鲤疱疹病毒Ⅱ型RAA-LFD检测方法的建立

发布时间：2021-05-16 07:29

　　为了建立一种简便、快捷的现地检测鲤疱疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）的方法,本文联合重组酶介导扩增（RAA）和侧向流试纸条（LFD）技术,在优选的RAA下游引物和探针的5’端分别进行生物素（Biotin）和荧光（FAM）标记,通过对RAA反应时间和温度等条件的优化,建立了可用于现地检测CyHV-2的RAA-LFD方法。该检测方法在34℃～40℃恒温下反应10 min即可实现对CyHV-2目的基因片段的有效扩增,与其他常见水生动物疫病病原脱氧核糖核酸（DNA）无交叉反应,RAA扩增产物可直接用LFD肉眼观察,对标准质粒pUC57-Cy HV-2的最低检测限为8拷贝/μL,比普通聚合酶链式反应（PCR）灵敏度高出10倍。组内和组间重复性试验表明该方法有良好的重复性和稳定性,使用该方法对45份临床样本进行检测,与普通PCR结果符合率为95%。本文建立的RAA-LFD检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好、操作方便,可用于Cy HV-2的临床快速检测。 

【文章来源】：检验检疫学刊. 2020,30(03)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 前言
2 材料与方法
    2.1 主要实验材料
    2.2 重组质粒的构建与定量
    2.3 引物的设计与筛选
    2.4 RAA-LFD方法的优化及建立
    2.5 灵敏度实验
    2.6 特异性实验
3 结果
    3.1 引物筛选
    3.2 特异性试验
    3.3灵敏度试验
    3.4临床样品检测
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]鲤疱疹病毒2型研究进展[J]. 袁锐,陈静,刘训猛,吴亚锋,王晶晶,方苹.  水产学杂志. 2019(01)
[2]鸡传染性喉气管炎病毒RPA-LFD检测方法的建立[J]. 马国和,高冬生,王增,杨盼盼,杨霞,王新卫,边传周,赵军.  中国预防兽医学报. 2018(12)
[3]重组酶聚合酶扩增技术的研究进展及其应用[J]. 杜亚楠,赵笑,范小瑞,张琪,赵凯,许燕.  上海农业学报. 2018(06)
[4]用重组酶介导扩增技术快速扩增核酸[J]. 吕蓓,程海荣,严庆丰,黄震巨,沈桂芳,张志芳,李轶女,邓子新,林敏,程奇.  中国科学:生命科学. 2010(10)

硕士论文
[1]对虾WSSV和IHHNV病毒重组酶聚合酶扩增（RPA）快速检测方法的研究[D]. 夏小明.上海海洋大学 2015



本文编号：3189258