海洋卡拉胶降解菌Cellulophaga20sp.KL-A的筛选优化及卡拉胶酶研究
发布时间：2021-05-08 18:51
卡拉胶（Carrageenan）是一种亲水性的多糖物质,从某些海藻细胞壁提取的、由β-1,3-D-半乳糖和α-1,4-D-半乳糖为基本骨架,交替连接所形成的线性硫酸多糖,主要分为三类：λ-（Lamda）型、ι-（Iota）型和κ-（Kappa）型。卡拉胶的降解产物寡糖具有广泛的生物活性,如免疫调节、抗凝血、抗肿瘤、抗病毒等作用。卡拉胶降解酶是一种多糖水解酶,通过作用于卡拉胶的p-1,4糖苷键来水解卡拉胶,其水解产物主要为偶数卡拉胶寡糖。目前已报道的卡拉胶酶都归属于糖水解酶家族。对不同类型的卡拉胶酶结构及其功能、底物专一性等研究,具有重要的理论意义和实践价值。另外,利用卡拉胶酶也可以对卡拉胶硫酸基团的结构和功能之间的关系进行研究,对卡拉寡糖工业化应用、细菌卡拉胶代谢研究等方面也具有重要意义。而且酶解法制备卡拉胶寡糖的底物专一、条件温和,能解决传统化学和物理降解法不易控制、产物分布不均匀的缺点,从而为进一步研究卡拉胶寡糖的生物活性提供帮助。本论文从漳州市东山岛海域海水、养殖海水及红藻藻体上分离得到8株具有卡拉胶及琼胶降解功能的菌株,其中一株编号KL-A经平板划线,根据平板上水解圈的大小及发...
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
Contents
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 海洋多糖及多糖水解酶
1.2 卡拉胶结构、性质及应用
1.2.1 卡拉胶的结构组成与分类
1.2.2 卡拉胶的理化性质
1.2.3 卡拉胶的应用
1.3 卡拉胶寡糖
1.3.1 卡拉胶寡糖的制备方法
1.3.2 卡拉胶寡糖的分离纯化与寡糖结构的鉴定方法
1.3.3 卡拉胶寡糖的生物活性
1.4 卡拉胶酶
1.4.1 卡拉胶降解酶的研究进展
1.4.2 卡拉胶酶的应用
1.4.3 卡拉胶降解酶的应用前景展望
1.5 菌株发酵产酶的优化方法
1.5.1 非统计学方法
1.5.2 统计学方法
1.6 本论文的研究思路、目的与意义
第二章 ι-卡拉胶降解细菌的筛选鉴定及其产酶培养基的统计学优化
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 培养基
2.1.3 试剂
2.2 实验方法
2.2.1 卡拉胶降解细菌的筛选
2.2.2 产卡拉胶酶细菌的鉴定
2.2.3 卡拉胶酶活力的测定
2.2.4 卡拉胶酶培养基的统计学优化
2.3 实验结果
2.3.1 卡拉胶降解细菌KL-A的分离与鉴定
2.3.2 Cellulophaga sp.KL-A产卡拉胶酶培养基的统计学优化
2.4 小结与讨论
第三章 Cellulophaga sp.KL-A中ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce的克隆表达与酶学性质的研究
3.1 实验材料
3.1.1 菌株、质粒和感受态细胞
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.1.4 引物
3.1.5 培养基
3.1.6 溶液及缓冲液
3.1.7 主要分析软件
3.2 基本方法
3.2.1 细菌基因组DNA的提取
3.2.2 PCR扩增体系及程序
3.2.3 PCR产物切胶回收纯化
3.2.4 目的片段与载体连接
3.2.5 感受态细胞的制备(化学转化)
3.2.6 克隆质粒转入感受态细胞
3.2.7 限制性内切酶酶切反应
3.2.8 重组表达的载体pET32a(+)-CgiA2_Ce的构建
3.2.9 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce的表达和纯化
3.2.10 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce的酶学性质研究
3.2.11 重组酶酶促反应动力学参数的测定
3.2.12 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce降解方式及降解产物的研究
