中间球海胆卵膜与受精膜去除方法及染色体核型分析
发布时间：2021-07-06 14:57
去除卵膜及受精膜是成功制备棘皮动物染色体的关键步骤。为找到高效去除海胆卵膜与受精膜的方法,使用三氮唑（2 g/L）、盐酸海水溶液（pH 4.75）、二硫苏糖醇(3×10–3 mol/L)和对氨基苯甲酸(3×10–3 mol/L)等4种化学试剂分别对中间球海胆（Strongylocentrotus intermedius）卵子及各时期胚胎进行处理,比较了不同试剂、处理时间或处理时期的去膜率、去膜后受精率和胚胎畸形率等指标的差异;利用常规空气干燥法对经去膜处理的囊胚期胚胎制备染色体,并进行核型分析。结果表明,三氮唑、盐酸海水溶液、二硫苏糖醇和对氨基苯甲酸等4种试剂对中间球海胆的卵膜和受精膜均有去除效果,其中2g/L三氮唑处理未受精卵30min的去膜率为85.50%,去膜后受精率为97.25%,畸形率为1.75%,去膜效果优于其余处理组。利用经该方法去膜后的早期囊胚进行染色体制备效果较好,获得了61个分散良好、形态完整的染色体中期分裂相。核型分析表明,中间球海胆的二倍体染色体数为2n=42,核型公式为:2n=20m+20sm+2st, NF=84,...
【文章来源】：中国水产科学. 2020,27(09)北大核心CSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
不同试剂及处理时间处理的中间球海胆未受精卵的去膜率上标不同大写字母表示同一处理时间内,不同试剂间去膜率差异显著(P<0.05);上标不同小写字母表示同一试剂处理组不同处理时间去膜率差异显著(P<0.05).
不同试剂和不同处理时间处理未受精卵后的胚胎畸形率见图3。使用三氮唑、盐酸海水溶液、二硫苏糖醇和对氨基苯甲酸处理未受精卵均使其胚胎畸形率显著升高(P<0.05);在10 min、20 min和30 min 3个处理时间组,三氮唑组畸形率分别为(2.75?0.96)%、(5.50?1.92)%和(1.75?0.96)%,均为4种试剂中最低,且均显著低于盐酸溶液和二硫苏糖醇组(P<0.05)。三氮唑处理20 min组畸形率显著高于对照组(P<0.05),处理10 min和30 min组与对照组间无显著差异(P>0.05)。综合上述结果得出,对于处理未受精卵来说,使用2 g/L的三氮唑处理30 min的去膜效果最好,去膜率为85.50%,去膜后受精率为97.25%,畸形率为1.75%。
4种试剂处理下,不同发育时期胚胎的去膜率见图4。除在受精后60 min和16细胞期外,其余各期使用三氮唑的去膜率均为最高,而在各发育时期,使用盐酸溶液处理胚胎去膜率均为最低。使用三氮唑处理受精后10 min后的胚胎去膜率最高,达到(25.75?1.71)%,显著高于其余各发育时期(P<0.05)。使用盐酸溶液处理16细胞期胚胎的去膜率最高,为(6.25?3.50)%,显著高于其余各发育时期(P<0.05);使用二硫苏糖醇处理16细胞期胚胎的去膜率最高,为(16.25?1.00)%,显著高于其余各发育时期(P<0.05);使用对氨基苯甲酸处理受精后60 min胚胎去膜率最高,为(14.25?2.50)%,但仅显著高于受精后10 min期胚胎、受精后20 min期胚胎、4细胞期胚胎和16细胞期胚胎(P<0.05)。4种试剂处理下,不同发育时期胚胎的畸形率见图5。各胚胎发育期使用三氮唑处理后的畸形率均为最低,使用对氨基苯甲酸处理从受精后10 min至2细胞期等各期胚胎的畸形率均为最高。使用三氮唑处理16细胞期胚胎畸形率最低,仅为(2.00?0.82)%,显著低于受精后20 min期、受精后30 min期和受精后60 min期(P<0.05);使用盐酸溶液处理受精后10 min期胚胎的畸形率最低,为(20.00?8.17)%,显著低于受精后40 min、受精后50 min、受精后60 min、2细胞、4细胞和16细胞期胚胎(P<0.05);使用二硫苏糖醇处理8细胞期胚胎的畸形率最低,为(11.50?2.38)%,显著低于其他各胚胎发育期(P<0.05);使用对氨基苯甲酸处理16细胞期胚胎的畸形率最低,为(1.75?1.26)%,显著低于除8细胞期外的其余各胚胎发育期(P<0.05)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中间球海胆与马粪海胆杂交家系早期生长比较和亲本配合力估计[J]. 张伟杰,韩奋杰,陈顺,刘奎,周秘,王宝锋,王中,刘明泰,湛垚垚,经晨晨,常亚青. 中国水产科学. 2017(05)
[2]牙鲆雌核发育研究进展[J]. 刘海金,侯吉伦,刘奕. 中国水产科学. 2017(04)
[3]太平洋鳕染色体核型及银染分析[J]. 范瑞,姜志强,李雅娟,高小强,钱聪,高敏. 水生生物学报. 2014(01)
[4]马粪海胆的染色体制备及组型分析[J]. 常亚青,曹洁,张彦娇,丁君. 大连水产学院学报. 2006(03)
[5]人工雌核发育诱导太平洋牡蛎四倍体的研究[J]. 李雅娟,李霞,毛连菊,丁君. 东北农业大学学报. 2006(03)
[6]光棘球海胆的主要卵黄蛋白cDNA序列分析[J]. 周遵春,包振民,董颖,赫崇波,韩家波,王丽梅. 中国水产科学. 2006(03)
[7]棘皮动物染色体的研究进展[J]. 周遵春,董颖,赫崇波,宋伦. 水产科学. 2005(12)
[8]中间球海胆雌核发育单倍体胚胎的初步研究[J]. 丁君,常亚青,曹学彬,张玉勇. 大连水产学院学报. 2004(01)
[9]紫外线照射对光棘球海胆精子遗传失活和授精能力的影响[J]. 高悦勉,孙祥山,刘馨. 水产科学. 2003(06)
[10]虾夷马粪海胆体腔细胞的类型及功能[J]. 李霞,王斌,刘静,孙健. 中国水产科学. 2003(05)
硕士论文
[1]太平洋牡蛎四倍体育种研究[D]. 李慷均.中国海洋大学 2004
本文编号：3268456
【文章来源】：中国水产科学. 2020,27(09)北大核心CSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
不同试剂及处理时间处理的中间球海胆未受精卵的去膜率上标不同大写字母表示同一处理时间内,不同试剂间去膜率差异显著(P<0.05);上标不同小写字母表示同一试剂处理组不同处理时间去膜率差异显著(P<0.05).
