斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）NF-κB信号通路相关基因的分子克隆及其功能初步研究
发布时间：2021-09-01 05:21
石斑鱼是我国以及东南亚各国重要的海水养殖鱼类,经济价值极高。随着石斑鱼养殖密度的增加以及海水养殖环境的不断恶化,各种疾病的爆发对石斑鱼养殖业造成了巨大的经济损失。新加坡石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus, SGIV）是从养殖患病石斑鱼中分离到的一种高致病性病毒病原,可导致石斑鱼死亡率达90%以上。NF-κB信号转导通路参与调节机体免疫和发育的多种生理活动,是联系机体天然免疫系统和特异性免疫系统的纽带。本研究以斜带石斑鱼为对象,成功克隆鉴定了三个与NF-κB信号转导相关的基因,分别编码石斑鱼NF-κB因子抑制蛋白IκBα两种亚型（命名为EcIκBαA和EcIκBαB）和抑制蛋白1κB激酶IKKα（命名为EcIKKα）。在此基础上,本文进一步分析了IκBα的两种亚型在SGIV感染中的功能,为探索鱼NF-κB信号通路的免疫调节功能奠定了理论基础。EcIκBαA和EcIκBαB分别编码308和318个氨基酸,其中EcIκBαA和EcIκBαB与斑马鱼的IκBαA和IκBαB分别有59%和53%的同源性。氨基酸序列比对分析结果表明,EcIκBαA和EcIκB...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1 免疫系统概述和鱼类免疫系统研究进展
1.1 免疫系统概述
1.2 鱼类免疫系统的研究进展
2 NF-κB信号转导通路
2.1 NF-κB信号转导通路概述
2.2 NF-κB信号通路的分子生物学基础
2.3 NF-κB信号转导通路的激活及其调节机制
3 NF-κB与动物免疫信号转导研究进展
3.1 NF-κB与无脊椎动物免疫信号转导研究
3.2 NF-κB与脊椎动物免疫信号转导研究
4 病毒利用宿主的NF-KB信号通路实现免疫逃避和快速增值
5 石斑鱼及其疾病研究
5.1 石斑鱼研究进展
5.2 石斑鱼虹彩病毒研究进展
6 研究的目的和意义
第二章 石斑鱼两种类型的IκBα的分子克隆和功能分析
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物
2.2 细胞、病毒及其它微生物病原
2.3 质粒载体和受体菌株
2.4 细胞培养基及细菌培养基
2.5 酶类及相关标准品
2.6 实验用试剂盒
2.7 其他溶液和试剂
2.8 常用的生物信息学分析软件和网站
3 实验方法和步骤
3.1 GS细胞培养和传代
3.2 病毒的增殖
3.3 用GS细胞测定SGIV病毒滴度
3.4 鱼体组织样品采集及免疫刺激
3.5 总RNA样品的提取
3.6 设计RACE引物,获得石斑鱼IκBα的cDNA序列
3.7 石斑鱼两种类型的EcIκBα基因全长的获得
3.8 半定量PCR检测石斑鱼IκBα的mRNA表达谱
3.9 qPCR检测不同刺激后石斑鱼头肾组织中IκBα表达变化
3.10 EcIκBαA和EcIκBαB亚细胞定位分析
3.11 两种类型的EcIκBα对NF-κB因子p65和c-Rel的调节
3.12 过表达EcIκBαA和EcIκBαB对SGIV复制的影响
3.13 数据分析软件
4 实验结果与分析
4.1 EcIκBαA和EcIκBαB cDNA全长扩增和序列分析
4.2 EcIκBαA和EcIκBαB基因组全长扩增和序列分析
4.3 EcIκBαA和EcIκBαB氨基酸序列比对及进化关系分析
4.4 石斑鱼EcIκBαA和EcIκBαB基因表达模式分析
4.5 石斑鱼EcIκBαA和EcIκBαB亚细胞定位分析
4.6 过表达EcIκBαA和EcIκBαB对NF-κB的调节
4.7 过表达EcIκBαA和EcIκBαB对SGIV复制的影响
5 讨论
6 小结
第三章 石斑鱼IκB激酶EcIKKα基因的分离和功能研究
1 前言
2 实验材料和试剂
3 实验方法
