthalmus maximus[J]. 赵春彦,徐世宏,丰程程,柳意樊,杨阳,王彦丰,肖永双,宋宗诚,刘清华,李军.  Journal of Oceanology and Limnology. 2018(04)
[2]A potential germ cell-specific marker in Japanese flounder,Paralichthys olivaceus:identification and characterization of lymphocyte antigen 75（Ly75/CD205）[J]. 杨阳,刘清华,马道远,宋宗诚,李军.  Journal of Oceanology and Limnology. 2018(04)
[3]硬骨鱼类卵黄原蛋白及其在卵子发生中的作用[J]. 周阳,侯聪聪,竺俊全.  中国细胞生物学学报. 2017(05)
[4]极低密度脂蛋白受体在肝脏脂类代谢中的研究进展[J]. 张冰,程玉宏,刘洋,黄时顺,王志刚.  医学综述. 2016(21)
[5]脂蛋白受体的研究进展[J]. 杜娟,吴刚,张艳杰,周成江.  包头医学院学报. 2011(04)
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[7]小体鲟卵黄蛋白生化特性及合成途径的研究[J]. 霍堂斌,张颖,孙大江,曲秋芝.  水生生物学报. 2009(01)
[8]硬骨鱼类的卵巢发育和卵子发生研究综述[J]. 张贤芳,张耀光,王志坚.  海南师范学院学报(自然科学版). 2006(01)
[9]圆口铜鱼卵巢发育及卵子发生的初步研究[J]. 张贤芳,张耀光,甘光明,王志坚.  西南农业大学学报(自然科学版). 2005(06)
[10]硬骨鱼类卵子发生研究及其应用前景[J]. 张立飞,杨万喜.  浙江大学学报(理学版). 2003(02)

硕士论文
[1]稀有鮈鲫原始生殖细胞的起源、迁移和分化及卵巢发育和卵子发生研究[D]. 代丽.西南大学 2013
[2]斑马鱼（Danio rerio）繁殖生理机能及其调控研究[D]. 周玉国.中国海洋大学 2008



本文编号：3159791