厚朴酚/和厚朴酚抗草鱼呼肠孤病毒作用机制研究
发布时间：2021-07-22 14:11
草鱼为我国主要的淡水养殖鱼类。随着养殖业的高密度化,病原微生物引起的病害频繁爆发,给养殖业带来了严重的经济损失。草鱼呼肠孤病毒（Grass Carp Reovirus,GCRV）引起的出血病是对草鱼危害最严重的病毒性疾病。出血病易感染、死亡率高,极大地影响和危害鱼种的健康和存活,一直以来对草鱼养殖业的发展造成影响。目前,水产养殖业主要利用农药和兽药来防治病害的发生。然而,有效的、广谱性的药物仍然缺乏,其中抗病毒药物种类更是有限,并且药效极易受到病毒变异和耐药性出现的影响。中草药具有低毒、易降解、环境友好、资源丰富、使用历史悠久等优点,是安全无公害水产原料药的理想来源。本研究首先从中草药中筛选出具有抗GCRV活性的品种,随后对其主要的活性化合物进行分离鉴定,获得具有较好抗GCRV活性的单体化合物;通过体内体外的感染试验,评价其抗GCRV的活性效果;之外,本研究探索了单体化合物抗病毒引起的细胞凋亡机理和与宿主细胞之间的作用关联,以期为开发水产抗病毒药物提供理论基础。本研究取得结果如下:1.中草药及单体化合物抗GCRV活性筛选选取30种中草药制备成浸膏,利用MTT法测定浸膏对CIK细胞的毒性...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
病毒识别机制（Akiraetal.2006）
安全浓度的上限，DMSO在溶液中的比例在千分之二以内即为安全浓度，最高使用比例为百分之一。表 2-4 DMSO对CIK细胞的毒性Table 2-4 Toxicity of DMSO on CIK cellsDMSO 含量 细胞活力百分之十 49.78%百分之一 85.51%千分之五 87.68%千分之二 95.33%千分之一 98%-102%2.2.2 GCRV 感染后病毒片段的时序表达细胞样品收取之后，经RNA提取，反转录，利用PCR进行半定量检测GCRV片段的表达情况。如图2-1，在感染2 h，病毒条带已经可以检测。早期研究表明，从感染4 h的切片可以看到脱去部分外层衣壳的不完整病毒粒子，为病毒早期转录阶段。因此，在后续试验中，选取4 h作为病毒的感染时间。
图 2-2 植物浸膏对 CIK 细胞的毒性作用。（A）正常 CIK 细胞；（B）安全浓度的浸膏对 CIK 细胞的作用；（C）高浓度的浸膏对 CIK 细胞的毒性作用。Fig. 2-2 Toxicity of plant extracts on CIK cells. (A) Normal CIK cells; (B) Effect on CIK cells by safeconcentration of extracts; (C) Toxicity on CIK cells by high concentration of extracts.表 2-5 本文中使用的植物，提取部位，CIK细胞中半数致死浓度和安全浓度Table 2-5 Plants used in this study, organic phase, CC50and safe concentration in CIK cells植物种类 提取部位 试剂 CC50（mg/L）安全浓度（mg/L）鸡骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 甲醇 370.93±23.63 224.49±16.24鸡骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 氯仿 332.02±14.79 198.82±10.88鸡骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 乙酸乙酯 389.56±13.08 235.38±9.41香元 Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg. 树枝 甲醇 470.10±16.16 256.53±11.58艾叶 Artemisia argyi Lévl. et Vant. 全草 氯仿 39.08±6.29 16.88±1.89乳香 Boswellia carterii Birdw. 树脂 氯仿 70.28±9.11 25.64±2.93鸦胆子 Brucea javanica (L.) Merr. 种子 甲醇 65.37±9.20 33.21±3.14肉桂 Cinnamomum cassia Presl. 树枝 甲醇 184.03±7.21 127.56±5.89
【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent advances in biosynthesis of bioactive compounds in traditional Chinese medicinal plants[J]. Lei Yang,Changqing Yang,Chenyi Li,Qing Zhao,Ling Liu,Xin Fang,Xiao-Ya Chen. Science Bulletin. 2016(01)
[2]Inhibition of hepatitis B virus replication by quercetin in human hepatoma cell lines[J]. Zhikui Cheng,Ge Sun,Wei Guo,Yayun Huang,Weihua Sun,Fei Zhao,Kanghong Hu. Virologica Sinica. 2015(04)
[3]Effects of mild hypothermia on the ROS and expression of caspase-3 m RNA and LC3 of hippocampus nerve cells in rats after cardiopulmonary resuscitation[J]. Jian Lu,Yi Shen,Hui-yin Qian,Li-jun Liu,Bao-chun Zhou,Yan Xiao,Jin-ning Mao,Guo-yin An,Ming-zhong Rui,Tao Wang,Chang-lai Zhu. World Journal of Emergency Medicine. 2014(04)
[4]甘草醇沉淀物有效部位对RSV作用的体外实验研究[J]. 蔡旭玲,黄晓晖,周俊立,邹志辉,陈思东. 中国热带医学. 2013(07)
[5]草鱼出血病防治的研究进展[J]. 徐东日,吴苏敏,胡文娟,李莲芳. 江西水产科技. 2013(02)
[6]草鱼出血病的综合防治措施[J]. 韩晓峰. 农业与技术. 2013(05)
[7]水生呼肠孤病毒基因组研究进展[J]. 殷亮,王庆,曾伟伟,李永刚,王英英,石存斌,吴淑勤. 动物医学进展. 2013(01)
[8]核苷类药物在慢性乙型病毒性肝炎中的应用[J]. 路显锋,王晓丹,冯建鹏. 医学综述. 2012(19)
[9]复方中药治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的Meta分析和重要的组分及有效成分[J]. 李娜,李海玲,郝立然,韩子岩. 临床医药实践. 2012(06)
[10]板蓝根中化学部位及其不同组合的抗病毒活性的筛选[J]. 叶未央,李祥,陈建伟. 辽宁中医杂志. 2011(12)
