单壁碳纳米管载嗜水气单胞菌外膜蛋白亚单位疫苗的评价
发布时间：2021-09-30 19:12
当前,中国水产养殖业规模已经达到世界水产养殖业的70%,且比重呈现逐年递增的趋势。与此同时,病原菌的传播与侵染给水产养殖业造成的损失也越来越严重。嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophilia）作为一种常见的条件致病菌能够使鱼类患败血症,引发出血性败血症、眼眶蜂窝织炎和眼球破裂等症状,最终导致鱼类死亡。此外,它还是人-畜-鱼共患致病菌,严重时甚至可能危害到人类的生命健康。疫苗免疫被认为是抑制嗜水气单胞菌感染最有效的途径之一,但是疫苗存在佐剂、运送、免疫方式等问题,使其规模化生产与使用受到限制。因此,当前迫切需要筛选有效的免疫保护性候选蛋白以及一种良好的疫苗递送佐剂以控制该疾病的传播。课题组前期研究发现,在缺铁环境下高表达的嗜水气单胞菌外膜蛋白能够显著增强斑马鱼的免疫能力,提示铁离子相关外膜蛋白可能作为细菌的疫苗候选蛋白,但是这些候选蛋白的免疫效果可能因为佐剂以及免疫宿主方式等问题受到限制。因此寻找一种更持续、稳定和高效的佐剂是当前此类渔用疫苗开发研究的热点问题。近年来,纳米材料中的单壁碳纳米管（Single-walled carbon nanotube,SWCNTs）通过功能...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
靶基因PCR扩增条带M:DNAmaker;条带1–7分别为:AHA_0854(1071bp),AHA_1512(1863bp),AHA_1698
单壁碳纳米管载嗜水气单胞菌外膜蛋白亚单位疫苗的评价1.2 重组菌双酶切验证通过质粒提取试剂盒对阳性菌提取重组载体。根据表 5 所示重组载体酶切位，选取对应酶对重组载体进行双酶切验证，在双酶切之后，目的片段和质粒分，如 3-2 图中所示，由图可知，双酶切后核酸胶检测出来两条带，分别为 pET-32a粒大小 5900bp 位置以及各自目的基因大小位置，发现与序列大小一致，结果确。
图 3-3 重组蛋白诱导表达M: 蛋白Marker; 条带1, 大肠杆菌BL21阴性对照; 条带 2–8分别为:A0KGK5, P5587A0KIY3, A0KPP0, A0KH89, A0KHR9 和 A0KLQ6.Fig 3-3 The expression of recombinants induced by IPTG.ne M: protein Marker; Lane 1, E.coli BL21 negative control; lanes 2–8: A0KGK5, P55870,A0KIY3, A0KPP0, A0KH89, A0KHR9 and A0KLQ6, respectively. 重组菌诱导表达后纯化将重组菌进行大量表达并进行超声破碎后，离心收集上清与沉淀，通过-PAGE 检测不同蛋白的表达位置，并根据方法中上清沉淀的不同纯化方法在中进行亲和层析纯化，所得蛋白纯化结果经 SDS-PAGE 检测如图所示。从可知，目的蛋白条带都较清晰且相对单一，而且目的条带位置与对应蛋白大致，表明纯化蛋白效果好，无明显杂带，7 种蛋白皆成功过表达并纯化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗生素的发展史及滥用现象——与超级细菌战斗到底[J]. 姚易安. 当代化工研究. 2018(11)
[2]2018世界渔业和水产养殖状况报告[J]. 小远. 渔业致富指南. 2018(21)
[3]抗生素滥用的调查及研究[J]. 彭远雷. 贵阳中医学院学报. 2018(05)
[4]疫苗及其在水生动物疾病预防中的应用(三)[J]. 王玉堂. 中国水产. 2018(09)
[5]铜绿假单胞菌OprL基因DNA疫苗的免疫效果[J]. 宫强,郭洁真,牛明福,阮梦蝶,杜珍奇. 中国预防兽医学报. 2018(08)
[6]抗生素滥用的常见形式及合理用药建议[J]. 徐莉,安怡,王正艳,华丰. 中国药物经济学. 2018(08)
[7]带鱼酶解蛋白亚铁螯合物对泥鳅免疫特性的影响[J]. 林慧敏,袁宁,李颖杰,邓尚贵,张宾,霍健聪. 水产学报. 2018(06)
[8]抗生素滥用的危害及与合理使用对策[J]. 徐心昱. 智能城市. 2016(07)
