刺参候选耐寒基因的克隆与表达分析
发布时间：2021-04-28 19:52
刺参主产于我国北方沿海地区，是我国北方棘皮动物养殖的重要经济种类，其营养价值很高，而且还有广泛的药用价值。温度会影响刺参的生存、生长发育和繁殖，研究环境温度对刺参的生长、生存和生理等的影响，可以为评估在低温下刺参的生长状态以及开展刺参的安全养殖提供一些基础依据。近年来，低温病害使我国北方海水养殖业遭受了巨大损失，沿海冬季低温冰害对刺参养殖业造成的危害亟待解决。本研究模拟了刺参冬季养殖环境，对刺参进行室内降温试验，从本实验室构建的刺参耐寒基因筛选cDNA中挑选候选耐寒基因，研究其在低温胁迫下的表达量。为了解刺参耐低温基因的表达模式及其机理研究，培育刺参抗寒优良品种提供了大量依据，有利于提高我国刺参抗逆分子育种的研究水平，减少低温冰害对我国北方刺参养殖业造成的损失。本试验利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术，对未得到全长的基因尿苷胞苷激酶-1基因进行了克隆，将尿苷胞苷激酶-1基因的核心序列片段和RACE克隆的3端和5端的cDNA进行拼接后获得了刺参尿苷胞苷激酶-1基因的全长。该cDNA全长为3189bp，5′非编码区（Untranslated Region,UTR）126bp，3′非编...
【文章来源】：大连海洋大学辽宁省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
第一章 综述
1.1 仿刺参的介绍
1.1.1 温度对刺参生长的影响
1.1.2 温度对刺参繁殖和发育的影响
1.1.3 刺参的夏眠
1.2 水产动物耐寒方面研究进展
1.3 实时荧光定量 PCR 技术及其应用
1.4 选题及意义
第二章 刺参尿苷胞苷激酶-1 基因的克隆与分析
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 刺参总 RNA 的提取
2.1.3 引物设计
2.1.4 序列分析
2.2 结果与分析
2.2.1 刺参尿苷胞苷激酶-1 基因的全长序列
2.2.2 刺参尿苷胞苷激酶-1 基因的氨基酸组成特征
2.2.3 刺参与其他物种尿苷胞苷激酶-1 氨基酸序列同源序列分析
2.2.4 系统进化树的构建
2.3 讨论
2.3.1 刺参尿苷胞苷激酶-1 的克隆
2.3.2 尿苷胞苷激酶-1 的序列及功能分析
第三章 候选耐寒基因在刺参不同组织及两种降温模式下的表达研究
3.1 材料与方法
3.1.1 降温试验
3.1.2 实验试剂与药品
3.1.3 主要的仪器设备
3.1.4 引物设计
3.1.5 组织分布、低温胁迫后耐寒基因表达检测、数据处理
3.1.6 总 RNA 提取
3.1.7 cDNA 的制备
3.1.8 RT-PCR
3.2 结果
3.2.1 总 RNA 提取及检测
3.2.2 反转录后的扩增检测结果
3.2.3 定量引物的验证
3.2.4 实时荧光定量 PCR 扩增效率鉴定结果
3.2.5 刺参候选耐寒基因在四种不同组织中的表达情况
3.2.6 候选耐寒基因在不同低温处理条件下的表达
3.3 讨论
3.3.1 内参基因的确定
3.3.2 两种不同降温模式下刺参耐寒候选基因表达变化规律
3.4 小结
第四章 刺参主要卵黄蛋白 MYP1、MYP2 在幼体发育及温度胁迫下的表达研究
4.1 材料与方法
4.1.1 刺参产卵、受精和幼体培养
4.1.2 温度处理
4.1.3 样品采集
4.1.4 总 RNA 提取
4.1.5 cDNA 的制备
4.1.6 引物设计筛选及选择内参基因
4.1.7 RT-PCR
4.2 结果
4.2.1 引物筛选结果及内参基因的确立
4.2.2 MYP 在刺参不同发育阶段的表达
4.2.3 MYP 的组织特异性表达
4.2.4 长时温度胁迫下刺参肠组织中 MYP 的表达
4.2.5 短时低温胁迫下刺参肠组织中 MYP 的表达
4.3 讨论
4.3.1 内参基因的选择
4.3.2 MYP 在阶段发育过程和组织中的表达
4.3.3 MYP 在不同温度处理下的表达情况