3.3 实验结果与分析
3.3.1 Cellulophaga sp.KL-A的全基因组序列分析及CgiA2_Ce序列比对分析
3.3.2 重组表达载体的体系构建
3.3.3 重组酶CgiA2_Ce的表达和分离纯化
3.3.4 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce酶学性质研究
3.3.5 重组酶CgiA2_Ce降解方式及降解产物的分析
3.4 小结与讨论
第四章 总结与展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Purification20and20characterization20of20novel20κ-carrageenase20from20marine20Tamlana20sp.HC4[J]. 孙飞雪,马悦欣,王颖,刘倩. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2010(06)
[2]系列ι-卡拉胶寡糖制备及其电喷雾串联质谱序列分析[J]. 杨波,于广利,郝翠,赵峡,嵇国利,胡艳南,王玉峰. 高等学校化学学报. 2010(02)
[3]不同分子量的角叉菜（Chondrus20ocellatus）λ-卡拉胶的抗氧化活性[J]. 周革非,邢荣莲,孙利芹,滕立,张全斌,徐祖洪. 海洋与湖沼. 2009(05)
[4]试验设计与优化[J]. 李波,徐泽民,李方,张新申. 中国皮革. 2003(01)
[5]寡糖及其衍生物的生物活性研究进展[J]. 狄维,王林,王升启. 中国药物化学杂志. 2002(04)
[6]多糖抗病毒作用研究进展Ⅱ.硫酸多糖抗病毒作用[J]. 王长云,管华诗. 生物工程进展. 2000(02)
[7]多糖抗病毒作用研究进展Ⅰ.多糖抗病毒作用[J]. 王长云,管华诗. 生物工程进展. 2000(01)
[8]一种用途广泛的海藻胶——卡拉胶[J]. 华汉峰. 水产科学. 1990(01)
博士论文
[1]海洋微生物多糖水解酶的基因克隆和高效表达[D]. 刘光磊.中国海洋大学 2012
硕士论文
[1]海洋交替假单胞菌QY203产κ-卡拉胶酶研究[D]. 李尚勇.中国海洋大学 2012
[2]响应面法优化重组枯草芽孢杆菌发酵生产青霉素G酰化酶[D]. 仇晶晶.浙江理工大学 2012
[3]响应面法优化茁霉多糖的发酵工艺[D]. 刘杰.吉林农业大学 2011
[4]澳大利亚厚皮海绵（Craniella20austrialiensis）共附生链霉菌DA11几丁质酶的研究[D]. 韩悦.上海交通大学 2008
本文编号：3175820
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
Contents
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 海洋多糖及多糖水解酶
1.2 卡拉胶结构、性质及应用
1.2.1 卡拉胶的结构组成与分类
1.2.2 卡拉胶的理化性质
1.2.3 卡拉胶的应用
1.3 卡拉胶寡糖
1.3.1 卡拉胶寡糖的制备方法
1.3.2 卡拉胶寡糖的分离纯化与寡糖结构的鉴定方法
1.3.3 卡拉胶寡糖的生物活性
1.4 卡拉胶酶
1.4.1 卡拉胶降解酶的研究进展
1.4.2 卡拉胶酶的应用
1.4.3 卡拉胶降解酶的应用前景展望
1.5 菌株发酵产酶的优化方法
1.5.1 非统计学方法
1.5.2 统计学方法
1.6 本论文的研究思路、目的与意义
第二章 ι-卡拉胶降解细菌的筛选鉴定及其产酶培养基的统计学优化
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 培养基
2.1.3 试剂
2.2 实验方法
2.2.1 卡拉胶降解细菌的筛选
2.2.2 产卡拉胶酶细菌的鉴定
2.2.3 卡拉胶酶活力的测定
2.2.4 卡拉胶酶培养基的统计学优化
2.3 实验结果
2.3.1 卡拉胶降解细菌KL-A的分离与鉴定
2.3.2 Cellulophaga sp.KL-A产卡拉胶酶培养基的统计学优化
