淡水鱼消化道噬菌体多样性及噬菌体受体的遗传学分析

发布时间：2021-05-08 15:10

　　由于水产养殖业的抗生素滥用,导致水产致病菌的耐药性逐年增加,严重危害食品安全。本文以淡水鱼的肠道为样品,分离致病菌和噬菌体,研究鱼类消化道中噬菌体种群多样性,同时采用分子生物学方法,筛选宿主噬菌体受体分子相关基因。收集62份淡水鱼肠道样品,分离致病菌和噬菌体。使用TCBS、SS和MAC三种选择性培养基,共分离到445株革兰氏阴性菌,并作为指示菌分离噬菌体。通过富集培养和双层平板法,分离到75株噬菌体。通过分析16S rRNA基因对宿主菌进行鉴定,结果显示,75株宿主菌分布在3个科、11个属。曾经被报道的宿主菌包括:气单胞菌属（Aeromonas）37株,弧菌属（Vibrio）1株,柠檬酸菌属（Citrobacter）19株,沙雷氏菌属（Serratia）5株,摩根氏菌属（Morganella）2株和变形杆菌属（Proteua）3株。首次被发现的宿主菌包括:肠杆菌属（Enterobacter）2株,步丘氏菌属（Buttiauxella）2株,邻单胞菌属（Plesiomonas）2株,克吕沃尔氏菌属（Kluyvera）1株和普罗维登斯菌属（Providencia）1 株。本实验中分离株数最... 

【文章来源】：天津科技大学天津市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 水产品的重要性和现状
    1.2 重要的水产致病菌
        1.2.1 气单胞菌属
        1.2.2 弧菌属
        1.2.3 变形杆菌属
        1.2.4 邻单胞菌属
        1.2.5 摩根菌属
    1.3 噬菌体
        1.3.1 噬菌体概述
        1.3.2 噬菌体的受体
        1.3.3 噬菌体的生态学意义
    1.4 本文的研究意义及其内容
        1.4.1 本文研究意义
        1.4.2 本文研究内容
2 材料与方法
    2.1 样品来源
    2.2 选择性培养基分离水产致病菌
        2.2.1 选择性培养基的种类和成分
        2.2.2 选择性培养基的分离原理
        2.2.3 潜在水产致病菌的分离
    2.3 乳酸菌的分离
    2.4 芽孢杆菌的分离
    2.5 噬菌体的分离
        2.5.1 噬菌体的富集
        2.5.2 双层平板法分离噬菌体
        2.5.3 噬菌体的纯化
        2.5.4 噬菌体的保存
    2.6 致病菌的鉴定
        2.6.1 基因组DNA的提取
        2.6.2 致病菌16S rRNA基因的PCR扩增
        2.6.3 宿主菌16S rRNA基因的克隆及测序
        2.6.4 使用BLAST工具分析宿主菌16S rRNA基因
        2.6.5 构建致病菌16S rRNA基因的系统进化树
    2.7 气单胞菌属菌株的分型
        2.7.1 气单胞菌的PFGE分型
        2.7.2 气单胞菌属菌株的RAPD分型
        2.7.3 气单胞菌属菌株的ERIC-PCR分型
        2.7.4 分析电泳结果构建系统进化树
    2.8 气单胞菌致病性分析
        2.8.1 气单胞菌毒力基因的PCR扩增
        2.8.2 溶血性分析
    2.9 气单胞菌噬菌体的生物学特性分析
        2.9.1 噬菌体滴度测定
        2.9.2 噬菌体宿主范围的测定
        2.9.3 噬菌体对宿主菌的生长抑制试验
        2.9.4 pH对噬菌体稳定性的影响
    2.10 气单胞菌噬菌体受体相关基因的遗传学分析
        2.10.1 构建气单胞菌转座子文库
        2.10.2 噬菌体抗性突变株对噬菌体的吸附分析
        2.10.3 转座子Tn5G插入位点的确定
        2.10.4 突变子泳动能力(swimming motility)的测定
3 结果与讨论
    3.1 淡水鱼消化道内的微生物生态分析
        3.1.1 潜在致病菌的分离
        3.1.2 乳酸菌的分离
        3.1.3 芽孢杆菌的分离
    3.2 淡水鱼消化道内噬菌体的分离
    3.3 噬菌体宿主菌的鉴定和同源性分析
        3.3.1 宿主菌16S rRNA基因的鉴定
        3.3.2 宿主菌16S rRNA基因的同源性分析
    3.4 气单胞菌分型研究
        3.4.1 气单胞菌的RAPD分型
        3.4.2 气单胞菌的ERIC-PCR分型
        3.4.3 气单胞菌的PFGE分型
        3.4.4 气单胞菌的毒力基因扩增和溶血性分析
    3.5 气单胞菌噬菌体宿主范围的测定
    3.6 噬菌体的生物学特性研究
        3.6.1 噬菌体对宿主菌的抑制效应
        3.6.2 噬菌体与菌株的组合对生长抑制的影响
        3.6.3 pH对噬菌体稳定性的影响
    3.7 噬菌体受体相关基因的遗传分析
        3.7.1 构建转座子文库筛选噬菌体耐受突变株
        3.7.2 突变株的表型
        3.7.3 鉴定突变子的插入位点
4 结论
5 展望
6 参考文献
7 攻读硕士学位期间发表论文情况
8 致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]阴离子交换晶胶层析分离质粒DNA[J]. 郭延涛,沈绍传,贠军贤,姚克俭.  生物工程学报. 2012(08)
[2]黏质沙雷菌短尾噬菌体中国分离株的鉴定[J]. 徐凤宇,刘永杰,马红霞,张岩,苏胜兵,沈婵娟,陆承平.  病毒学报. 2012(04)
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[7]异育银鲫类志贺邻单胞菌的鉴定[J]. 陆文浩,杨家新,陈辉,顾伟,杨鸢劼.  淡水渔业. 2009(02)
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[10]铜绿假单胞菌PA1550基因对泳动及蹭动的影响[J]. 姚宏明,张璐,单志英,李迎丽,徐海津,乔明强.  微生物学报. 2008(07)

博士论文
[1]噬菌体与宿主细胞相互作用的微量热研究[D]. 刘国生.武汉大学 2004



本文编号：3175556