泥蚶血红蛋白及其多肽的抗菌功能和应用研究
发布时间：2021-08-24 14:12
课题组前期克隆得到了三种泥蚶血红蛋白亚基基因，并从mRNA表达上初步发现了泥蚶血红蛋白参与了抗菌免疫反应，本研究拟从蛋白水平上探索泥蚶血红蛋白是否具有抗菌活性，进一步研究泥蚶血红蛋白抗菌功能及机制。本研究以基地养殖的泥蚶为试验材料，采用凝胶排阻色谱将泥蚶血红蛋白分离纯化，由此获得三种血红蛋白，根据测定蛋白质天然状态下分子量的标准曲线推测这三种物质分别为杂蛋白、异源四聚体、同源二聚体。Tricine-SDS-PAGE的电泳结果进一步证明已经分离纯化出泥蚶的两种血红蛋白。将纯化的两种血红蛋白采用胰蛋白酶酶解，并使用反相C-18柱进行分离纯化。通过琼脂糖弥散法检测两种血红蛋白及酶解多肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的抗菌活性。结果显示泥蚶血红蛋白对金黄色葡萄球菌和三种弧菌没有抑菌活性，而泥蚶血红蛋白酶解多肽只对副溶血弧菌、溶藻弧菌有抑菌活性。为进一步定量抗菌活性，采用96孔板微量对倍稀释法测定了泥蚶血红蛋白纯化样品以及异源四聚体酶解多肽的最低抑菌浓度（MIC值），发现泥蚶血红蛋白HbⅠ对大肠杆菌的MIC为0.125mg/mL，对枯草芽...
【文章来源】：宁波大学浙江省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泥蚶血红蛋白的SephacrylS-100凝胶过滤柱层析
过程中血红素的丢失，这三个电泳条带的分子量基本与理论分子量相符，由此进一步确定凝胶层析出的第二个峰为异源四聚体 HbⅡ，第三个峰为同源二聚体 HbⅠ。图2.2 泥蚶血红蛋白样品的Tricine-SDS-PAGE 电泳图Fig.2.2 Tricine-SDS-PAGE of Tegillarca granosa hemoglobin preparations1 泥蚶血红蛋白 Sephacryl S-100 峰 1；2 泥蚶血红蛋白 Sephacryl S-100 峰 2；3 泥蚶血红蛋白 Sephacryl S-100 峰 2；M：低分子量标准蛋白2.3.3 Tricine-SDS-PAGE 条带的质谱分析获得泥蚶血红蛋白纯品后，再经Tricine-SDS-PAGE 电泳，将条带2 和3 进行质谱分析，结果如图 2.3、图2.4 所示，条带2 的两条链分别与不等壳毛蚶（Scapharcainaequivalvis）HB-ⅡA 和梯形毛蚶（Anadara trapezia ）血红蛋白的 β 链最相似；而条带3 与不等壳毛蚶的Hb Ⅰ（同源二聚体）最相似。因此鉴定结果为峰 2、峰3 分别为泥蚶血红蛋白Ⅱ（异源四聚体）、泥蚶血红蛋白Ⅰ（同源二聚体）。
泥蚶血红蛋白及其多肽的抗菌功能和应用研究20图2.3 泥蚶Hb Tricine-SDS-PAGE 条带2 的质谱图Fig.2.3 The mass spectrogram of Tricine-SDS-PAGE Band 2 from Tegillarcagranosa图2.4 泥蚶Hb Tricine-SDS-PAGE 条带3 的质谱图Fig.2.4 The mass spectrogram of Tricine-SDS-PAGE Band 2 from Tegillarcagranosa2.3.4 泥蚶血红蛋白天然状态分子量的确定三种标准蛋白经 Sephaeryl S-100 凝胶过滤柱层析后，得到标准蛋白的洗脱曲线，根据此标准蛋白的洗脱曲线，以标准蛋白分子量的对数为横坐标，洗脱体积为纵坐标，绘
【参考文献】：
期刊论文
[1]厚壳贻贝血细胞及血清抗菌肽的分析[J]. 杨丽佳,武梅,王信超,李楠楠,杨林,陈铭杰,廖智. 中国农学通报. 2011(23)
[2]文蛤蛋白抗菌肽制备工艺优化与抗菌活性研究[J]. 姚兴存,邱春江. 安徽农业科学. 2010(31)
[3]马氏珠母贝鳃组织抗菌活性的研究[J]. 张英霞,邹瑗徽,满初日嘎,周永灿. 水产科学. 2010(08)
[4]贻贝抗菌肽的研究进展[J]. 于道德,宁璇璇,任贵如,官曙光,高翔,刘梦侠,李绍彬,关健,于发盛,刘洪军. 海洋科学. 2009(11)
[5]水产动物抗菌肽研究的最新进展[J]. 张家国. 大连水产学院学报. 2009(S1)
[6]天然抗菌肽的研究进展及应用前景[J]. 吴甜甜,杨洁. 生物技术通报. 2009(01)
[7]人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究[J]. 周新娥,欧阳运薇,潘小玲,何跃东,李恒,邓璐霞,石艳娥,彭媛媛,赵媛,黄宁. 四川大学学报(医学版). 2008(03)
[8]泥蚶线粒体COI和16S rRNA基因片段序列研究[J]. 郑文娟,朱世华,沈锡权,叶央芳,潘志崇. 宁波大学学报(理工版). 2008(01)
[9]贝类免疫学研究新进展[J]. 张朝霞,王军,丁少雄,苏永全. 厦门大学学报(自然科学版). 2006(S2)