2.4 小结与讨论
第三章 Cellulophaga sp.KL-A中ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce的克隆表达与酶学性质的研究
3.1 实验材料
3.1.1 菌株、质粒和感受态细胞
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.1.4 引物
3.1.5 培养基
3.1.6 溶液及缓冲液
3.1.7 主要分析软件
3.2 基本方法
3.2.1 细菌基因组DNA的提取
3.2.2 PCR扩增体系及程序
3.2.3 PCR产物切胶回收纯化
3.2.4 目的片段与载体连接
3.2.5 感受态细胞的制备(化学转化)
3.2.6 克隆质粒转入感受态细胞
3.2.7 限制性内切酶酶切反应
3.2.8 重组表达的载体pET32a(+)-CgiA2_Ce的构建
3.2.9 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce的表达和纯化
3.2.10 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce的酶学性质研究
3.2.11 重组酶酶促反应动力学参数的测定
3.2.12 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce降解方式及降解产物的研究
3.3 实验结果与分析
3.3.1 Cellulophaga sp.KL-A的全基因组序列分析及CgiA2_Ce序列比对分析
3.3.2 重组表达载体的体系构建
3.3.3 重组酶CgiA2_Ce的表达和分离纯化
3.3.4 重组ι-卡拉胶酶CgiA2_Ce酶学性质研究
3.3.5 重组酶CgiA2_Ce降解方式及降解产物的分析
3.4 小结与讨论
第四章 总结与展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Purification20and20characterization20of20novel20κ-carrageenase20from20marine20Tamlana20sp.HC4[J]. 孙飞雪,马悦欣,王颖,刘倩. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2010(06)
[2]系列ι-卡拉胶寡糖制备及其电喷雾串联质谱序列分析[J]. 杨波,于广利,郝翠,赵峡,嵇国利,胡艳南,王玉峰. 高等学校化学学报. 2010(02)
[3]不同分子量的角叉菜（Chondrus20ocellatus）λ-卡拉胶的抗氧化活性[J]. 周革非,邢荣莲,孙利芹,滕立,张全斌,徐祖洪. 海洋与湖沼. 2009(05)
[4]试验设计与优化[J]. 李波,徐泽民,李方,张新申. 中国皮革. 2003(01)
[5]寡糖及其衍生物的生物活性研究进展[J]. 狄维,王林,王升启. 中国药物化学杂志. 2002(04)
[6]多糖抗病毒作用研究进展Ⅱ.硫酸多糖抗病毒作用[J]. 王长云,管华诗. 生物工程进展. 2000(02)
[7]多糖抗病毒作用研究进展Ⅰ.多糖抗病毒作用[J]. 王长云,管华诗. 生物工程进展. 2000(01)
[8]一种用途广泛的海藻胶——卡拉胶[J]. 华汉峰. 水产科学. 1990(01)
博士论文
[1]海洋微生物多糖水解酶的基因克隆和高效表达[D]. 刘光磊.中国海洋大学 2012
硕士论文
[1]海洋交替假单胞菌QY203产κ-卡拉胶酶研究[D]. 李尚勇.中国海洋大学 2012
[2]响应面法优化重组枯草芽孢杆菌发酵生产青霉素G酰化酶[D]. 仇晶晶.浙江理工大学 2012
[3]响应面法优化茁霉多糖的发酵工艺[D]. 刘杰.吉林农业大学 2011
[4]澳大利亚厚皮海绵（Craniella20austrialiensis）共附生链霉菌DA11几丁质酶的研究[D]. 韩悦.上海交通大学 2008
本文编号：3175820
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