大黄鱼TLR和NF-κB途径中部分基因的克隆及免疫反应特征

发布时间：2021-06-14 07:57

　　病害问题已经严重制约了大黄鱼（Larimichthys crocea）养殖业的发展。大黄鱼病原复杂多变,因此深入了解其免疫识别及激活机制,对于大黄鱼病害防控、促进养殖业健康发展具有重要意义。本研究利用RT-PCR及RACE-PCR技术克隆了大黄鱼Toll样受体（TLR）家族中的TLR1、TLR2与TLR21,核因子NF-κB家族中的p65、p52、c-rel与IκB,以及白细胞介素家族的IL-11与IL-21基因的全长cDNA序列,分析了它们的分子结构;利用定量PCR技术或半定量PCR技术,研究了它们在大黄鱼不同组织的表达谱,解析了病原或病原相关分子模式（PAMPs）刺激后,大黄鱼脾脏、肝脏、头肾以及LCK细胞系中上述基因的转录表达变化;重组表达了TLR途径中关键接头分子MyD88,并采用GST-pulldown技术研究了与MyD88相互作用的蛋白;获得了IL-1β、IL-21的原核重组表达产物。结果如下:（1）TLR家族部分基因TLR1全长3216 bp,5’UTR为39 bp,3’UTR为768 bp,ORF为2409 bp,编码802个氨基酸,包含LRR、跨膜区和TIR结构域。T... 

【文章来源】：集美大学福建省

【文章页数】：129 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大黄鱼外部性特征

未对NF-κB下游基因的表达进行分析。以上说明鱼类中NF-κB信号通路可能存在其特有的调控方式。图1.2 推测的鱼类TLR信号通路，灰色底纹表示负调控因子1.2.3.5 炎症反应与干扰素反应哺乳动物的研究中，病原菌及病毒等病原刺激物激活TLR信号途径后，通过NF-κB、IRF3、IRF7等信号途径实现对干扰素和白介素等细胞因子的转录和表达，最终引发机体对入侵病原的免疫反应，这其中包括IL-1、IL-2、IL-6、IL-12等前炎症细胞因子的表达和分泌，促进机体合成和分泌大量急性期蛋白，促进B细胞的分化并加强免疫活性等；I 型IFN

0×Taq buffer 2μL，dNTP( 倍的 cDNA）1μL，Taq 酶 3 min；93℃ 30 s，56℃in。反应完成后将 PCR 产R2 全长 cDNA 克隆与、肾脏总 RNA 进行 1.5%S 与 18S rRNA 两条带清晰

【参考文献】：
期刊论文
[1]香鱼（Plecoglossus altivelis）NFκB抑制因子α基因PaIκBα克隆及表达[J]. 张文青,龚一富,章丽,李军,刘晓丹.  动物学研究. 2013(04)
[2]大黄鱼地理种群划分的探讨[J]. 张其永,洪万树,杨圣云,刘敏.  现代渔业信息. 2011(02)
[3]网箱养殖大黄鱼与天然大黄鱼营养成分的比较分析[J]. 段青源,钟惠英,斯列钢,麦康森.  浙江海洋学院学报(自然科学版). 2000(02)



本文编号：3229396