离体条件下铜对草鱼和黄颡鱼肝细胞脂代谢影响的研究
发布时间：2021-06-28 13:22
铜作为一种常见的重金属,同时又是鱼类生长的必需元素,它对鱼类的影响已经引起了广泛的关注。以往的研究主要集中在氧化应激、蓄积作用和组织学变化等方面,而关于铜对脂代谢的影响,尤其是采用离体细胞作为实验模型的研究还未见报道。本文以草鱼肝细胞系为研究对象,研究了铜对草鱼肝细胞脂代谢的影响以及硒的保护作用,同时以黄颡鱼为研究对象,建立了黄颡鱼离体肝细胞模型,研究了铜对黄颡鱼离体肝细胞脂代谢的影响以及可能存在的通路。主要研究结果如下：1.以草鱼肝细胞系为模型,选取3个铜浓度（0、10μM、100μM）和3个孵育时间（24h、48h、96h）来研究离体条件下铜对草鱼肝细胞脂代谢的影响。研究结果表明,离体条件下铜对草鱼肝细胞脂代谢的影响呈现剂量和时间依赖关系：孵育24h时,铜降低了几种脂肪合成和脂肪分解相关的基因表达水平；孵育48h时,铜抑制了脂肪合成的过程,但上调了脂肪分解；孵育96h时,与对照组相比,铜继续上调脂肪分解作用,对脂肪合成作用没有显著影响,但引起脂肪消耗。尽管孵育96h脂肪合成作用有可能被上调,但这不足以补偿脂肪的消耗。本文首次研究了离体条件下铜对鱼类肝细胞脂代谢的剂量和时间依赖关系,...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
1 鱼类铜的营养与毒性研究进展
2 鱼类脂代谢研究进展
3 鱼类细胞培养研究进展
3.1 鱼类细胞培养现状
3.2 鱼类细胞培养的方法
3.3 鱼类细胞培养的应用
4 本研究的目的与意义
第二章 离体条件下铜对草鱼肝细胞脂代谢影响的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂
2.2 细胞培养和孵育实验
2.3 细胞成活率检测
2.4 生化分析
2.5 总RNA提取和荧光定量PCR
2.6 数据分析
3 实验结果与分析
3.1 铜对细胞的毒性分析
3.2 酶活性和甘油三酯含量分析
3.3 脂代谢相关的基因表达分析
4 讨论
4.1 铜对细胞的毒性分析
4.2 酶活性和甘油三酯含量分析
4.3 脂代谢相关的基因表达分析
5 小结
第三章 硒对体外铜诱导草鱼肝细胞脂代谢改变的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 试剂
2.2 细胞培养和孵育实验
2.3 细胞成活率检测
2.4 乳酸脱氢酶释放率的测定
2.5 生化分析
2.6 总RNA提取和荧光定量PCR
2.7 数据分析
3 实验结果与分析
3.1 细胞成活率和LDH释放率分析
3.2 酶活性和甘油三酯含量分析
3.3 脂代谢相关的基因表达分析
4 讨论
4.1 细胞成活率和LDH释放率分析
4.2 酶活性和甘油三酯含量分析
4.3 脂代谢相关的基因表达分析
5 小结
第四章 铜对黄颡鱼离体肝细胞脂代谢影响的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 试剂
2.2 黄颡鱼的准备
2.3 黄颡鱼原代肝细胞模型的建立
2.3.1 组织块法
2.3.2 酶消化法
2.3.3 细胞计数
2.3.4 细胞活力检测
2.3.5 细胞培养
2.4 细胞成活率检测
2.5 实验分组设计
2.6 生化分析
2.7 总RNA提取和荧光定量PCR
2.8 数据分析
3 实验结果与分析
3.1 黄颡鱼原代肝细胞培养方法的建立
3.2 铜的细胞毒性分析
3.3 酶活性和甘油三酯含量分析
3.4 脂代谢相关的基因表达分析
3.5 PPARα阻断剂GW6471对铜诱导基因表达和TG含量变化的抑制效应
4 讨论
4.1 黄颡鱼原代肝细胞培养方法的建立
4.2 铜对细胞的毒性分析
4.3 酶活性和甘油三酯含量分析
4.4 肝细胞脂代谢相关的基因表达
4.5 PPARα阻断剂GW6471对铜诱导基因表达和TG含量变化的抑制效应
5 小结
第五章 结语
1 结论
2 创新点
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]饲料中添加氯化胆碱对草鱼成鱼生长、脂肪沉积和脂肪代谢酶活性的影响[J]. 朱瑞俊,李小勤,谢骏,冷向军,田娟,史少奕. 中国水产科学. 2010(03)
[2]镁对草鱼生长和脂肪代谢的影响[J]. 汪福保,罗莉,李云,林仕梅,李芹,陈时,王亚哥,文华. 动物营养学报. 2010(01)
[3]稀有鮈鲫鳍细胞系的建立及其作为测定重金属毒性模型的探讨[J]. 谭凤霞,杨方星,王卫民,王敏. 水生生物学报. 2009(04)
[4]草鱼对葡萄糖的代谢研究[J]. 刘永坚,陈竹,刘栋辉,田丽霞,钟创光. 中山大学学报(自然科学版). 1999(S1)
[5]饲料蛋白质水平影响草鱼肝胰脏脂肪酸组成[J]. 曹俊明,关国强,郑文晖,刘永坚,谭炳炎. 中山大学学报(自然科学版). 1997(05)
