白斑综合征病毒（WSSV）对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）致病的原因及机制初步研究

发布时间：2021-04-25 22:11

　　白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）属于线头病毒科（Nimaviridae）的白斑病毒属（Whispovirus）,具有很强的传染性,是危害虾蟹等甲壳类最严重的水产病原之一。2015年有学者首次报道池塘养殖的中华绒螯蟹感染WSSV,造成很高的死亡率。虽然对WSSV的致病机理进行了探索,但至今仍无有效的防治方法。有研究表明自噬在病毒与宿主相互作用中起关键作用,本文围绕WSSV感染不同宿主之后的组织和解剖症状,感染中华绒螯蟹后肝胰腺、鳃和肠道部位的组织病理变化,利用Western-blot和免疫荧光技术检测WSSV诱导中华绒螯蟹血细胞自噬,研究了WSSV诱导血细胞自噬体形成以及可能的激活机制。取得如下研究结果:从自然发病的克氏原螯虾和凡纳滨对虾体内分别分离到WSSV和维氏气单胞菌AVZ01。将提取的WSSV病毒液重新注射健康克氏原螯虾后出现相同症状并且扩增出目的条带。AVZ01进行人工回归感染试验后,对虾发病症状与自然发病症状相似,凡纳滨对虾的LD₅₀为8.7×10⁵ CFU/mL。根据该菌株的形态特征、... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1 白斑综合征病毒研究进展
        1.1 白斑综合征病毒简介
        1.2 白斑综合征病毒研究概况
            1.2.1 白斑综合征病毒的命名、形态学特征
            1.2.2 白斑综合征病毒易感宿主及其传播途径
            1.2.3 白斑综合征病毒感染对虾和中华绒螯蟹的症状、组织变化
            1.2.4 白斑综合征的增殖过程
    2 自噬的研究进展
        2.1 自噬的发现及发展概况
        2.2 自噬的分型
        2.3 自噬的形成过程
        2.4 自噬的调控
            2.4.1 依赖mTOR调控途径
            2.4.2 不依赖mTOR调控途径
            2.4.3 其他自噬途径
        2.5 自噬检测方法
            2.5.1 透射电镜观察自噬体的形态——检测自噬的金标准
            2.5.2 基于自噬体LC3和p62的检测
            2.5.3 监测“自噬潮（autophagicflux）”
            2.5.4 体内自噬
        2.6 自噬与病毒感染的关系
        2.7 白斑综合征病毒对中华绒螯蟹的致病机制
    3 研究的目的和意义
第二章 不同宿主白斑综合征病毒（WSSV）的分离及感染
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 克氏原螯虾、凡纳滨对虾、中华绒螯蟹以及斑马鱼
            1.1.2 试验用斑马鱼
            1.1.3 主要试剂和仪器
        1.2 方法
            1.2.1 克氏原螯虾、凡纳滨对虾、中华绒螯蟹以及斑马鱼体内WSSV病毒检测
            1.2.2 PCR反应及产物的电泳检测
            1.2.3 病原分离与纯化
50)测试试验">            1.2.4 人工感染及半数致死剂量(LD₅₀)测试试验
            1.2.5 细菌形态特征观察和生理生化鉴定
            1.2.6 细菌16S rRNA基因序列分析
            1.2.7 系统发育树的构建
            1.2.8 WSSV感染斑马鱼
    2 结果
        2.1 WSSV感染克氏原螯虾后的主要症状
        2.2 分子生物学检测
        2.3 凡纳滨对虾临床主要症状
        2.4 细菌的分离和形态观察
        2.5 病原菌的生理生化和分子鉴定
        2.6 WSSV感染中华绒螯蟹和凡纳滨对虾后症状
        2.7 WSSV感染斑马鱼后症状
    3 讨论
第三章 WSSV感染中华绒螯蟹后组织病理损伤观察
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 主要试剂
            1.1.2 主要仪器设备
        1.2 常用溶液
        1.3 实验方法
            1.3.1 WSSV攻毒感染中华绒螯蟹实验
            1.3.2 攻毒后中华绒螯蟹组织病理损伤
            1.3.3 模板DNA制备
            1.3.4 病毒引物设计合成
            1.3.5 PCR反应及产物的电泳检测
    2 结果
        2.1 中华绒螯蟹攻毒感染后症状
        2.2 WSSV在中华绒螯蟹体内感染情况
        2.3 肝胰腺组织病理观察
        2.4 鳃组织病理观察
        2.5 其他组织病理观察
    3 讨论
第四章 WSSV诱导中华绒螯蟹血细胞自噬的初步研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 主要化学试剂和仪器
            1.1.3 实验用引物
        1.2 方法
            1.2.1 中华绒螯蟹免疫刺激和血细胞收集
            1.2.2 Western blot
            1.2.3 血细胞免疫荧光
            1.2.4 不同刺激血细胞RNA提取
            1.2.5 cDNA合成
            1.2.6 实时荧光定量PCR检测自噬相关基因
            1.2.7 数据分析
    2 结果
        2.1 WSSV和雷帕霉素对中华绒螯蟹血细胞自噬的激活
        2.2 WSSV诱导中华绒螯蟹血细胞自噬
        2.3 WSSV诱导血细胞EsGabarap和EsAtg7基因mRNA表达水平的影响
    3 讨论
第五章 小结与展望
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]中华绒螯蟹肝胰腺坏死综合症病原及病理学研究[J]. 杨宗英,张一柳,胡鲲,刘力硕,蔡红桂,张凤翔,杨先乐.  水生生物学报. 2018(01)
[2]湖北省潜江地区克氏原螯虾白斑综合征PCR诊断及组织病理学观察[J]. 何琦瑶,汪开毓,刘韬,刘绍春,贺扬,叶彩燕,何晟毓,秦振阳,谢恒.  水产学报. 2018(01)
[3]中华绒螯蟹水瘪子病不同发病阶段的病理变化特点[J]. 陆宏达,田全全,贾相相,张小俊,任芳芳.  水生生物学报. 2017(06)
[4]鲍曼不动杆菌外膜蛋白A真核表达载体构建及其诱导Hela细胞不完全自噬[J]. 安志远,黄骁舾,丁文一.  免疫学杂志. 2017(11)
[5]黄曲霉毒素B1诱导MEK/ERK/ROS介导的巨噬细胞自噬反应[J]. 安雅男,施晓晨,王超,李树林,李燕,于录.  吉林农业大学学报. 2017(01)
[6]高致病性维氏气单胞菌胞外产物对斑点鲖的致病性[J]. 贺扬,华丽,汪开毓,陈德芳,王均,王二龙,王兴丽,杨倩,吴学婧,何洁,赖为民.  水产学报. 2016(03)
[7]两种LD50计算方法对副溶血性弧菌毒力的比较研究[J]. 董雪红,田敏,季策,马文元,张庆华.  上海海洋大学学报. 2016(01)
[8]细胞自噬在病毒感染与免疫过程中的作用[J]. 彭立玮,张晓晓,吴兴安,王芳.  细胞与分子免疫学杂志. 2015(04)
[9]饥饿状态下Lewis细胞HMGB1的表达、定位与细胞自噬发生的相关性研究[J]. 汪汀,高云涛,王承琳,徐鑫鑫,尹晶平,田莎莎,邢丽丹,王胜军,张盼,纪晓昀,沈慧玲,许化溪,苏兆亮.  免疫学杂志. 2013(12)
[10]细胞自噬的研究方法[J]. 马泰,孙国平,李家斌.  生物化学与生物物理进展. 2012(03)



本文编号：3160181