鰤诺卡氏菌毒力因子MCE1A的克

发布时间：2021-05-09 01:19

　　鰤诺卡氏菌病是海水和淡水鱼类中流行一种慢性传染病,给水产行业带来严重危害,病原菌为鰤诺卡氏菌（Nocardia20seriolae）。该病原菌能够引起机会性感染,当生存环境恶劣,鱼体自身免疫功能不全,生长情况差或者鱼体存在伤处和缺陷时,通过创伤或者饲料喂养等媒介均可以感染鰤诺卡氏菌,引起一种急性或慢性化脓或肉芽肿性病变,主要症状是肝脏、肾脏和脾脏处有明显肉眼可观察到的结节（肉芽肿）,心和鳔上偶尔也可见。mce1A基因编码的细胞侵袭相关蛋白是结合分支杆菌（Mycobacterium20tuberculosis）的毒力蛋白之一,隶属哺乳动物细胞入侵因子蛋白家族,决定结核分枝杆菌侵袭性表型。本文以22株不同鱼源的致病性鰤诺卡氏菌为研究目标,针对鰤诺卡氏菌的哺乳动物细胞入侵因子蛋白进行生物学分析,并对其中mce1A基因进行克隆及表达分析,以期了解mce1A基因在鰤诺卡氏菌致病机制中的作用。本文采用荧光定量PCR检测鰤诺卡氏菌在卵形鲳鲹内的菌载量动态变化。在急性感染阶段,被检测组织中均发现鰤诺卡氏菌存在,表明可以在不同组织内定植,分布广泛。其中,肾组织中的菌载量最高,揭示肾组织是鰤诺卡氏菌侵染的... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1 鰤诺卡氏菌概况
        1.1 生物学特性
        1.2 鰤诺卡氏菌的致病性
        1.3 鰤诺卡氏菌的诊断检测技术进展
        1.4 鰤诺卡氏菌病防治研究进展
    2 鰤诺卡氏菌致病因子
    3 致病性放线菌毒力因子的结构与功能
        3.1 MCE蛋白家族概况
        3.2 Ag85复合物
        3.3 PE/PPE 家族蛋白
        3.4 Cho D
        3.5 磷脂酶C
    4 研究目的及意义
第二章 鰤诺卡氏菌侵染卵形鲳鲹后各组织菌载量动态变化
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 结果
        2.2.1 标准曲线
        2.2.2 鰤诺卡氏菌侵染卵形鲳鲹后鱼体各组织菌载量的动态变化
        2.2.3 检测死亡高峰期鰤诺卡氏菌对卵形鲳鲹的组织嗜性
    2.3 讨论
第三章 鰤诺卡氏菌mce1A基因的克隆
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 结果
        3.2.1 MCE蛋白家族验证实验
        3.2.2 PCR扩增结果
        3.2.3 mce1A基因全序列
        3.2.4 信号肽分析结果
        3.2.5 跨膜分析结果
        3.2.6 mce1A氨基酸序列分析
        3.2.7 mce1A氨基酸序列的同源性分析
        3.2.8 构建系统进化树
    3.3 讨论
第四章 鰤诺卡氏菌mce1A基因原核表达
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 结果
        4.2.1 PCR结果
        4.2.2 质粒的双酶切
        4.2.3 重组蛋白的诱导表达
        4.2.4 重组蛋白原核表达条件的优化
        4.2.5 重组蛋白的Western Blot检测
        4.2.6 重组蛋白的可溶性检测
        4.2.7 融合蛋白的纯化
    4.3 讨论
第五章 鰤诺卡氏菌MCE1A亚单位疫苗免疫保护力研究
    5.1 材料与方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 结果
        5.2.1 免疫接种成活率
        5.2.2 MCE1A蛋白免疫 30d后的免疫保护效果
    5.3 讨论
第六章 鰤诺卡氏菌索状因子亚单位疫苗免疫保护力研究
    6.1 材料与方法
        6.1.1 材料
        6.1.2 方法
    6.2 结果
        6.2.1 索状因子免疫接种成活率
        6.2.2 索状因子免疫 15d后的免疫保护力
        6.2.3 索状因子免疫 30d后的免疫保护力
    6.3 讨论
全文总结
参考文献
附录
致谢



本文编号：3176333