[9]溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗的构建及其免疫效果评价[J]. 张燕飞,庞欢瑛,简纪常,鲁义善,汤菊芬,吴灶和. 水产学报. 2015(10)
[10]壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗的制备及其对斜带石斑鱼的口服免疫效果[J]. 任燕,张小江,陶家发,李宁求,石存斌,吴淑勤. 中国生物制品学杂志. 2015(02)
本文编号：3416482
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
靶基因PCR扩增条带M:DNAmaker;条带1–7分别为:AHA_0854(1071bp),AHA_1512(1863bp),AHA_1698
单壁碳纳米管载嗜水气单胞菌外膜蛋白亚单位疫苗的评价1.2 重组菌双酶切验证通过质粒提取试剂盒对阳性菌提取重组载体。根据表 5 所示重组载体酶切位，选取对应酶对重组载体进行双酶切验证，在双酶切之后，目的片段和质粒分，如 3-2 图中所示，由图可知，双酶切后核酸胶检测出来两条带，分别为 pET-32a粒大小 5900bp 位置以及各自目的基因大小位置，发现与序列大小一致，结果确。
图 3-3 重组蛋白诱导表达M: 蛋白Marker; 条带1, 大肠杆菌BL21阴性对照; 条带 2–8分别为:A0KGK5, P5587A0KIY3, A0KPP0, A0KH89, A0KHR9 和 A0KLQ6.Fig 3-3 The expression of recombinants induced by IPTG.ne M: protein Marker; Lane 1, E.coli BL21 negative control; lanes 2–8: A0KGK5, P55870,A0KIY3, A0KPP0, A0KH89, A0KHR9 and A0KLQ6, respectively. 重组菌诱导表达后纯化将重组菌进行大量表达并进行超声破碎后，离心收集上清与沉淀，通过-PAGE 检测不同蛋白的表达位置，并根据方法中上清沉淀的不同纯化方法在中进行亲和层析纯化，所得蛋白纯化结果经 SDS-PAGE 检测如图所示。从可知，目的蛋白条带都较清晰且相对单一，而且目的条带位置与对应蛋白大致，表明纯化蛋白效果好，无明显杂带，7 种蛋白皆成功过表达并纯化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗生素的发展史及滥用现象——与超级细菌战斗到底[J]. 姚易安. 当代化工研究. 2018(11)
[2]2018世界渔业和水产养殖状况报告[J]. 小远. 渔业致富指南. 2018(21)
[3]抗生素滥用的调查及研究[J]. 彭远雷. 贵阳中医学院学报. 2018(05)
[4]疫苗及其在水生动物疾病预防中的应用(三)[J]. 王玉堂. 中国水产. 2018(09)
[5]铜绿假单胞菌OprL基因DNA疫苗的免疫效果[J]. 宫强,郭洁真,牛明福,阮梦蝶,杜珍奇. 中国预防兽医学报. 2018(08)
[6]抗生素滥用的常见形式及合理用药建议[J]. 徐莉,安怡,王正艳,华丰. 中国药物经济学. 2018(08)
[7]带鱼酶解蛋白亚铁螯合物对泥鳅免疫特性的影响[J]. 林慧敏,袁宁,李颖杰,邓尚贵,张宾,霍健聪. 水产学报. 2018(06)
[8]抗生素滥用的危害及与合理使用对策[J]. 徐心昱. 智能城市. 2016(07)
[9]溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗的构建及其免疫效果评价[J]. 张燕飞,庞欢瑛,简纪常,鲁义善,汤菊芬,吴灶和. 水产学报. 2015(10)
[10]壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗的制备及其对斜带石斑鱼的口服免疫效果[J]. 任燕,张小江,陶家发,李宁求,石存斌,吴淑勤. 中国生物制品学杂志. 2015(02)
本文编号：3416482
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3416482.html
