以C5-Ⅰ/Ⅱ为分子佐剂的维氏气单胞菌OmpAⅠ基因重组乳酸菌的构建及免疫效果分析
发布时间：2021-06-13 22:52
维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）是一种人鱼共患病原菌,给水产养殖业带来巨大损失的同时也给公共卫生带来了巨大威胁,鱼用疫苗因其条件限制,口服疫苗的开发具有重要意义。外膜蛋白A是一种粘附性蛋白,可加强机体杀菌效率,具有良好的免疫原性,具有作为DNA疫苗抗原基因的潜力,但因DNA疫苗蛋白表达量过低,无法刺激机体产生足够强的免疫应答,利用分子佐剂可提高其免疫效果,分子佐剂主要通过激活先天性免疫系统来增强抗原效果,包括干扰素、补体分子及白介素等,具有良好前景。本实验克隆了A.veronii TH0426株OmpAⅠ基因,鲤鱼补体C5-Ⅰ与C5-Ⅱ基因,通过SOE-PCR将OmpAⅠ分别与C5-Ⅰ与C5-Ⅱ基因重叠扩增。结果显示,均可扩增出1500 bp左右的融合基因,对融合基因进行原核表达后构建了锚定表达型（Lc-pPG-1-OmpAⅠ-C5-Ⅰ/Ⅱ）和分泌表达型（Lc-pPG-2-OmpAⅠ-C5-Ⅰ/Ⅱ）四种重组干酪乳杆菌。Western boltting结果显示,两种重组乳杆菌均可表达出58 kDa的融合蛋白,间接免疫荧光可在菌体表面检测到荧光信号;为分析重组乳杆菌的免疫...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鲤鱼肝脏组织总RNA提取M：DL2000DNAMarker1：肝脏RNA
EASY-Blunt-Zero-C5-Ⅰ 的构建及鉴定平板(Amp 抗性)上，置于液体 LB 培养基中培养过夜，切验证，经琼脂糖凝胶电泳检测显示，在 500 bp 左右处均出图 1-2 C5-I 目的片段 PCR 扩增M：DL2000 DNA Marker 1-2:目的片段 C5-ⅠFig.1-2 The PCR amplification product of C5-ⅠM: ：DL2000 DNA Marker 1-2: The PCR amplification product of C5I
nt-Zero-C5-Ⅰ 的构建及鉴定 抗性)上，置于液体 LB 培养琼脂糖凝胶电泳检测显示，在 图 1-2 C5-I 目的片段 PCR 扩M：DL2000 DNA Marker 1-2:目的Fig.1-2 The PCR amplification produ00 DNA Marker 1-2: The PCR amplifI
【参考文献】：
期刊论文
[1]一例鲤鱼维氏气单胞菌引起败血症病例报告[J]. 刘彬,张少阳,孙敬锋,吕爱军,胡秀彩. 科学养鱼. 2019(01)
[2]斑点叉尾鮰源致病性维氏气单胞菌的分离与生物学特性鉴定[J]. 田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红,徐丽,林汉卿,管国丹. 中国畜牧兽医. 2018(11)
[3]对水产养殖绿色发展的认识与思考[J]. 张振东. 中国水产. 2018(06)
[4]2017年河南省水产养殖主要致病菌药物敏感性监测分析[J]. 杨雪冰,陈颖. 河南水产. 2018(02)
[5]小分子多肽类佐剂最新研究进展[J]. 罗雅煊,马永平. 国际生物制品学杂志. 2018 (01)
[6]水产动物口服疫苗的研究进展[J]. 刘世旭,王庆,方珍珍,常藕琴,曾伟伟,黄志斌. 生物技术通报. 2018(06)
[7]鲶源维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏特性[J]. 陆梦莹,胡秀彩,吕爱军,孙敬锋,陈成勋,王晓梅,YEONG Yiksung,宋亚娇. 大连海洋大学学报. 2017(05)
[8]圆口铜鱼维氏气单孢菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 曹恒源,乔晔,陈小娟,潘磊,谢建军,董纯,安苗,王小明,杨少荣. 水生态学杂志. 2016(04)
[9]团头鲂致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 蔺凌云,潘晓艺,袁雪梅,姚嘉赟,徐洋,尹文林,许婷,郝贵杰,沈锦玉. 水产养殖. 2015(07)
[10]不同宿主来源的维氏气单胞菌外膜蛋白AⅡ基因的克隆及比较[J]. 康元环,杨滨僮,孟庆峰,陈龙,单晓枫,王惠,钱爱东. 中国兽医科学. 2014(03)
博士论文
[1]靶向树突状细胞通用型禽流感病毒重组乳酸菌的研究[D]. 杨文涛.吉林农业大学 2015
硕士论文
[1]表达维氏气单胞菌OmpAⅠ基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学评价[D]. 张冬星.吉林农业大学 2017
