克氏原螯虾抗菌肽crustin5基因克隆及其表达分析
发布时间：2021-07-02 09:00
【目的】深入了解克氏原螯虾先天免疫过程中抗菌肽的作用与功能,丰富先天免疫中抗菌肽的理论知识,为克氏原螯虾的病害机理研究及防控措施制定提供参考依据。【方法】从克氏原螯虾肝胰腺组织提取总RNA,利用PCR扩增crustin5基因全长cDNA序列,运用DNAMAN 6.0、ProtParam、ProtScale、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对其进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测crustin5基因在克氏原螯虾各组织中的表达情况。【结果】克氏原螯虾crustin5基因cDNA序列全长954 bp,开放阅读框（ORF）为429 bp,共编码167个氨基酸残基,其编码蛋白相对分子量为16485.42 Da,理论等电点为8.58,为不稳定的疏水性蛋白。克氏原螯虾crustin5蛋白具有典型的crustins家族结构特征,包括N端的信号肽,C端的WAP结构域,以及二者间的半胱氨酸富集区;其二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链分别占20.36%、7.78%、58.08%和13.77%。crustin5基因在克氏原螯虾血细胞、肝胰腺、鳃、肠道、肌肉和淋巴器官等6种组...
【文章来源】：南方农业学报. 2020,51(04)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
克氏原螯虾crustin5基因的PCR扩增电泳结果
重组质粒pET-28a-crustin5转化BL21(DE3）感受态细胞后，筛选出阳性克隆送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，结果表明，克氏原螯虾crustin5基因cDNA序列全长954 bp，开放阅读框（ORF）为429 bp，共编码167个氨基酸残基（图3）。crustin5蛋白具有典型的crustins家族结构特征，包括N端的信号肽（图中红色字体部分），C端的WAP结构域（灰色区域部分），以及二者间的半胱氨酸富集区。2.4 crustin5氨基酸序列同源性分析结果
根据NCBI中的BLAST对比分析结果，挑选出与克氏原螯虾物种相近、基因序列同源性较高的crustin氨基酸序列，并利用DNAMAN 6.0进行多序列对比分析，结果（图4）发现，克氏原螯虾crustin5氨基酸序列与斑节对虾Pm-crustin5氨基酸序列、小褐美对虾Fs-crustin氨基酸序列、圣保罗对虾Fp-crustin氨基酸序列、日本对虾Pj-crustin2氨基酸序列、日本对虾Pj-crustin4氨基酸序列和中国对虾Fc-crustin氨基酸序列的同源性分别为28.65%、27.27%、26.86%、25.71%、23.46%和21.39%，与远海梭子蟹Pp-crustin氨基酸序列、锯缘青蟹Ss-crustin氨基酸序列、紫螯青蟹St-crustin氨基酸序列和中华绒螯蟹Es-crustin1氨基酸序列的同源性分别为19.41%、18.24%、17.65%和17.34%。2.5 系统发育进化树分析结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]拟穴青蟹抗菌肽Crustin新变体的表达特性与抗菌功能[J]. 王晓飞,彭会,陈芳奕,张财亮,黄文树. 厦门大学学报(自然科学版). 2019(03)
[2]凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达[J]. 马春霞,彭金霞,何苹萍,雷爱莹,马宁,王瑞,黎铭. 南方农业学报. 2017(07)
[3]墨吉明对虾（Fenneropenaeus merguiensis）CrustinⅡ型基因的克隆与原核重组表达[J]. 刘燕,张展雄,李晓筠,梁华芳,陈兆明. 基因组学与应用生物学. 2018(01)
[4]C1q肿瘤坏死因子相关蛋白4研究进展[J]. 高洁,顾刚,陆林,王晓群. 国际心血管病杂志. 2016(02)
[5]先天免疫系统中肽聚糖识别蛋白研究进展[J]. 徐鑫,刘忠渊. 动物医学进展. 2014(10)
[6]虾类免疫因子的研究进展[J]. 郭慧,冼健安,毕建柱,叶超霞,王安利. 饲料工业. 2013(22)
博士论文
[1]虾蟹类免疫相关基因的研究[D]. 于爱清.华东师范大学 2014
[2]十足目甲壳动物C型凝集素功能研究[D]. 王显伟.山东大学 2012
[3]甲壳动物抗菌肽及信号转导和转录激活因子（STAT）的基因克隆与功能分析[D]. 孙晨.山东大学 2011
[4]中国明对虾先天免疫的模式识别与效应分子[D]. 杜欣军.山东大学 2007
[5]中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）抗菌因子及模式识别蛋白的研究[D]. 柳峰松.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2005
硕士论文
