尼罗罗非鱼cyp19a1a多克隆抗体制备及高温诱导对其表达的影响
发布时间：2021-08-12 09:13
芳香化酶参与哺乳动物中枢神经系统的发育，调节神经内分泌，影响性行为和繁殖功能；并且可以调控非哺乳动物性腺分化，影响多种鱼类的性别分化和性别决定。芳香化酶由芳香化酶基因cyp19a1编码，在尼罗罗非鱼中，存在两种芳香化酶基因，分别为性腺型芳香化酶基因（cyp19a1a）和脑型芳香化酶基因（cyp19a1b），他们分别编码性腺型芳香化酶（P450aromA）和脑型芳香化酶（P450aromB）。其中性腺型芳香化酶主要在性腺中，在其它组织中很少表达甚至不表达。为了了解高温对尼罗罗非鱼性别分化相关基因表达的分子调控机制，本文通过RT-PCR技术获得尼罗罗非鱼cyp19a1a ORF区，并进行了原核表达，纯化了重组蛋白，免疫小鼠制备了多克隆抗体。对尼罗罗非鱼进行36℃高温处理，分析高温诱导前后尼罗罗非鱼性腺中cyp19a1a蛋白表达的变化情况。同时体外培养尼罗罗非鱼卵巢细胞，并对卵巢细胞进行高温处理，qRT-PCR分析离体情况下cyp19a1a以及hsp70的变化情况。1、从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA，反转录获得cDNA模板后，利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200bp片段，...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
雌性罗非鱼性腺分化期间，转录因子Foxl2对Cyp19a1a基因的调控机制[25]
5图 1.2 鱼类 Dmrt1 基因调控网络[27]Fig. 1.2 The fish Dmrt1 regulatory network[27].目前，在虹鳟、河豚、鲶鱼、石斑鱼、黑鲷等鱼类中克隆到 Dmrt1 基因，都表现出精巢高表达的两性差异表达模式。此外，在青鳉、河豚、罗非鱼中也克隆到 Dmrt4 基因；在青鳉、河豚中，Dmrt4 基因在精巢中高丰度表达，而在卵巢中则低丰度表达[30-31]。但是 Dmrt4 基因在罗非鱼的卵巢中则是特异性表达[32]。对于温度依赖型性别决定（TSD）的爬行动物来说，在热敏期，拟鳄龟（Chelydra serpentina）和红耳龟（Trachemys scripta）的 Dmrt1 在雄性决定温度下表达量升高，在雌性决定温度下表达量下降[33-34]。用雌二醇对性腺分化期的红耳龟胚胎进行处理，发现 Dmrt1 的表达水平下降，雌性个体数量增加。表明外源性雌激素可通过下调 Dmrt1 的表达使胚胎发生性逆转[35]。已有报道证实
17图 2.1 表达载体 pET-28a(+)的图谱及克隆表达区序列（引自 novagen pET 表达系统说明书）Fig. 2.1 Expression vector pET-28a (+) patterns and cloning expression sequences (from novagenpET expression system manual )
【参考文献】：
期刊论文
[1]高温诱导对尼罗罗非鱼性别分化及生长的影响[J]. 党广成,刘羽清,付佩胜,程安达,刘洋,赵燕,朱永安,宋憬愚,季相山. 渔业科学进展. 2011(05)
[2]脊尾白虾热休克蛋白HSP90基因的原核表达与鉴定[J]. 韩俊英,李健,李吉涛,陈萍,李华. 渔业科学进展. 2011(05)
[3]棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达[J]. 陈大玮,邓利,何凡,邱聪龄,马一见,刘志刚. 渔业科学进展. 2011(04)
[4]牙鲆dmrt1基因的克隆及其与P450arom基因的组织表达分析[J]. 文爱韵,尤锋,孙鹏,徐冬冬,吴志昊,马得友,李军,张培军. 海洋科学. 2010(11)
[5]人fgl2凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定[J]. 李学军,宋善俊,李永敢,阳文捷,许力,魏华萍. 华中科技大学学报(医学版). 2009(05)
[6]罗非鱼性别三系配套技术研究进展[J]. 万松良,雷晓中,万珊. 水产科学. 2009(09)
[7]Sex Determination Mechanisms in Fish[J]. ZHANG Quanqi,SUN Xiaohua,QI Jie,WANG Zhigang,WANG Xinglian,WANG Xubo,and ZHAI Teng College of Marine Life Sciences,Ocean University of China,Qingdao 266003,P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2009(02)
