SVCV N蛋白单克隆抗体的制备与Viperin及其剪接异构体抗SVCV功能研究
发布时间：2021-07-05 22:26
鲤春病毒血症病毒（Spring Viremia of Carp Virus,SVCV）为单股负链RNA病毒,可引起鲤发生大规模死亡,给渔业带来巨大经济损失。SVCV基因组编码5种结构蛋白,即核蛋白N（Nueleoprotein）、磷酸化蛋白P（Phosphoprotein）、基质蛋白M（Marxprotein）、糖蛋白G（Glycoprotein）和RNA聚合酶L（Polymerase）。其中核蛋白N是组成核衣壳结构的关键蛋白,且表达量最大,在病毒的基因转录及调控中具有重要作用。哺乳动物Viperin具有抗病毒功能,鱼类Viperin在抗病毒过程中也具有重要作用,但其潜在机制尚不清晰。本实验制备了SVCV核蛋白N的单克隆抗体,为探究SVCV N蛋白的功能及病毒检测提供了有效工具;同时围绕SVCV对Viperin及其剪接异构体有何影响,Viperin及其剪接异构体如何影响SVCV感染展开深入研究,以期从天然免疫的角度揭示Viperin的选择性剪接与SVCV的关系,为解析SVCV的免疫与致病机制、防控产品的开发提供科学依据。主要内容如下:1.SVCV N单克隆抗体的制备以含有SVCV N的...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SVCVN基因PCR扩增产物M:DL2000;1,2:SVCVN基因PCR扩增产物FigM:DL2000Marker;PCRproductofSVCVN,2:PCRamplificationproductofSVCVN，.二，1
SVCV-N-KG 融合蛋白的可溶性分析构建成功的质粒 SVCV-N-KG 转化大肠杆菌表达菌株 BL21。菌液活IPTG，37℃诱导 6h。5000r/min 离心 10min，收集菌液。高压破碎集上清、沉淀进行 SDS-PAGE 检测。结果表明该融合蛋白大小约为 7预期一致；融合蛋白在上清及包涵体中均有存在，且主要以包涵体形M 1 2 3 475KDa25KDa
.1.3 SVCV-N-KG 融合蛋白的可溶性分析将构建成功的质粒 SVCV-N-KG 转化大肠杆菌表达菌株 BL21。菌液活化后，加 1‰IPTG，37℃诱导 6h。5000r/min 离心 10min，收集菌液。高压破碎后进行离，收集上清、沉淀进行 SDS-PAGE 检测。结果表明该融合蛋白大小约为 70KDa(图)，与预期一致；融合蛋白在上清及包涵体中均有存在，且主要以包涵体形式表达。图 2 重组质粒 PCR 鉴定M：DL2000；1~6：重组质粒 PCR 产物；7：阴性对照Fig. 2 PCR identification of recombinant plasmidM: DL2000 Marker; 1~6: PCR amplification product of recombinantplasmid;7: negative control1000bpM 1 2 3 4
【参考文献】：
期刊论文
[1]黑龙江地区鲤春病毒血症病毒的分离与基因型分析[J]. 纪锋,赵景壮,刘淼,贺文斌,尹家胜,卢彤岩,任广明,徐黎明. 中国水产科学. 2017(05)
[2]鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测技术的建立[J]. 刘瑶,尹伟力,张四化,岳志芹,孙涛. 水产科学. 2017(04)
[3]北京地区2007～2015年鲤春病毒血症病毒感染流行病学研究[J]. 王姝,徐立蒲,王小亮,曹欢,王静波,张文,景宏丽. 病毒学报. 2017(04)
[4]鲤春病毒血症病毒核酸适配体的筛选及分析[J]. 于力,王津津,卢奕良,郑晓聪,贾鹏,何俊强,史秀杰,刘莹,刘荭. 中国动物检疫. 2017(02)
[5]草鱼（Ctenopharyngodon idellus）性腺细胞系（GCO）特性和对鲤春病毒的敏感性[J]. 王津津,刘莹,于力,贾鹏,陈兵,史秀杰,郑晓聪,兰文升,何俊强,刘荭. 渔业科学进展. 2016(06)
[6]Pre-mRNA选择性剪接的调控及选择性剪接数据库[J]. 邢永强,刘国庆,蔡禄. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(01)
[7]流式细胞仪在快速测定鲤春病毒血症病毒滴度中的应用[J]. 王津津,贾鹏,史秀杰,于力,阮周曦,郑晓聪,何俊强,兰文升,宋思静,刘荭. 中国动物检疫. 2015(09)