[10]扇贝多肽对紫外线辐照小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用[J]. 阎春玲,张国梁,战松梅,刘万顺,王跃军,王春波. 中国海洋药物. 2005(06)
博士论文
[1]毛蚶（Scapharca Kagoshimensis）血红蛋白的类酚氧化酶性质及其抗菌活性研究[D]. 荆昭.中国海洋大学 2011
[2]皱纹盘鲍和栉孔扇贝抗菌肽的研究[D]. 洪旭光.中国海洋大学 2008
本文编号：3360140
【文章来源】：宁波大学浙江省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泥蚶血红蛋白的SephacrylS-100凝胶过滤柱层析
过程中血红素的丢失，这三个电泳条带的分子量基本与理论分子量相符，由此进一步确定凝胶层析出的第二个峰为异源四聚体 HbⅡ，第三个峰为同源二聚体 HbⅠ。图2.2 泥蚶血红蛋白样品的Tricine-SDS-PAGE 电泳图Fig.2.2 Tricine-SDS-PAGE of Tegillarca granosa hemoglobin preparations1 泥蚶血红蛋白 Sephacryl S-100 峰 1；2 泥蚶血红蛋白 Sephacryl S-100 峰 2；3 泥蚶血红蛋白 Sephacryl S-100 峰 2；M：低分子量标准蛋白2.3.3 Tricine-SDS-PAGE 条带的质谱分析获得泥蚶血红蛋白纯品后，再经Tricine-SDS-PAGE 电泳，将条带2 和3 进行质谱分析，结果如图 2.3、图2.4 所示，条带2 的两条链分别与不等壳毛蚶（Scapharcainaequivalvis）HB-ⅡA 和梯形毛蚶（Anadara trapezia ）血红蛋白的 β 链最相似；而条带3 与不等壳毛蚶的Hb Ⅰ（同源二聚体）最相似。因此鉴定结果为峰 2、峰3 分别为泥蚶血红蛋白Ⅱ（异源四聚体）、泥蚶血红蛋白Ⅰ（同源二聚体）。
泥蚶血红蛋白及其多肽的抗菌功能和应用研究20图2.3 泥蚶Hb Tricine-SDS-PAGE 条带2 的质谱图Fig.2.3 The mass spectrogram of Tricine-SDS-PAGE Band 2 from Tegillarcagranosa图2.4 泥蚶Hb Tricine-SDS-PAGE 条带3 的质谱图Fig.2.4 The mass spectrogram of Tricine-SDS-PAGE Band 2 from Tegillarcagranosa2.3.4 泥蚶血红蛋白天然状态分子量的确定三种标准蛋白经 Sephaeryl S-100 凝胶过滤柱层析后，得到标准蛋白的洗脱曲线，根据此标准蛋白的洗脱曲线，以标准蛋白分子量的对数为横坐标，洗脱体积为纵坐标，绘
【参考文献】：
期刊论文
[1]厚壳贻贝血细胞及血清抗菌肽的分析[J]. 杨丽佳,武梅,王信超,李楠楠,杨林,陈铭杰,廖智. 中国农学通报. 2011(23)
[2]文蛤蛋白抗菌肽制备工艺优化与抗菌活性研究[J]. 姚兴存,邱春江. 安徽农业科学. 2010(31)
[3]马氏珠母贝鳃组织抗菌活性的研究[J]. 张英霞,邹瑗徽,满初日嘎,周永灿. 水产科学. 2010(08)
[4]贻贝抗菌肽的研究进展[J]. 于道德,宁璇璇,任贵如,官曙光,高翔,刘梦侠,李绍彬,关健,于发盛,刘洪军. 海洋科学. 2009(11)
[5]水产动物抗菌肽研究的最新进展[J]. 张家国. 大连水产学院学报. 2009(S1)
[6]天然抗菌肽的研究进展及应用前景[J]. 吴甜甜,杨洁. 生物技术通报. 2009(01)
[7]人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究[J]. 周新娥,欧阳运薇,潘小玲,何跃东,李恒,邓璐霞,石艳娥,彭媛媛,赵媛,黄宁. 四川大学学报(医学版). 2008(03)
[8]泥蚶线粒体COI和16S rRNA基因片段序列研究[J]. 郑文娟,朱世华,沈锡权,叶央芳,潘志崇. 宁波大学学报(理工版). 2008(01)
[9]贝类免疫学研究新进展[J]. 张朝霞,王军,丁少雄,苏永全. 厦门大学学报(自然科学版). 2006(S2)
[10]扇贝多肽对紫外线辐照小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用[J]. 阎春玲,张国梁,战松梅,刘万顺,王跃军,王春波. 中国海洋药物. 2005(06)
博士论文
[1]毛蚶（Scapharca Kagoshimensis）血红蛋白的类酚氧化酶性质及其抗菌活性研究[D]. 荆昭.中国海洋大学 2011
[2]皱纹盘鲍和栉孔扇贝抗菌肽的研究[D]. 洪旭光.中国海洋大学 2008
本文编号：3360140
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3360140.html