[8]基于微卫星标记的5个尼罗罗非鱼品系的遗传多样性分析[J]. 梁宏伟,李忠,罗相忠,王长忠,呼光富,邹桂伟,杨永铨. 生物多样性. 2009(01)
[9]半滑舌鳎FTZ-F1 cDNA克隆及表达分析（英文）[J]. 邓思平,陈松林,刘本伟. 动物学研究. 2008(06)
[10]南方鲇肾细胞系（SMK-Ⅰ）的建立及其细胞骨架的研究[J]. 霍静,洪锡钧,王志坚,刘小红,王咏梅. 西南大学学报(自然科学版). 2007(12)
博士论文
[1]尼罗罗非鱼性别决定机制和性别相关的分子标记[D]. 杨东.华中农业大学 2006
本文编号：3338041
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
雌性罗非鱼性腺分化期间，转录因子Foxl2对Cyp19a1a基因的调控机制[25]
5图 1.2 鱼类 Dmrt1 基因调控网络[27]Fig. 1.2 The fish Dmrt1 regulatory network[27].目前，在虹鳟、河豚、鲶鱼、石斑鱼、黑鲷等鱼类中克隆到 Dmrt1 基因，都表现出精巢高表达的两性差异表达模式。此外，在青鳉、河豚、罗非鱼中也克隆到 Dmrt4 基因；在青鳉、河豚中，Dmrt4 基因在精巢中高丰度表达，而在卵巢中则低丰度表达[30-31]。但是 Dmrt4 基因在罗非鱼的卵巢中则是特异性表达[32]。对于温度依赖型性别决定（TSD）的爬行动物来说，在热敏期，拟鳄龟（Chelydra serpentina）和红耳龟（Trachemys scripta）的 Dmrt1 在雄性决定温度下表达量升高，在雌性决定温度下表达量下降[33-34]。用雌二醇对性腺分化期的红耳龟胚胎进行处理，发现 Dmrt1 的表达水平下降，雌性个体数量增加。表明外源性雌激素可通过下调 Dmrt1 的表达使胚胎发生性逆转[35]。已有报道证实
17图 2.1 表达载体 pET-28a(+)的图谱及克隆表达区序列（引自 novagen pET 表达系统说明书）Fig. 2.1 Expression vector pET-28a (+) patterns and cloning expression sequences (from novagenpET expression system manual )
【参考文献】：
期刊论文
[1]高温诱导对尼罗罗非鱼性别分化及生长的影响[J]. 党广成,刘羽清,付佩胜,程安达,刘洋,赵燕,朱永安,宋憬愚,季相山. 渔业科学进展. 2011(05)
[2]脊尾白虾热休克蛋白HSP90基因的原核表达与鉴定[J]. 韩俊英,李健,李吉涛,陈萍,李华. 渔业科学进展. 2011(05)
[3]棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达[J]. 陈大玮,邓利,何凡,邱聪龄,马一见,刘志刚. 渔业科学进展. 2011(04)
[4]牙鲆dmrt1基因的克隆及其与P450arom基因的组织表达分析[J]. 文爱韵,尤锋,孙鹏,徐冬冬,吴志昊,马得友,李军,张培军. 海洋科学. 2010(11)
[5]人fgl2凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定[J]. 李学军,宋善俊,李永敢,阳文捷,许力,魏华萍. 华中科技大学学报(医学版). 2009(05)
[6]罗非鱼性别三系配套技术研究进展[J]. 万松良,雷晓中,万珊. 水产科学. 2009(09)
[7]Sex Determination Mechanisms in Fish[J]. ZHANG Quanqi,SUN Xiaohua,QI Jie,WANG Zhigang,WANG Xinglian,WANG Xubo,and ZHAI Teng College of Marine Life Sciences,Ocean University of China,Qingdao 266003,P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2009(02)
[8]基于微卫星标记的5个尼罗罗非鱼品系的遗传多样性分析[J]. 梁宏伟,李忠,罗相忠,王长忠,呼光富,邹桂伟,杨永铨. 生物多样性. 2009(01)
[9]半滑舌鳎FTZ-F1 cDNA克隆及表达分析（英文）[J]. 邓思平,陈松林,刘本伟. 动物学研究. 2008(06)
[10]南方鲇肾细胞系（SMK-Ⅰ）的建立及其细胞骨架的研究[J]. 霍静,洪锡钧,王志坚,刘小红,王咏梅. 西南大学学报(自然科学版). 2007(12)
博士论文
[1]尼罗罗非鱼性别决定机制和性别相关的分子标记[D]. 杨东.华中农业大学 2006
本文编号：3338041
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3338041.html