3.1 设计引物,利用RACE技术获得IκBα基因序列
3.2 石斑鱼IKKα基因的表达模式分析
3.3 聚肌胞苷酸(Poly I：C)免疫刺激石斑鱼
3.4 生物统计学软件分析
4 实验结果与分析
4.1 石斑鱼IKKα基因扩增和序列分析
4.2 EcIKKα和已报道物种的IKKα氨基酸序列比对及进化关系分析
4.3 EcIKKα基因表达模式分析
4.4 polyI：C刺激后EcIKKα的变化
5 讨论
6 小结
全文总结和今后工作展望
全文总结
今后可进一步开展以下工作
参考文献
略缩词
攻读硕士学位期间发表的和待发表的论文
攻读硕士期间参加的学术交流活动
致谢
本文编号：3376343
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1 免疫系统概述和鱼类免疫系统研究进展
1.1 免疫系统概述
1.2 鱼类免疫系统的研究进展
2 NF-κB信号转导通路
2.1 NF-κB信号转导通路概述
2.2 NF-κB信号通路的分子生物学基础
2.3 NF-κB信号转导通路的激活及其调节机制
3 NF-κB与动物免疫信号转导研究进展
3.1 NF-κB与无脊椎动物免疫信号转导研究
3.2 NF-κB与脊椎动物免疫信号转导研究
4 病毒利用宿主的NF-KB信号通路实现免疫逃避和快速增值
5 石斑鱼及其疾病研究
5.1 石斑鱼研究进展
5.2 石斑鱼虹彩病毒研究进展
6 研究的目的和意义
第二章 石斑鱼两种类型的IκBα的分子克隆和功能分析
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物
2.2 细胞、病毒及其它微生物病原
2.3 质粒载体和受体菌株
2.4 细胞培养基及细菌培养基
2.5 酶类及相关标准品
2.6 实验用试剂盒
2.7 其他溶液和试剂
2.8 常用的生物信息学分析软件和网站
3 实验方法和步骤
3.1 GS细胞培养和传代
3.2 病毒的增殖
3.3 用GS细胞测定SGIV病毒滴度
3.4 鱼体组织样品采集及免疫刺激
3.5 总RNA样品的提取
3.6 设计RACE引物,获得石斑鱼IκBα的cDNA序列
3.7 石斑鱼两种类型的EcIκBα基因全长的获得
3.8 半定量PCR检测石斑鱼IκBα的mRNA表达谱
3.9 qPCR检测不同刺激后石斑鱼头肾组织中IκBα表达变化
3.10 EcIκBαA和EcIκBαB亚细胞定位分析
3.11 两种类型的EcIκBα对NF-κB因子p65和c-Rel的调节
3.12 过表达EcIκBαA和EcIκBαB对SGIV复制的影响
3.13 数据分析软件
4 实验结果与分析
4.1 EcIκBαA和EcIκBαB cDNA全长扩增和序列分析
4.2 EcIκBαA和EcIκBαB基因组全长扩增和序列分析
4.3 EcIκBαA和EcIκBαB氨基酸序列比对及进化关系分析
4.4 石斑鱼EcIκBαA和EcIκBαB基因表达模式分析
4.5 石斑鱼EcIκBαA和EcIκBαB亚细胞定位分析
4.6 过表达EcIκBαA和EcIκBαB对NF-κB的调节
4.7 过表达EcIκBαA和EcIκBαB对SGIV复制的影响
5 讨论
6 小结
第三章 石斑鱼IκB激酶EcIKKα基因的分离和功能研究
1 前言
2 实验材料和试剂
3 实验方法
3.1 设计引物,利用RACE技术获得IκBα基因序列
3.2 石斑鱼IKKα基因的表达模式分析
3.3 聚肌胞苷酸(Poly I：C)免疫刺激石斑鱼
3.4 生物统计学软件分析
4 实验结果与分析
4.1 石斑鱼IKKα基因扩增和序列分析
4.2 EcIKKα和已报道物种的IKKα氨基酸序列比对及进化关系分析
4.3 EcIKKα基因表达模式分析
4.4 polyI：C刺激后EcIKKα的变化
5 讨论
6 小结
全文总结和今后工作展望
全文总结
今后可进一步开展以下工作
参考文献
略缩词
攻读硕士学位期间发表的和待发表的论文
攻读硕士期间参加的学术交流活动
致谢
本文编号：3376343
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