不同试剂和不同处理时间处理未受精卵后的胚胎畸形率见图3。使用三氮唑、盐酸海水溶液、二硫苏糖醇和对氨基苯甲酸处理未受精卵均使其胚胎畸形率显著升高(P<0.05);在10 min、20 min和30 min 3个处理时间组,三氮唑组畸形率分别为(2.75?0.96)%、(5.50?1.92)%和(1.75?0.96)%,均为4种试剂中最低,且均显著低于盐酸溶液和二硫苏糖醇组(P<0.05)。三氮唑处理20 min组畸形率显著高于对照组(P<0.05),处理10 min和30 min组与对照组间无显著差异(P>0.05)。综合上述结果得出,对于处理未受精卵来说,使用2 g/L的三氮唑处理30 min的去膜效果最好,去膜率为85.50%,去膜后受精率为97.25%,畸形率为1.75%。
4种试剂处理下,不同发育时期胚胎的去膜率见图4。除在受精后60 min和16细胞期外,其余各期使用三氮唑的去膜率均为最高,而在各发育时期,使用盐酸溶液处理胚胎去膜率均为最低。使用三氮唑处理受精后10 min后的胚胎去膜率最高,达到(25.75?1.71)%,显著高于其余各发育时期(P<0.05)。使用盐酸溶液处理16细胞期胚胎的去膜率最高,为(6.25?3.50)%,显著高于其余各发育时期(P<0.05);使用二硫苏糖醇处理16细胞期胚胎的去膜率最高,为(16.25?1.00)%,显著高于其余各发育时期(P<0.05);使用对氨基苯甲酸处理受精后60 min胚胎去膜率最高,为(14.25?2.50)%,但仅显著高于受精后10 min期胚胎、受精后20 min期胚胎、4细胞期胚胎和16细胞期胚胎(P<0.05)。4种试剂处理下,不同发育时期胚胎的畸形率见图5。各胚胎发育期使用三氮唑处理后的畸形率均为最低,使用对氨基苯甲酸处理从受精后10 min至2细胞期等各期胚胎的畸形率均为最高。使用三氮唑处理16细胞期胚胎畸形率最低,仅为(2.00?0.82)%,显著低于受精后20 min期、受精后30 min期和受精后60 min期(P<0.05);使用盐酸溶液处理受精后10 min期胚胎的畸形率最低,为(20.00?8.17)%,显著低于受精后40 min、受精后50 min、受精后60 min、2细胞、4细胞和16细胞期胚胎(P<0.05);使用二硫苏糖醇处理8细胞期胚胎的畸形率最低,为(11.50?2.38)%,显著低于其他各胚胎发育期(P<0.05);使用对氨基苯甲酸处理16细胞期胚胎的畸形率最低,为(1.75?1.26)%,显著低于除8细胞期外的其余各胚胎发育期(P<0.05)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中间球海胆与马粪海胆杂交家系早期生长比较和亲本配合力估计[J]. 张伟杰,韩奋杰,陈顺,刘奎,周秘,王宝锋,王中,刘明泰,湛垚垚,经晨晨,常亚青. 中国水产科学. 2017(05)
[2]牙鲆雌核发育研究进展[J]. 刘海金,侯吉伦,刘奕. 中国水产科学. 2017(04)
[3]太平洋鳕染色体核型及银染分析[J]. 范瑞,姜志强,李雅娟,高小强,钱聪,高敏. 水生生物学报. 2014(01)
[4]马粪海胆的染色体制备及组型分析[J]. 常亚青,曹洁,张彦娇,丁君. 大连水产学院学报. 2006(03)
[5]人工雌核发育诱导太平洋牡蛎四倍体的研究[J]. 李雅娟,李霞,毛连菊,丁君. 东北农业大学学报. 2006(03)
[6]光棘球海胆的主要卵黄蛋白cDNA序列分析[J]. 周遵春,包振民,董颖,赫崇波,韩家波,王丽梅. 中国水产科学. 2006(03)
[7]棘皮动物染色体的研究进展[J]. 周遵春,董颖,赫崇波,宋伦. 水产科学. 2005(12)
[8]中间球海胆雌核发育单倍体胚胎的初步研究[J]. 丁君,常亚青,曹学彬,张玉勇. 大连水产学院学报. 2004(01)
[9]紫外线照射对光棘球海胆精子遗传失活和授精能力的影响[J]. 高悦勉,孙祥山,刘馨. 水产科学. 2003(06)
[10]虾夷马粪海胆体腔细胞的类型及功能[J]. 李霞,王斌,刘静,孙健. 中国水产科学. 2003(05)
硕士论文
[1]太平洋牡蛎四倍体育种研究[D]. 李慷均.中国海洋大学 2004
本文编号：3268456
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