[2]禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白在乳酸乳球菌中的表达及其免疫保护作用与机理[D]. 张跃.东北农业大学 2016
[3]罗非鱼源维氏气单胞菌的分离鉴定及基因分型研究[D]. 李聪.海南大学 2015
[4]低氧条件单核来源树突状细胞高表达C5aR1的microRNA机制研究[D]. 宋丽君.第二军医大学 2014
[5]以鱼类过敏性毒素C5a为分子佐剂的鱼类DNA疫苗开发[D]. 徐金梅.华东理工大学 2014
[6]几种水产养殖动物病原快速检测方法的研究[D]. 丁文超.宁波大学 2009
本文编号：3228508
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鲤鱼肝脏组织总RNA提取M：DL2000DNAMarker1：肝脏RNA
EASY-Blunt-Zero-C5-Ⅰ 的构建及鉴定平板(Amp 抗性)上，置于液体 LB 培养基中培养过夜，切验证，经琼脂糖凝胶电泳检测显示，在 500 bp 左右处均出图 1-2 C5-I 目的片段 PCR 扩增M：DL2000 DNA Marker 1-2:目的片段 C5-ⅠFig.1-2 The PCR amplification product of C5-ⅠM: ：DL2000 DNA Marker 1-2: The PCR amplification product of C5I
nt-Zero-C5-Ⅰ 的构建及鉴定 抗性)上，置于液体 LB 培养琼脂糖凝胶电泳检测显示，在 图 1-2 C5-I 目的片段 PCR 扩M：DL2000 DNA Marker 1-2:目的Fig.1-2 The PCR amplification produ00 DNA Marker 1-2: The PCR amplifI
【参考文献】：
期刊论文
[1]一例鲤鱼维氏气单胞菌引起败血症病例报告[J]. 刘彬,张少阳,孙敬锋,吕爱军,胡秀彩. 科学养鱼. 2019(01)
[2]斑点叉尾鮰源致病性维氏气单胞菌的分离与生物学特性鉴定[J]. 田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红,徐丽,林汉卿,管国丹. 中国畜牧兽医. 2018(11)
[3]对水产养殖绿色发展的认识与思考[J]. 张振东. 中国水产. 2018(06)
[4]2017年河南省水产养殖主要致病菌药物敏感性监测分析[J]. 杨雪冰,陈颖. 河南水产. 2018(02)
[5]小分子多肽类佐剂最新研究进展[J]. 罗雅煊,马永平. 国际生物制品学杂志. 2018 (01)
[6]水产动物口服疫苗的研究进展[J]. 刘世旭,王庆,方珍珍,常藕琴,曾伟伟,黄志斌. 生物技术通报. 2018(06)
[7]鲶源维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏特性[J]. 陆梦莹,胡秀彩,吕爱军,孙敬锋,陈成勋,王晓梅,YEONG Yiksung,宋亚娇. 大连海洋大学学报. 2017(05)
[8]圆口铜鱼维氏气单孢菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 曹恒源,乔晔,陈小娟,潘磊,谢建军,董纯,安苗,王小明,杨少荣. 水生态学杂志. 2016(04)
[9]团头鲂致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 蔺凌云,潘晓艺,袁雪梅,姚嘉赟,徐洋,尹文林,许婷,郝贵杰,沈锦玉. 水产养殖. 2015(07)
[10]不同宿主来源的维氏气单胞菌外膜蛋白AⅡ基因的克隆及比较[J]. 康元环,杨滨僮,孟庆峰,陈龙,单晓枫,王惠,钱爱东. 中国兽医科学. 2014(03)
博士论文
[1]靶向树突状细胞通用型禽流感病毒重组乳酸菌的研究[D]. 杨文涛.吉林农业大学 2015
硕士论文
[1]表达维氏气单胞菌OmpAⅠ基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学评价[D]. 张冬星.吉林农业大学 2017
[2]禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白在乳酸乳球菌中的表达及其免疫保护作用与机理[D]. 张跃.东北农业大学 2016
[3]罗非鱼源维氏气单胞菌的分离鉴定及基因分型研究[D]. 李聪.海南大学 2015
[4]低氧条件单核来源树突状细胞高表达C5aR1的microRNA机制研究[D]. 宋丽君.第二军医大学 2014
[5]以鱼类过敏性毒素C5a为分子佐剂的鱼类DNA疫苗开发[D]. 徐金梅.华东理工大学 2014
[6]几种水产养殖动物病原快速检测方法的研究[D]. 丁文超.宁波大学 2009
本文编号：3228508
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