基于新型纳米金核酸试纸条对灿烂弧菌快速检测的研究
发布时间：2021-09-18 10:46
随着水产养殖行业的快速发展,由水产病原菌引发的病害问题日益严重,给水产养殖行业带来了难以估量的经济损失。灿烂弧菌（Vibrio splendidus）作为一种条件致病性的细菌分布在盐湖和海洋环境中,宿主范围广泛,可以感染双壳贝类、刺参、鱼类等多种海水养殖的动物,并使其成批死亡。目前检测灿烂弧菌的方法主要有建立在蛋白质水平上的免疫学检测技术（ELISA、Dot-ELISA、免疫层析法、免疫荧光抗体技术、间接荧光抗体检测法等）和建立在基因水平上的分子生物学检测技术（核酸探针检测技术、PCR法、LAMP技术等）。然而,这些技术存在着成本高、耗时长、依赖专业人员和检测设备、易产生假阳性等一系列的缺点。因此,当务之急需要建立一种快速、简便、高效、安全的灿烂弧菌检测新技术。本研究综合运用核酸外切酶Ⅲ（ExonucleaseⅢ,ExoⅢ）进行循环酶切反应和纳米金标记DNA探针检测技术,建立一种灵敏高效的核酸试纸条检测法,实现对灿烂弧菌的可视化快速检测。利用循环酶切反应放大检测信号,并通过金标核酸探针利用纳米金聚集的显色原理实现可视化检测。让DNA探针Probe 1和AuNPs结合形成复合物,用于制备...
【文章来源】：鲁东大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
012-2018年全国水产品损失量
鲁东大学硕士学位论文1第1章绪论1.1水产病害简介我国水产养殖行业近年来发展迅速，然而由于集约化养殖与工厂化模式的大规模建立，使养殖病害问题也随之而来[1-2]。如果病害不能进行有效防治，水产养殖户们将会承受难以想象的经济损失。水产养殖行业中的病害问题已经变成影响整个行业可持续蓬勃发展的重要阻碍[3-4]。水产养殖动物，如鲍鱼、海参、对虾、大鲵等品种的病害发生，会造成很多养殖地区发生大面积的减产甚至绝产，每年导致数十亿元乃至数百亿的经济损失[5-9]。我国每年水产品总产量已超过5000万吨，但由于渔业灾情造成的直接经济损失超过150亿元，2012-2018年全国水产品养殖面积与水产品总产量如图1.1所示，水产品损失产量与直接经济损失如图1.2所示。图1.12012-2018年全国水产品的总产量与养殖面积Figure1.1AquacultureareaandtotaloutputofaquaticproductsinChinafrom2012-2018图1.22012-2018年全国水产品损失量Figure1.2LossofaquaticproductsinChinafrom2012-2018
的结合，然后利用标记在抗原或者抗体上的纳米金进行显色，最终出现肉眼可见的红色条带，从而实现对样本的检测[96]。试纸条的检测方法非常简单：把待检测的样品滴至样品垫，若待检测样品中存在目标物，目标物便会被连接至标记粒子上，然后与对目标物有特异性的生物受体相结合，接着在毛细作用下穿过反应膜，通过测试线时与复合物结合的目标物能够跟检测线上的另一受体结合而显色，然后与质控线上的受体特异结合而显色，证明试纸条有效，结果为阳性；若待检测样品中不存在目标物，便只有质控线可以显色，结果为阴性[97]。图1.3试纸条的结构图Figure1.3Structureofteststrip1.5.3试纸条的优点试纸条检测法灵敏度很高，特异性很强，出现假阳性结果的可能性比较低；检测步骤简便，检测时间快，仅需30min，而且不需要借助任何的仪器，也无需专业人员，肉眼便可观察检测结果；携带方便，可以在任何时间和任何地点进行检测，真正实现现场检测，同时检测结果可以长期的保存；每个试纸条所用试剂量很少，制作过程不需要昂贵的仪器，成本低廉，是一种既经济又简便的可以进行现场筛查的检测方法[98]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]海洋生物技术与水产养殖生物病害防治[J]. 曹洪松. 农业与技术. 2020(03)
[2]胶体金免疫层析法快速检测桔青霉素的研究[J]. 陈尔净,徐影,马骉,崔海峰,张明洲. 中国计量大学学报. 2019(04)
[3]免疫层析试纸条检测技术的研究进展[J]. 周梦婕,李小盼,代荣阳,阎锡蕴,段德民. 检验医学与临床. 2019(22)
