凡纳滨对虾中T-2毒素及其残留物的分子毒性作用
发布时间：2021-08-19 08:17
T-2毒素是由镰饱菌产生的一类倍半萜烯类化合物,并且我国对虾饲料中存在普遍的污染,对虾饲喂了受T-2毒素污染的饲料以后,毒素会在对虾体内蓄积残留引起水产养殖业的潜在危险,毒素进一步通过食物链进入人体内,造成食物质量安全问题。前期课题组研究发现T-2毒素对对虾产生一系列危害,比如生产性能下降、消化系统损伤、解毒酶异常、免疫系统和抗氧化系统抑制以及肌肉品质降低等。而T-2毒素对生物大分子的研究比较少。生物大分子包括脂类、蛋白质、DNA和RNA。前期研究已发现T-2毒素对Ω-3不饱和脂肪酸的影响较大,采用差异蛋白质组学法发现了T-2毒素对精氨酸激酶产生较大影响,但是仅凭差异蛋白点的判断存在明显的证据不足,易造成较大误差,缺乏Westernblotting和RT-PCR实验数据佐证。而对于T-2毒素对对虾中的DNA和RNA鲜有报道。课题组前期用对虾体内的T-2毒素及其残留物处理RAW264.7细胞,采用RT-PCR方法探索了其对RAW264.7细胞内JAK/STAT信号通路关键因子mRNA表达量的影响。但是仅凭mRNA表达量的数据不能充分证明T-2毒素、隐蔽态T-2毒素和对虾体内的T-2毒素残...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 T-2毒素
1.1.1 化学结构
1.1.2 物理化学性质
1.2 T-2毒素的危害
1.2.1 T-2毒素的基因与细胞毒性
1.2.2 其他毒性
1.3 水产饲料中T-2毒素的污染状况
1.4 T-2毒素对凡纳滨对虾的毒性
1.5 本课题研究的目的、内容和意义
1.5.1 研究目的
1.5.2 研究内容
1.5.3 研究意义
2 T-2毒素对对虾分子毒性标记蛋白的鉴定
2.1 材料与仪器
2.1.1 样品
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器
2.2 试验方法
2.2.1 一抗的设计与合成
2.2.2 Western Blotting实验检测精氨酸激酶表达量
2.2.3 定时定量PCR测定精氨酸激酶的mRNA表达
2.3 结果
2.3.1 精氨酸激酶抗体设计
2.3.2 对虾体内精氨酸激酶的表达量
2.3.3 剂量组对虾体内精氨酸激酶mRNA的表达量测定
2.4 讨论
2.5 结论
3 T-2毒素对对虾DNA、RNA的毒作用
3.1 材料与仪器
3.1.1 样品
3.1.2 仪器
3.2 试验方法
3.2.1 响应面法优化T-2毒素与DNA作用条件
3.2.2 T-2毒素对对虾DNA的影响
3.2.3 T-2毒素经口对对虾DNA的影响
3.2.4 T-2毒素对对虾RNA的影响
3.3 结果
3.3.1 毛细管法分析T-2毒素对小牛胸腺DNA黏度作用的时间和浓度的优化
3.3.2 紫外光谱分析T-2毒素与小牛胸腺DNA作用的时间浓度优化
3.3.3 体外加T-2毒素对对虾DNA的影响（体外实验）
3.3.4 T-2毒素对剂量组对虾DNA的影响（体内试验）
3.3.5 T-2毒素对虾RNA的影响
3.4 讨论
3.5 总结
4 T-2毒素及其隐蔽态T-2对RAW264.7细胞JAK/STAT信号通路关键信号分子表达量的影响
4.1 材料与试剂
4.1.1 材料
4.1.2 试剂
4.1.3 仪器设备
4.2 试验方法
4.2.1 试剂的配制
4.2.2 Western blot方法测定JAK/STAT信号通路相关信号因子的蛋白表达量测定
4.3 结果
4.3.1 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 JAK1-3蛋白表达水平的影响
4.3.2 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 P-JAK1-3蛋白表达水平的影响
4.3.3 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 STAT1-3蛋白表达水平的影响
4.3.4 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 P-STAT1-3蛋白表达水平的影响
4.4 讨论
4.5 结论
5 总结与展望
5.1 总结
5.2 展望
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
附录
本文编号：3351056
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 T-2毒素
1.1.1 化学结构
1.1.2 物理化学性质
1.2 T-2毒素的危害
1.2.1 T-2毒素的基因与细胞毒性
1.2.2 其他毒性
1.3 水产饲料中T-2毒素的污染状况
1.4 T-2毒素对凡纳滨对虾的毒性
1.5 本课题研究的目的、内容和意义
1.5.1 研究目的
1.5.2 研究内容
1.5.3 研究意义
2 T-2毒素对对虾分子毒性标记蛋白的鉴定
2.1 材料与仪器
2.1.1 样品
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器
2.2 试验方法
2.2.1 一抗的设计与合成
2.2.2 Western Blotting实验检测精氨酸激酶表达量
2.2.3 定时定量PCR测定精氨酸激酶的mRNA表达
2.3 结果
2.3.1 精氨酸激酶抗体设计
2.3.2 对虾体内精氨酸激酶的表达量
2.3.3 剂量组对虾体内精氨酸激酶mRNA的表达量测定
2.4 讨论
2.5 结论
3 T-2毒素对对虾DNA、RNA的毒作用
3.1 材料与仪器
3.1.1 样品
3.1.2 仪器
3.2 试验方法
3.2.1 响应面法优化T-2毒素与DNA作用条件
3.2.2 T-2毒素对对虾DNA的影响
3.2.3 T-2毒素经口对对虾DNA的影响
3.2.4 T-2毒素对对虾RNA的影响
3.3 结果
3.3.1 毛细管法分析T-2毒素对小牛胸腺DNA黏度作用的时间和浓度的优化
3.3.2 紫外光谱分析T-2毒素与小牛胸腺DNA作用的时间浓度优化
3.3.3 体外加T-2毒素对对虾DNA的影响（体外实验）
3.3.4 T-2毒素对剂量组对虾DNA的影响（体内试验）
3.3.5 T-2毒素对虾RNA的影响
3.4 讨论
3.5 总结
4 T-2毒素及其隐蔽态T-2对RAW264.7细胞JAK/STAT信号通路关键信号分子表达量的影响
4.1 材料与试剂
4.1.1 材料
4.1.2 试剂
4.1.3 仪器设备
4.2 试验方法
4.2.1 试剂的配制
4.2.2 Western blot方法测定JAK/STAT信号通路相关信号因子的蛋白表达量测定
4.3 结果
4.3.1 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 JAK1-3蛋白表达水平的影响
4.3.2 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 P-JAK1-3蛋白表达水平的影响
4.3.3 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 STAT1-3蛋白表达水平的影响
4.3.4 T-2毒素及mT-2s对RAW264.7 P-STAT1-3蛋白表达水平的影响
4.4 讨论
4.5 结论
5 总结与展望
5.1 总结
5.2 展望
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
附录
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