4.4 小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]刺参耐寒基因筛选cDNA文库的构建与分析[J]. 李成泽,王晓燕,丁君,常亚青. 大连海洋大学学报. 2013(06)
[2]低温对不同规格刺参幼参生长与耗氧率的影响[J]. 赵斌,李成林,胡炜,吴志宏,谭林涛,王鹏飞. 海洋科学. 2011(12)
[3]凡纳滨对虾TCP-1-eta基因的克隆及与耐寒性状的相关性[J]. 殷勤,彭金霞,崔亮,谢达祥,王志伟,李奎,陈晓汉. 遗传. 2011(02)
[4]刺参（Apostichopus japonicus）高温胁迫消减cDNA文库的构建与分析[J]. 吉成龙,孙国华,杨建敏,宋志乐,刘相全,王卫军. 海洋与湖沼. 2011(01)
[5]鲤EST标记与耐低温性状的相关性分析及定位[J]. 常玉梅,高国强,徐丽华,刘金亮,刘春雷,梁利群. 动物学研究. 2010(06)
[6]温度胁迫对三疣梭子蟹血清中非特异性免疫因子的影响[J]. 吴丹华,郑萍萍,张玉玉,王春琳. 大连海洋大学学报. 2010(04)
[7]吉富罗非鱼对低温持续胁迫的死亡反应[J]. 马旦梅,程光平,喻海燕. 广西农业科学. 2010(07)
[8]仿刺参铁蛋白ferritin基因的序列分析及表达[J]. 杨爱馥,周遵春,孙大鹏,董颖,姜北,汪笑宇,陈仲,关晓燕,王摆. 水产学报. 2010(06)
[9]仿刺参cytb和β-actin基因表达稳定性比较[J]. 杨爱馥,周遵春,董颖,姜北,汪笑宇,陈仲,关晓燕,王摆,孙大鹏. 中国农业科技导报. 2010(01)
[10]刺参对温度适应的生理生态学研究进展[J]. 董云伟,董双林. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2009(05)
博士论文
[1]刺参Apostichopus japonicus （Selenka）夏眠分子机理的基础研究[D]. 王天明.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2011
[2]刺参（Apostichopus Japonicus）对温度变化的生态生理学响应机制[D]. 纪婷婷.中国海洋大学 2009
[3]温度及其周期性波动对刺参Apostichopus japonicus（Selenka）生长和能量收支的影响[D]. 安振华.中国海洋大学 2008
硕士论文
[1]肉鸡冷应激相关基因的mRNA表达谱分析及差异表达基因的研究[D]. 刘晓丹.东北农业大学 2012
本文编号：3166073
【文章来源】：大连海洋大学辽宁省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
第一章 综述
1.1 仿刺参的介绍
1.1.1 温度对刺参生长的影响
1.1.2 温度对刺参繁殖和发育的影响
1.1.3 刺参的夏眠
1.2 水产动物耐寒方面研究进展
1.3 实时荧光定量 PCR 技术及其应用
1.4 选题及意义
第二章 刺参尿苷胞苷激酶-1 基因的克隆与分析
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 刺参总 RNA 的提取
2.1.3 引物设计
2.1.4 序列分析
2.2 结果与分析
2.2.1 刺参尿苷胞苷激酶-1 基因的全长序列
2.2.2 刺参尿苷胞苷激酶-1 基因的氨基酸组成特征
2.2.3 刺参与其他物种尿苷胞苷激酶-1 氨基酸序列同源序列分析
2.2.4 系统进化树的构建
2.3 讨论
2.3.1 刺参尿苷胞苷激酶-1 的克隆
2.3.2 尿苷胞苷激酶-1 的序列及功能分析
第三章 候选耐寒基因在刺参不同组织及两种降温模式下的表达研究
3.1 材料与方法
3.1.1 降温试验
3.1.2 实验试剂与药品
3.1.3 主要的仪器设备
3.1.4 引物设计
3.1.5 组织分布、低温胁迫后耐寒基因表达检测、数据处理
3.1.6 总 RNA 提取
3.1.7 cDNA 的制备