[8]鲤春病毒血症病毒SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 安伟,肖雨,张明辉,高晓华,何正侃. 中国预防兽医学报. 2015(09)
[9]数字RT-PCR检测鲤春病毒血症的方法建立与应用[J]. 吴斌,申翠翠,张晨曦,胡德聪,肇慧君,张琳. 中国动物检疫. 2015(07)
[10]鲤春病毒血症监测方法的应用研究[J]. 王姝,曹欢,王小亮,王静波,徐立蒲. 检验检疫学刊. 2014(06)
本文编号：3266942
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SVCVN基因PCR扩增产物M:DL2000;1,2:SVCVN基因PCR扩增产物FigM:DL2000Marker;PCRproductofSVCVN,2:PCRamplificationproductofSVCVN，.二，1
SVCV-N-KG 融合蛋白的可溶性分析构建成功的质粒 SVCV-N-KG 转化大肠杆菌表达菌株 BL21。菌液活IPTG，37℃诱导 6h。5000r/min 离心 10min，收集菌液。高压破碎集上清、沉淀进行 SDS-PAGE 检测。结果表明该融合蛋白大小约为 7预期一致；融合蛋白在上清及包涵体中均有存在，且主要以包涵体形M 1 2 3 475KDa25KDa
.1.3 SVCV-N-KG 融合蛋白的可溶性分析将构建成功的质粒 SVCV-N-KG 转化大肠杆菌表达菌株 BL21。菌液活化后，加 1‰IPTG，37℃诱导 6h。5000r/min 离心 10min，收集菌液。高压破碎后进行离，收集上清、沉淀进行 SDS-PAGE 检测。结果表明该融合蛋白大小约为 70KDa(图)，与预期一致；融合蛋白在上清及包涵体中均有存在，且主要以包涵体形式表达。图 2 重组质粒 PCR 鉴定M：DL2000；1~6：重组质粒 PCR 产物；7：阴性对照Fig. 2 PCR identification of recombinant plasmidM: DL2000 Marker; 1~6: PCR amplification product of recombinantplasmid;7: negative control1000bpM 1 2 3 4
【参考文献】：
期刊论文
[1]黑龙江地区鲤春病毒血症病毒的分离与基因型分析[J]. 纪锋,赵景壮,刘淼,贺文斌,尹家胜,卢彤岩,任广明,徐黎明. 中国水产科学. 2017(05)
[2]鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测技术的建立[J]. 刘瑶,尹伟力,张四化,岳志芹,孙涛. 水产科学. 2017(04)
[3]北京地区2007～2015年鲤春病毒血症病毒感染流行病学研究[J]. 王姝,徐立蒲,王小亮,曹欢,王静波,张文,景宏丽. 病毒学报. 2017(04)
[4]鲤春病毒血症病毒核酸适配体的筛选及分析[J]. 于力,王津津,卢奕良,郑晓聪,贾鹏,何俊强,史秀杰,刘莹,刘荭. 中国动物检疫. 2017(02)
[5]草鱼（Ctenopharyngodon idellus）性腺细胞系（GCO）特性和对鲤春病毒的敏感性[J]. 王津津,刘莹,于力,贾鹏,陈兵,史秀杰,郑晓聪,兰文升,何俊强,刘荭. 渔业科学进展. 2016(06)
[6]Pre-mRNA选择性剪接的调控及选择性剪接数据库[J]. 邢永强,刘国庆,蔡禄. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(01)
[7]流式细胞仪在快速测定鲤春病毒血症病毒滴度中的应用[J]. 王津津,贾鹏,史秀杰,于力,阮周曦,郑晓聪,何俊强,兰文升,宋思静,刘荭. 中国动物检疫. 2015(09)
[8]鲤春病毒血症病毒SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 安伟,肖雨,张明辉,高晓华,何正侃. 中国预防兽医学报. 2015(09)
[9]数字RT-PCR检测鲤春病毒血症的方法建立与应用[J]. 吴斌,申翠翠,张晨曦,胡德聪,肇慧君,张琳. 中国动物检疫. 2015(07)
[10]鲤春病毒血症监测方法的应用研究[J]. 王姝,曹欢,王小亮,王静波,徐立蒲. 检验检疫学刊. 2014(06)
本文编号：3266942
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