[4]基于环介导等温扩增技术的生物传感器研究进展[J]. 林晟豪,杜再慧,张秀杰,黄昆仑,刘清亮,许文涛. 生物技术进展. 2019(06)
[5]PCR-毛细管电泳法在小龙虾中三种食源性致病菌检测中的应用评价[J]. 刘纯成,李兵兵,刘靓,李双姝,侯海燕. 中国校医. 2019(11)
[6]基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因快速检测方法的建立[J]. 陈昌国,陈秋圆,侯兵兵,刘新萍,董优优. 现代检验医学杂志. 2019(06)
[7]基于无偿献血者乙型肝炎病毒酶免检测和核酸检测的结果研究[J]. 谭奇周,邬吉兵. 临床医药文献电子杂志. 2019(78)
[8]PCR技术在水产动物疾病检测中的应用[J]. 李伟哲,刘露,张辉,肖勤. 水产科学. 2019(05)
[9]2018年长沙市水产养殖病害监测分析[J]. 康洋. 当代水产. 2019(09)
[10]食品过敏原检测技术研究进展[J]. 郭颖慧,霍胜楠,孟静,孙潇慧. 食品安全质量检测学报. 2019(16)
博士论文
[1]两种基于核酸扩增技术的阿萨希毛孢子菌快速检测和鉴定方法的建立及应用[D]. 张德全.中国人民解放军陆军军医大学 2019
[2]副溶血弧菌分子生物学检测方法的建立及其应用[D]. 蒋鲁岩.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]犬瘟热病毒AS-PCR核酸试纸条的研究[D]. 陈峥嵘.华中农业大学 2019
[2]催化发卡自组装信号放大试纸条传感器用于癌症标志物快速检测[D]. 聂阿秀.华中农业大学 2019
[3]基于核酸等温循环与金纳米粒子信号放大策略构建肿瘤标志物光信号传感器[D]. 余巧.青岛大学 2019
[4]旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立[D]. 张小波.吉林大学 2018
[5]基于功能化核酸探针的设计及其在生化检测中应用的研究[D]. 唐永琼.江西师范大学 2018
[6]核酸适配体试纸条法快速检测黄曲霉毒素B1残留[D]. 张珊.北京化工大学 2018
[7]核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大荧光生物传感器检测DNA[D]. 袁丹.湘潭大学 2018
[8]基于核酸探针和纳米酶的生物传感设计及其在癌症标志物检测中的应用[D]. 徐齐.华中科技大学 2018
[9]基于HCR技术对流感病毒H1N1新型可视化检测方法的建立[D]. 宋广萍.黑龙江八一农垦大学 2017
[10]基于纳米金—核酸适体探针的试纸条传感器用于疾病标志物的检测研究[D]. 高雅.湖北大学 2017
本文编号：3399998
【文章来源】：鲁东大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
012-2018年全国水产品损失量
鲁东大学硕士学位论文1第1章绪论1.1水产病害简介我国水产养殖行业近年来发展迅速，然而由于集约化养殖与工厂化模式的大规模建立，使养殖病害问题也随之而来[1-2]。如果病害不能进行有效防治，水产养殖户们将会承受难以想象的经济损失。水产养殖行业中的病害问题已经变成影响整个行业可持续蓬勃发展的重要阻碍[3-4]。水产养殖动物，如鲍鱼、海参、对虾、大鲵等品种的病害发生，会造成很多养殖地区发生大面积的减产甚至绝产，每年导致数十亿元乃至数百亿的经济损失[5-9]。我国每年水产品总产量已超过5000万吨，但由于渔业灾情造成的直接经济损失超过150亿元，2012-2018年全国水产品养殖面积与水产品总产量如图1.1所示，水产品损失产量与直接经济损失如图1.2所示。图1.12012-2018年全国水产品的总产量与养殖面积Figure1.1AquacultureareaandtotaloutputofaquaticproductsinChinafrom2012-2018图1.22012-2018年全国水产品损失量Figure1.2LossofaquaticproductsinChinafrom2012-2018