[6]维生素B6对草鱼脂肪代谢的影响[J]. 黄世蕉,沈竑. 水生生物学报. 1992(04)
[7]NUTRITIONAL LIPID LIVER DISEASE OF GRASS CARP CTENOPHARYNGODON IDULLUS（C.et V.）[J]. 林鼎,毛永庆,蔡发盛. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 1990(04)
[8]草鱼种无机盐需要量之研究[J]. 黄耀桐,刘永坚. 水生生物学报. 1989(02)
本文编号：3254399
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
1 鱼类铜的营养与毒性研究进展
2 鱼类脂代谢研究进展
3 鱼类细胞培养研究进展
3.1 鱼类细胞培养现状
3.2 鱼类细胞培养的方法
3.3 鱼类细胞培养的应用
4 本研究的目的与意义
第二章 离体条件下铜对草鱼肝细胞脂代谢影响的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂
2.2 细胞培养和孵育实验
2.3 细胞成活率检测
2.4 生化分析
2.5 总RNA提取和荧光定量PCR
2.6 数据分析
3 实验结果与分析
3.1 铜对细胞的毒性分析
3.2 酶活性和甘油三酯含量分析
3.3 脂代谢相关的基因表达分析
4 讨论
4.1 铜对细胞的毒性分析
4.2 酶活性和甘油三酯含量分析
4.3 脂代谢相关的基因表达分析
5 小结
第三章 硒对体外铜诱导草鱼肝细胞脂代谢改变的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 试剂
2.2 细胞培养和孵育实验
2.3 细胞成活率检测
2.4 乳酸脱氢酶释放率的测定
2.5 生化分析
2.6 总RNA提取和荧光定量PCR
2.7 数据分析
3 实验结果与分析
3.1 细胞成活率和LDH释放率分析
3.2 酶活性和甘油三酯含量分析
3.3 脂代谢相关的基因表达分析
4 讨论
4.1 细胞成活率和LDH释放率分析
4.2 酶活性和甘油三酯含量分析
4.3 脂代谢相关的基因表达分析
5 小结
第四章 铜对黄颡鱼离体肝细胞脂代谢影响的研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 试剂
2.2 黄颡鱼的准备
2.3 黄颡鱼原代肝细胞模型的建立
2.3.1 组织块法
2.3.2 酶消化法
2.3.3 细胞计数
2.3.4 细胞活力检测
2.3.5 细胞培养
2.4 细胞成活率检测
2.5 实验分组设计
2.6 生化分析
2.7 总RNA提取和荧光定量PCR
2.8 数据分析
3 实验结果与分析
3.1 黄颡鱼原代肝细胞培养方法的建立
3.2 铜的细胞毒性分析
3.3 酶活性和甘油三酯含量分析
3.4 脂代谢相关的基因表达分析
3.5 PPARα阻断剂GW6471对铜诱导基因表达和TG含量变化的抑制效应
4 讨论
4.1 黄颡鱼原代肝细胞培养方法的建立
4.2 铜对细胞的毒性分析
4.3 酶活性和甘油三酯含量分析
4.4 肝细胞脂代谢相关的基因表达
4.5 PPARα阻断剂GW6471对铜诱导基因表达和TG含量变化的抑制效应
5 小结
第五章 结语
1 结论
2 创新点
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]饲料中添加氯化胆碱对草鱼成鱼生长、脂肪沉积和脂肪代谢酶活性的影响[J]. 朱瑞俊,李小勤,谢骏,冷向军,田娟,史少奕. 中国水产科学. 2010(03)
[2]镁对草鱼生长和脂肪代谢的影响[J]. 汪福保,罗莉,李云,林仕梅,李芹,陈时,王亚哥,文华. 动物营养学报. 2010(01)
[3]稀有鮈鲫鳍细胞系的建立及其作为测定重金属毒性模型的探讨[J]. 谭凤霞,杨方星,王卫民,王敏. 水生生物学报. 2009(04)
[4]草鱼对葡萄糖的代谢研究[J]. 刘永坚,陈竹,刘栋辉,田丽霞,钟创光. 中山大学学报(自然科学版). 1999(S1)
[5]饲料蛋白质水平影响草鱼肝胰脏脂肪酸组成[J]. 曹俊明,关国强,郑文晖,刘永坚,谭炳炎. 中山大学学报(自然科学版). 1997(05)
[6]维生素B6对草鱼脂肪代谢的影响[J]. 黄世蕉,沈竑. 水生生物学报. 1992(04)
[7]NUTRITIONAL LIPID LIVER DISEASE OF GRASS CARP CTENOPHARYNGODON IDULLUS（C.et V.）[J]. 林鼎,毛永庆,蔡发盛. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 1990(04)
[8]草鱼种无机盐需要量之研究[J]. 黄耀桐,刘永坚. 水生生物学报. 1989(02)
本文编号：3254399
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