[1]克氏原螯虾三个免疫相关基因Caspase-3C、Lectin和LGBP的功能研究[D]. 韩珂珂.南京师范大学 2019
[2]拟穴青蟹甲壳肽（Crustin）的免疫功能研究[D]. 王月.河南师范大学 2018
[3]三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）抗菌肽crustin的基因克隆和表达分析[D]. 宋呈文.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2013
[4]重组家蚕抗菌肽CM4抗真菌作用机理的研究[D]. 吴希.南京师范大学 2006
本文编号：3260165
【文章来源】：南方农业学报. 2020,51(04)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
克氏原螯虾crustin5基因的PCR扩增电泳结果
重组质粒pET-28a-crustin5转化BL21(DE3）感受态细胞后，筛选出阳性克隆送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，结果表明，克氏原螯虾crustin5基因cDNA序列全长954 bp，开放阅读框（ORF）为429 bp，共编码167个氨基酸残基（图3）。crustin5蛋白具有典型的crustins家族结构特征，包括N端的信号肽（图中红色字体部分），C端的WAP结构域（灰色区域部分），以及二者间的半胱氨酸富集区。2.4 crustin5氨基酸序列同源性分析结果
根据NCBI中的BLAST对比分析结果，挑选出与克氏原螯虾物种相近、基因序列同源性较高的crustin氨基酸序列，并利用DNAMAN 6.0进行多序列对比分析，结果（图4）发现，克氏原螯虾crustin5氨基酸序列与斑节对虾Pm-crustin5氨基酸序列、小褐美对虾Fs-crustin氨基酸序列、圣保罗对虾Fp-crustin氨基酸序列、日本对虾Pj-crustin2氨基酸序列、日本对虾Pj-crustin4氨基酸序列和中国对虾Fc-crustin氨基酸序列的同源性分别为28.65%、27.27%、26.86%、25.71%、23.46%和21.39%，与远海梭子蟹Pp-crustin氨基酸序列、锯缘青蟹Ss-crustin氨基酸序列、紫螯青蟹St-crustin氨基酸序列和中华绒螯蟹Es-crustin1氨基酸序列的同源性分别为19.41%、18.24%、17.65%和17.34%。2.5 系统发育进化树分析结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]拟穴青蟹抗菌肽Crustin新变体的表达特性与抗菌功能[J]. 王晓飞,彭会,陈芳奕,张财亮,黄文树. 厦门大学学报(自然科学版). 2019(03)
[2]凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达[J]. 马春霞,彭金霞,何苹萍,雷爱莹,马宁,王瑞,黎铭. 南方农业学报. 2017(07)
[3]墨吉明对虾（Fenneropenaeus merguiensis）CrustinⅡ型基因的克隆与原核重组表达[J]. 刘燕,张展雄,李晓筠,梁华芳,陈兆明. 基因组学与应用生物学. 2018(01)
[4]C1q肿瘤坏死因子相关蛋白4研究进展[J]. 高洁,顾刚,陆林,王晓群. 国际心血管病杂志. 2016(02)
[5]先天免疫系统中肽聚糖识别蛋白研究进展[J]. 徐鑫,刘忠渊. 动物医学进展. 2014(10)
[6]虾类免疫因子的研究进展[J]. 郭慧,冼健安,毕建柱,叶超霞,王安利. 饲料工业. 2013(22)
博士论文
[1]虾蟹类免疫相关基因的研究[D]. 于爱清.华东师范大学 2014
[2]十足目甲壳动物C型凝集素功能研究[D]. 王显伟.山东大学 2012
[3]甲壳动物抗菌肽及信号转导和转录激活因子（STAT）的基因克隆与功能分析[D]. 孙晨.山东大学 2011
[4]中国明对虾先天免疫的模式识别与效应分子[D]. 杜欣军.山东大学 2007
[5]中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）抗菌因子及模式识别蛋白的研究[D]. 柳峰松.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2005
硕士论文
[1]克氏原螯虾三个免疫相关基因Caspase-3C、Lectin和LGBP的功能研究[D]. 韩珂珂.南京师范大学 2019
[2]拟穴青蟹甲壳肽（Crustin）的免疫功能研究[D]. 王月.河南师范大学 2018
[3]三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）抗菌肽crustin的基因克隆和表达分析[D]. 宋呈文.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2013
[4]重组家蚕抗菌肽CM4抗真菌作用机理的研究[D]. 吴希.南京师范大学 2006
本文编号：3260165
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