的结合，然后利用标记在抗原或者抗体上的纳米金进行显色，最终出现肉眼可见的红色条带，从而实现对样本的检测[96]。试纸条的检测方法非常简单：把待检测的样品滴至样品垫，若待检测样品中存在目标物，目标物便会被连接至标记粒子上，然后与对目标物有特异性的生物受体相结合，接着在毛细作用下穿过反应膜，通过测试线时与复合物结合的目标物能够跟检测线上的另一受体结合而显色，然后与质控线上的受体特异结合而显色，证明试纸条有效，结果为阳性；若待检测样品中不存在目标物，便只有质控线可以显色，结果为阴性[97]。图1.3试纸条的结构图Figure1.3Structureofteststrip1.5.3试纸条的优点试纸条检测法灵敏度很高，特异性很强，出现假阳性结果的可能性比较低；检测步骤简便，检测时间快，仅需30min，而且不需要借助任何的仪器，也无需专业人员，肉眼便可观察检测结果；携带方便，可以在任何时间和任何地点进行检测，真正实现现场检测，同时检测结果可以长期的保存；每个试纸条所用试剂量很少，制作过程不需要昂贵的仪器，成本低廉，是一种既经济又简便的可以进行现场筛查的检测方法[98]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]海洋生物技术与水产养殖生物病害防治[J]. 曹洪松. 农业与技术. 2020(03)
[2]胶体金免疫层析法快速检测桔青霉素的研究[J]. 陈尔净,徐影,马骉,崔海峰,张明洲. 中国计量大学学报. 2019(04)
[3]免疫层析试纸条检测技术的研究进展[J]. 周梦婕,李小盼,代荣阳,阎锡蕴,段德民. 检验医学与临床. 2019(22)
[4]基于环介导等温扩增技术的生物传感器研究进展[J]. 林晟豪,杜再慧,张秀杰,黄昆仑,刘清亮,许文涛. 生物技术进展. 2019(06)
[5]PCR-毛细管电泳法在小龙虾中三种食源性致病菌检测中的应用评价[J]. 刘纯成,李兵兵,刘靓,李双姝,侯海燕. 中国校医. 2019(11)
[6]基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因快速检测方法的建立[J]. 陈昌国,陈秋圆,侯兵兵,刘新萍,董优优. 现代检验医学杂志. 2019(06)
[7]基于无偿献血者乙型肝炎病毒酶免检测和核酸检测的结果研究[J]. 谭奇周,邬吉兵. 临床医药文献电子杂志. 2019(78)
[8]PCR技术在水产动物疾病检测中的应用[J]. 李伟哲,刘露,张辉,肖勤. 水产科学. 2019(05)
[9]2018年长沙市水产养殖病害监测分析[J]. 康洋. 当代水产. 2019(09)
[10]食品过敏原检测技术研究进展[J]. 郭颖慧,霍胜楠,孟静,孙潇慧. 食品安全质量检测学报. 2019(16)
博士论文
[1]两种基于核酸扩增技术的阿萨希毛孢子菌快速检测和鉴定方法的建立及应用[D]. 张德全.中国人民解放军陆军军医大学 2019
[2]副溶血弧菌分子生物学检测方法的建立及其应用[D]. 蒋鲁岩.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]犬瘟热病毒AS-PCR核酸试纸条的研究[D]. 陈峥嵘.华中农业大学 2019
[2]催化发卡自组装信号放大试纸条传感器用于癌症标志物快速检测[D]. 聂阿秀.华中农业大学 2019
[3]基于核酸等温循环与金纳米粒子信号放大策略构建肿瘤标志物光信号传感器[D]. 余巧.青岛大学 2019
[4]旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立[D]. 张小波.吉林大学 2018
[5]基于功能化核酸探针的设计及其在生化检测中应用的研究[D]. 唐永琼.江西师范大学 2018
[6]核酸适配体试纸条法快速检测黄曲霉毒素B1残留[D]. 张珊.北京化工大学 2018
[7]核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大荧光生物传感器检测DNA[D]. 袁丹.湘潭大学 2018
[8]基于核酸探针和纳米酶的生物传感设计及其在癌症标志物检测中的应用[D]. 徐齐.华中科技大学 2018
[9]基于HCR技术对流感病毒H1N1新型可视化检测方法的建立[D]. 宋广萍.黑龙江八一农垦大学 2017
[10]基于纳米金—核酸适体探针的试纸条传感器用于疾病标志物的检测研究[D]. 高雅.湖北大学 2017
本文编号：3399998
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