博士论文
[1]RNA基因干扰技术抑制草鱼呼肠孤病毒复制的研究[D]. 马杰.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]草鱼出血病细胞培养灭活疫苗微囊制备与口服免疫效果研究[D]. 李瑞伟.上海海洋大学 2013
[2]草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP7核酸疫苗的研究[D]. 徐诗英.南京师范大学 2012
本文编号：3297303
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
病毒识别机制（Akiraetal.2006）
安全浓度的上限，DMSO在溶液中的比例在千分之二以内即为安全浓度，最高使用比例为百分之一。表 2-4 DMSO对CIK细胞的毒性Table 2-4 Toxicity of DMSO on CIK cellsDMSO 含量 细胞活力百分之十 49.78%百分之一 85.51%千分之五 87.68%千分之二 95.33%千分之一 98%-102%2.2.2 GCRV 感染后病毒片段的时序表达细胞样品收取之后，经RNA提取，反转录，利用PCR进行半定量检测GCRV片段的表达情况。如图2-1，在感染2 h，病毒条带已经可以检测。早期研究表明，从感染4 h的切片可以看到脱去部分外层衣壳的不完整病毒粒子，为病毒早期转录阶段。因此，在后续试验中，选取4 h作为病毒的感染时间。
图 2-2 植物浸膏对 CIK 细胞的毒性作用。（A）正常 CIK 细胞；（B）安全浓度的浸膏对 CIK 细胞的作用；（C）高浓度的浸膏对 CIK 细胞的毒性作用。Fig. 2-2 Toxicity of plant extracts on CIK cells. (A) Normal CIK cells; (B) Effect on CIK cells by safeconcentration of extracts; (C) Toxicity on CIK cells by high concentration of extracts.表 2-5 本文中使用的植物，提取部位，CIK细胞中半数致死浓度和安全浓度Table 2-5 Plants used in this study, organic phase, CC50and safe concentration in CIK cells植物种类 提取部位 试剂 CC50（mg/L）安全浓度（mg/L）鸡骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 甲醇 370.93±23.63 224.49±16.24鸡骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 氯仿 332.02±14.79 198.82±10.88鸡骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 乙酸乙酯 389.56±13.08 235.38±9.41香元 Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg. 树枝 甲醇 470.10±16.16 256.53±11.58艾叶 Artemisia argyi Lévl. et Vant. 全草 氯仿 39.08±6.29 16.88±1.89乳香 Boswellia carterii Birdw. 树脂 氯仿 70.28±9.11 25.64±2.93鸦胆子 Brucea javanica (L.) Merr. 种子 甲醇 65.37±9.20 33.21±3.14肉桂 Cinnamomum cassia Presl. 树枝 甲醇 184.03±7.21 127.56±5.89
【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent advances in biosynthesis of bioactive compounds in traditional Chinese medicinal plants[J]. Lei Yang,Changqing Yang,Chenyi Li,Qing Zhao,Ling Liu,Xin Fang,Xiao-Ya Chen. Science Bulletin. 2016(01)
[2]Inhibition of hepatitis B virus replication by quercetin in human hepatoma cell lines[J]. Zhikui Cheng,Ge Sun,Wei Guo,Yayun Huang,Weihua Sun,Fei Zhao,Kanghong Hu. Virologica Sinica. 2015(04)
[3]Effects of mild hypothermia on the ROS and expression of caspase-3 m RNA and LC3 of hippocampus nerve cells in rats after cardiopulmonary resuscitation[J]. Jian Lu,Yi Shen,Hui-yin Qian,Li-jun Liu,Bao-chun Zhou,Yan Xiao,Jin-ning Mao,Guo-yin An,Ming-zhong Rui,Tao Wang,Chang-lai Zhu. World Journal of Emergency Medicine. 2014(04)
[4]甘草醇沉淀物有效部位对RSV作用的体外实验研究[J]. 蔡旭玲,黄晓晖,周俊立,邹志辉,陈思东. 中国热带医学. 2013(07)
[5]草鱼出血病防治的研究进展[J]. 徐东日,吴苏敏,胡文娟,李莲芳. 江西水产科技. 2013(02)
[6]草鱼出血病的综合防治措施[J]. 韩晓峰. 农业与技术. 2013(05)
[7]水生呼肠孤病毒基因组研究进展[J]. 殷亮,王庆,曾伟伟,李永刚,王英英,石存斌,吴淑勤. 动物医学进展. 2013(01)
[8]核苷类药物在慢性乙型病毒性肝炎中的应用[J]. 路显锋,王晓丹,冯建鹏. 医学综述. 2012(19)
[9]复方中药治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的Meta分析和重要的组分及有效成分[J]. 李娜,李海玲,郝立然,韩子岩. 临床医药实践. 2012(06)
[10]板蓝根中化学部位及其不同组合的抗病毒活性的筛选[J]. 叶未央,李祥,陈建伟. 辽宁中医杂志. 2011(12)
博士论文
[1]RNA基因干扰技术抑制草鱼呼肠孤病毒复制的研究[D]. 马杰.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]草鱼出血病细胞培养灭活疫苗微囊制备与口服免疫效果研究[D]. 李瑞伟.上海海洋大学 2013
[2]草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP7核酸疫苗的研究[D]. 徐诗英.南京师范大学 2012
本文编号：3297303
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