3.1.8 RT-PCR
3.2 结果
3.2.1 总 RNA 提取及检测
3.2.2 反转录后的扩增检测结果
3.2.3 定量引物的验证
3.2.4 实时荧光定量 PCR 扩增效率鉴定结果
3.2.5 刺参候选耐寒基因在四种不同组织中的表达情况
3.2.6 候选耐寒基因在不同低温处理条件下的表达
3.3 讨论
3.3.1 内参基因的确定
3.3.2 两种不同降温模式下刺参耐寒候选基因表达变化规律
3.4 小结
第四章 刺参主要卵黄蛋白 MYP1、MYP2 在幼体发育及温度胁迫下的表达研究
4.1 材料与方法
4.1.1 刺参产卵、受精和幼体培养
4.1.2 温度处理
4.1.3 样品采集
4.1.4 总 RNA 提取
4.1.5 cDNA 的制备
4.1.6 引物设计筛选及选择内参基因
4.1.7 RT-PCR
4.2 结果
4.2.1 引物筛选结果及内参基因的确立
4.2.2 MYP 在刺参不同发育阶段的表达
4.2.3 MYP 的组织特异性表达
4.2.4 长时温度胁迫下刺参肠组织中 MYP 的表达
4.2.5 短时低温胁迫下刺参肠组织中 MYP 的表达
4.3 讨论
4.3.1 内参基因的选择
4.3.2 MYP 在阶段发育过程和组织中的表达
4.3.3 MYP 在不同温度处理下的表达情况
4.4 小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]刺参耐寒基因筛选cDNA文库的构建与分析[J]. 李成泽,王晓燕,丁君,常亚青. 大连海洋大学学报. 2013(06)
[2]低温对不同规格刺参幼参生长与耗氧率的影响[J]. 赵斌,李成林,胡炜,吴志宏,谭林涛,王鹏飞. 海洋科学. 2011(12)
[3]凡纳滨对虾TCP-1-eta基因的克隆及与耐寒性状的相关性[J]. 殷勤,彭金霞,崔亮,谢达祥,王志伟,李奎,陈晓汉. 遗传. 2011(02)
[4]刺参（Apostichopus japonicus）高温胁迫消减cDNA文库的构建与分析[J]. 吉成龙,孙国华,杨建敏,宋志乐,刘相全,王卫军. 海洋与湖沼. 2011(01)
[5]鲤EST标记与耐低温性状的相关性分析及定位[J]. 常玉梅,高国强,徐丽华,刘金亮,刘春雷,梁利群. 动物学研究. 2010(06)
[6]温度胁迫对三疣梭子蟹血清中非特异性免疫因子的影响[J]. 吴丹华,郑萍萍,张玉玉,王春琳. 大连海洋大学学报. 2010(04)
[7]吉富罗非鱼对低温持续胁迫的死亡反应[J]. 马旦梅,程光平,喻海燕. 广西农业科学. 2010(07)
[8]仿刺参铁蛋白ferritin基因的序列分析及表达[J]. 杨爱馥,周遵春,孙大鹏,董颖,姜北,汪笑宇,陈仲,关晓燕,王摆. 水产学报. 2010(06)
[9]仿刺参cytb和β-actin基因表达稳定性比较[J]. 杨爱馥,周遵春,董颖,姜北,汪笑宇,陈仲,关晓燕,王摆,孙大鹏. 中国农业科技导报. 2010(01)
[10]刺参对温度适应的生理生态学研究进展[J]. 董云伟,董双林. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2009(05)
博士论文
[1]刺参Apostichopus japonicus （Selenka）夏眠分子机理的基础研究[D]. 王天明.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2011
[2]刺参（Apostichopus Japonicus）对温度变化的生态生理学响应机制[D]. 纪婷婷.中国海洋大学 2009
[3]温度及其周期性波动对刺参Apostichopus japonicus（Selenka）生长和能量收支的影响[D]. 安振华.中国海洋大学 2008
硕士论文
[1]肉鸡冷应激相关基因的mRNA表达谱分析及差异表达基因的研究[D]. 刘晓丹.东北农业大学 2012
本文编号：3166073
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